野生沉香的鉴别方法

【目的】建立有效、准确、科学的野生沉香鉴别技术,为沉香的鉴定和品质评价体系建立提供参考依据。【方法】采用醇溶性浸出物含量、显色反应、薄层色谱分析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)方法,对10批次野生沉香进行鉴别。【结果】10批次野生沉香的醇溶性浸出物含量整体较高,明显大于《中华人民共和国药典》(2015年版)规定的10.0%;野生沉香的显色反应除呈现人工沉香的樱红色或浅樱红外,还出现紫堇色、浅红色和浅紫色在内的多样性显色,可辅助鉴别野生沉香;薄层色谱操作简单,节省材料,且野生沉香样品在薄层鉴别中呈现清晰的荧光斑点和较好的分离效果,对于大部分野生沉香样品可通过薄层色谱进行基础鉴别;通过相似度评价、峰面积比较,建立10批次野生沉香的HPLC指纹图谱,并确定9个野生沉香共有特征峰,确定野生和人工沉香HPLC特征指纹图谱的差异性。【结论】基于各方法的优势及精准程度,本文提出在显微鉴别的基础上,通过醇溶性浸出物含量、显色反应、薄层色谱分析和HPLC的指纹图谱及特征峰鉴别野生沉香,可为沉香品质评价体系建立提供参考。     

不同产地沉香的高效液相色谱指纹特征

【目的】针对不同地区所产沉香品质差别较大以及传统沉香产地鉴别主要依赖经验判断等问题,研究不同产地沉香的高效液相色谱(HPLC)指纹特征,探讨色谱指纹分析技术对沉香产地溯源的可行性,为沉香资源品质评价和原产地保护提供科学依据。【方法】以36批次来自3个不同产地的沉香为研究对象,优化高效液相色谱分离条件,基于"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"获得色谱峰保留时间、峰面积信息,筛选不同产地沉香的高效液相色谱指纹图谱,并利用指纹特征峰变量进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA),建立沉香产地判别方法。【结果】不同产地沉香高效液相色谱指纹图谱的85个特征峰变量分析发现,莞香系沉香的色酮种类最多,相对含量最高;星洲系沉香的沉香四醇色谱峰极高,其余色酮相对含量较低;惠安系沉香的色酮种类较多,相对含量较莞香系稍低,较星洲系稍高,依其产地地理位置分布,在3个产地中体现出一定过渡性;主成分分析显示,样品基本上可依据产地不同聚合成3类;正交偏最小二乘判别分析对训练集和检验集样品产地的判别正确率均为100%。【结论】不同产地沉香2-(2-苯乙基)色酮类成分的组成和含量存在较大差异,显示出一定地域性,利用高效液相色谱指纹图谱结合正交偏最小二乘判别分析可判别沉香产地,为濒危珍贵沉香的产地溯源提供一种新的鉴别方法。     

10批次伪品沉香鉴别方法的相关性

【目的】针对目前沉香市场真假混杂、难以鉴别的现状,采用多种方法对10批次伪品沉香进行鉴别,分析各方法之间的相关性及可替代性,探究沉香真伪鉴别的有效手段,为沉香产业的健康发展提供帮助,为识别伪制沉香、完善沉香的质量标准提供依据。【方法】采用《药典》(2015版)中规定的醇溶性浸出物含量、显色反应、薄层色谱分析以及具有专属性分辨2-(2-苯乙基)色酮类成分的高效液相色谱(HPLC)分析沉香鉴别方法,对10批次伪品沉香进行鉴别,并通过对比8批次正品人工沉香样品和对照样品,探索各方法的准确性以及相关性。【结果】在10批次伪品沉香样品中,其醇溶性浸出物含量均达到要求;显色反应对颜色的判断具有强烈的主观性;薄层色谱分析鉴别具有专属性,但受沉香成分多样性、含量不一等因素影响,部分样品判别荧光斑点不清晰;HPLC方法制样简单,节省原料,可有效避免人为主观因素影响,能够对复杂沉香成分进行分离,通过对照指纹图谱6个特征峰和4个辅助峰,判断结果精确度高。【结论】各方法之间相辅相成,互相佐证,考虑到沉香样品检测过程需降低时间和原料成本,基于各方法的优势及精准程度,建议在沉香真伪鉴别中采用以醇溶性浸出物含量、HPLC指纹图谱结合显微鉴别为主,显色反应和薄层色谱分析为辅的方法。     

HPLC结合多变量统计建立野生与人工沉香的识别模型

为了建立野生、人工沉香的识别方法,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对48批次沉香的HPLC图谱进行分析,并结合多变量统计筛选野生、人工沉香识别特征峰,建立两者的Fisher线性识别模型和偏最小二乘判别法(PLS-DA)识别模型。结果表明:野生、人工沉香HPLC图谱的色酮种类及含量具有较大差异,为识别模型的建立提供了依据;多变量统计筛选出的9个色谱峰变量具有代表性,可用于识别模型的建立;所建立的Fisher识别模型对野生沉香和3年以内人工沉香的判别正确率均为100%,可用于野生与人工沉香的识别; Fisher线性识别模型的线性判别函数:y=-0.193 14x_1-0.086 49x_2+0.073 02x_3+0.136 65x_4+0.053 01x_5-0.058 5x_6+0.097 58x_7+0.040 24x_8-0.130 12x_9,y_1=-1.555 3、y_2=2.641 8、临界值y_0=0.543 3。     

牡丹花瓣高效液相色谱指纹图谱研究

以不同引种地不同品种的9个新鲜牡丹花瓣为实验材料,采用高效液相色谱法(HPLC)测定9个不同引种地不同品种牡丹花瓣样品中的化学成分。液相色谱条件为Eclipse plus C18色谱柱(4.6×150mm,5μm),流动相为乙腈-1%乙酸梯度洗脱,流速0.8mL/min,检测波长360nm,柱温为35℃。通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会)进行相似度分析,建立9个样品牡丹花瓣的指纹图谱,为科学评价与有效控制牡丹花瓣产品质量提供新方法。结果表明,本研究建立的分析方法有较好的重复性,9个引种牡丹花瓣样品指纹图谱共有6个主要共有峰,可作为鉴别引种地牡丹花瓣质量的主要依据。     

人面果叶HPLC指纹图谱研究

为建立人面果叶高效液相色谱(HPLC)的指纹图谱,采用Agilent C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-甲醇-0.5%磷酸水溶液为流动相(梯度洗脱),在流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长289nm,进样量10μL的色谱条件下,以福木苷,GB2a,藤黄双黄酮,GB1a,volkensiflavone为对照品,绘制了44批人面果叶HPLC图谱,通过相似度评价、主成分分析、聚类分析等3种方法对44批来源于不同产地、季节的人面果叶的指纹图谱进行了研究。结果表明:44批样品相似度在0.6～0.9之间,确定了11个共有峰,并指认其中4个峰,分别为福木苷、GB2a、藤黄双黄酮、GB1a;不同批次人面果叶的指纹图谱均有一定差异,而且季节对人面果叶成分的影响大于产地的影响。该方法不仅可用于人面果叶的品种鉴别和质量评价,还可为下一步制定人面果叶的质量标准提供参考。     

人工诱导结香技术所产沉香的质量评价

选取不同产地的10批次偏心灌注法人工沉香样品进行质量评价,并与利用火钻方式结香4年的人工沉香样品进行对比。结果显示:所选10批次人工诱导沉香样品均符合LY/T2904-2017《沉香》的要求,沉香样品品质稳定,色酮类化学成分与火钻方式结香4年的人工诱导沉香样品相近。     

真菌诱导白木香所结沉香质量分析

为探究真菌诱导白木香Aquilaria sinensis结香7个月所产生沉香的主要化学成分及其质量是否符合行业标准,以石湾和星岛湖两地真菌诱导结香所产生的沉香为研究对象,测定其醇溶性提取物的含量,观察显色反应、采用高效液相分析其指纹图谱,利用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)分析其主要化学成分。结果表明:石湾和星岛湖的沉香醇溶性提取物分别为(19.29±8.30)%、(22.54±5.96)%,显色反应呈现紫红色和淡紫色,高效液相特征图谱出现6个特征峰,符合沉香行业标准;石湾、星岛湖沉香分别具有12,15个倍半萜类物质,占30.80%、30.06%,分别具有4,5个2-(2-苯乙基)色酮类物质,占24.81%、30.62%。研究利用真菌结香剂诱导石湾和星岛湖两地的白木香结香,结香7个月的沉香可以达到《沉香》(LY/T 2904—2017)行业标准,并且倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮类物质含量达到55.61%、60.08%。     

基于SRAP标记的土沉香遗传多样性分析

【目的】在我国野生土沉香被大量被采伐,种质资源越来越少,甚至面临消失的情况下,为了利用与保护野生土沉香提供理论依据,采用SRAP分子标记对其种源遗传多样性进行分析。【方法】基于我国11个土沉香种源群体和越南2个土沉香种源群体的SRAP结果,应用POPGEN32软件对遗传多样性参数进行计算。【结果】各群体Nei's基因多样度指数的变化范围为0.1715~0.5394,Shannon多样性指数的变化范围为0.2491~0.4837,多态位点百分比的变化范围为42.03%~76.81%。运用GenAlex 6.4软件对土沉香13个群体进行分子方差分析(Analysis of molecular variance,AMOVA),结果显示有30%的遗传变异来自土沉香群体间,70%的遗传变异来自土沉香群体内。【结论】13个土沉香种源有中度的遗传多样性和遗传分化,野生土沉香种质资源正日渐稀少,应该加强资源的保护与利用。     

沉香的化学成分和品质评价研究进展

沉香的香味和药效取决于所含化学成分,也是决定沉香品质的重要因素。文中总结了沉香化学成分、真伪鉴定及质量分级方法等技术的进展,提出基于沉香特征化学成分建立真伪识别技术、分级方法和沉香产品的认证体系,逐步实现野生沉香与人工沉香、原产地及树种的鉴别,以规范沉香产业健康发展。     

黄藤果实血竭成分的提取和鉴别

通过测定比较黄藤果实粉末样品溶液和血竭高氯酸盐、血竭和龙血竭等,对照了样品溶液的薄层层析图、紫外分光图谱和高效液相图谱.结果表明:黄藤果实粉末薄层层析图有一个斑点与血竭相同,但与血竭素高氯酸盐和龙血竭都不同;黄藤果实粉末紫外分光图谱有2个峰与血竭和血竭素高氯酸盐相同,但与龙血竭完全不同;黄藤果实粉末高效液相色谱图有1个峰与血竭素高氯酸盐和血竭相同,但与龙血竭完全不同.据此可知黄藤果实粉末组成成分与血竭部分相同,与龙血竭完全不同,黄藤果实粉末是否具有血竭的功能还需要进一步研究.     

液相色-质谱结合化学计量学用于国产沉香品质分析

乙醇提取物含量与沉香品质有一定相关性,为寻找国产沉香品质的指标化合物,以液相色谱质谱联用(LC-MS)分析不同品质国产沉香乙醇提取物的化学组成特征,并用化学计量学方法分析样品间化学组成差异。结果显示,不同品级沉香的主要成分都是色酮类,根据结构可分为四类;通过偏最小二乘法判别法(PLS-DA)确认了三个对差异分析贡献较大的谱峰,通过特征碎片确认指标化合物为2-(2-苯乙基)色酮衍生物,为沉香品质的判别提供科学依据。     

塔拉粉酶解废液HPLC指纹图谱及2个主成分含量测定方法研究

建立了一种同时分析塔拉粉酶解废液中奎宁酸(QA)与没食子酸(GA)的HPLC方法，并进行方法学验证，进一步绘制其HPLC指纹图谱，结合相似度、聚类分析等手段对不同批次塔拉粉酶解废液进行评价。研究结果表明：该方法选择215 nm、流动相乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液、乙腈梯度5%～20%、流速1.0 mL/min、柱温30℃作为奎宁酸与没食子酸的色谱分析条件；奎宁酸标准曲线线性范围为1.25～20 g/L、其检测限为0.5 g/L,没食子酸标准曲线线性范围为0.062 5～1 g/L、其检测限为5 mg/L;该方法精密度、重复性、稳定性、加样回收试验的RSD均小于5%;奎宁酸与没食子酸平均加样回收率分别为100.87%、 99.65%;12批次废液试样指纹图谱分析相似度均大于0.95;可通过聚类分析分为两类，10号和11号样品聚为一类，其余样品聚为一类；计算得到奎宁酸质量浓度为482.3 g/L,没食子酸质量浓度为35.7 g/L。     

HPLC法测定木豆中牡荆苷和异牡荆苷含量

建立了测定木豆叶、茎、根中牡荆苷和异牡荆苷含量的高效液相色谱分析方法.色谱柱为HIQ Sil C18V(250 mm × 4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水-甲酸(体积比35:64.74:0.26); 检测波长330 nm;流速1 mL/min;进样量10 μL; 柱温30 ℃.在2～200 mg/L 牡荆苷、异牡荆苷质量浓度与色谱峰面积线性关系良好; 牡荆苷峰面积精密度的相对标准偏差(RSD)最大为2.93 %,重复性RSD为2.91 %,加样回收率为97.38 %; 异牡荆苷峰面积精密度的RSD最大为2.69 %,重复性RSD为3.37 %,加样回收率为98.63 %.木豆叶、茎、根中牡荆苷、异牡荆苷的质量分数分别为0.768、 0.066、 0.183 mg/g 和0.799、 0.139、 0.013 mg/g.叶中牡荆苷和异牡荆苷含量明显高于茎、根中的含量,可以作为大规模获得牡荆苷、异牡荆苷的资源.     

连翘药材化学成分指纹图谱研究

以山西省绛县种植的连翘为研究对象,研究其高效液相色谱指纹图谱。结果表明：1）供试的8种样品共有18个共有峰,且指纹图谱相似度均在0.90以上,说明各来源地样品虽然存在差异,但同时也具有较好的相关性。2）样品2,样品3,样品4中各活性成分含量相对较高;样品6,样品7,样品8中各活性成分含量相对较低,提示连翘药材在种植时应选择在阳坡或河槽边。     

桃果实中多菌灵残留量的高效液相色谱-串联质谱结合QuEchERS检测方法

为分析桃果实中多菌灵残留量,采用QuEchERS方法对样品进行前处理,建立了快速检测桃果实中多菌灵残留量的高效液相-串联质谱法。样品经乙腈提取、QuEchERS方法脱水盐析和萃取净化,采用InertsilODS-2(5mm,150mm×2.1mm)色谱柱进行分离,梯度洗脱,在多反应检测模式下测定。经方法学验证,在添加不同浓度的标准溶液时,多菌灵残留量的平均回收率为89.5%~94.4%,RSD为1.95%。该方法简单、快速,准确度高,能够满足多菌灵残留分析的要求。     

高效液相色谱测定金银花中科罗索酸的含量

采用高效液相色谱测定金银花中科罗索酸含量的结果表明:科罗索酸进样浓度为0.20~1.01 mg/m L时,与峰面积呈良好的线性关系;通过重复性试验、稳定性试验和回收率对该方法的精确度和准确度进行验证表明:该方法精确度和准确度良好,可用于金银花中科罗索酸含量的测定。     

沉香的资源分布、识别与贸易现状

通过对沉香树种的资源分布、木材特征、识别技术及市场现状进行分析,提出现阶段应在构建具有明确身份信息的沉香标准样品库的基础上,完善沉香化学指纹图谱数据库,建立标准化的沉香鉴定技术体系,以实现沉香的资源保护及可持续发展。     

氰—马微胶囊剂的高效液相色谱分析方法

高效液相色谱广泛用于医药、化工、农药等领域的定量分析，具有灵敏度高、性能稳定、可靠重复性好、自动化程度高等优点。本文使用日本ShimadzuLC－9A高效液相色谱仪，探索和研究氰戊菊酯、马拉硫磷测定的液相色谱条件以及氰－马微胶囊剂的有效含量、悬浮率以及成囊率分析的样品前处理技术。     

兴安白芷茎水溶性成分HPLC图谱分析

以兴安白芷茎水溶性化学成分为研究对象,运用HPLC指纹图谱的分析方法,考察了洗脱时间、柱温、流速、检测波长、进样量对HPLC图谱质量的影响。结果表明,以Hypersil GOLD C18柱为色谱柱,甲醇-2％甲酸为流动相梯度洗脱,紫外检测波长：340nm,柱温：25℃,进样量：20μL,流速：1mL/min,洗脱时间：82min为洗脱条件,各色谱峰响应较均匀,色谱信息较全,分离度好,保留时间适中。