和田黑鸡与普通商品鸡体液免疫水平差异分析

利用硫酸铵盐析法提取免疫球蛋白,采用SDS聚丙烯酰胺法和玫瑰花环试验的结果判定和田黑鸡(未注射疫苗)和普通商品鸡(注射疫苗)体液免疫水平的差异,并分析疫苗对于家禽免疫力的影响。因和田地区大部分的和田黑鸡都不予以注射疫苗,导致和田黑鸡的免疫力和抗病力都较低,极大影响了和田黑鸡的商品效益和品种的品质,而普通肉用商品鸡因出生就开始免疫,免疫力和抵抗力都优于和田黑鸡,所以本试验分别提取未注射疫苗的和田黑鸡和普通商品鸡的外周血,通过密度梯度离心法分离血清,采用盐析法提取血清中的免疫球蛋白IgG,然后将提取的IgG进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,对比相同浓度下,和田黑鸡和普通商品鸡IgG的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳轻链和重链的蛋白量,同时,进行和田黑鸡和普通商品鸡EAC花环对比试验,分析疫苗注射对免疫力影响的高低。通过试验可以看出普通商品鸡IgG的轻链和重链的蛋白量都显著大于和田黑鸡,并且经统计普通商品鸡的EAC花环率为23.42%,和田黑鸡的EAC的花环率为15.3%,运用统计学对两个样本进行差异显著性检验分析,可以看出普通商品鸡的EAC花环率比和田黑鸡的EAC花环率差异显著(0.01P≤0.05),试验结果显示疫苗注射后的普通商品鸡体液免疫水平要远远高于和田黑鸡,疫苗注射能够刺激普通商品鸡机体主动产生特异性免疫应答增强免疫力,预防疾病,这为和田黑鸡疫苗注射的推广和后期的疫苗研发提供了必要的参考依据,通过选择合适的疫苗并进行免疫,是保证家禽养殖的成功和工作人员人身安全的重要手段。     

和田黑鸡mtDNA控制区D-Loop序列分析

试验旨在测定和田黑鸡mtDNA D-Loop序列,并分析其与其他5个品种鸡间的同源性及亲缘关系。结果发现,和田黑鸡mtDNA D-Loop序列全长为1230 bp,用DNAMAN软件进行序列比对,发现和田黑鸡与GenBank登录的5个品种鸡的同源性都在98%以上,测定样品mtDNA D-Loop核苷酸序列中富含A+T。聚类分析结果显示,和田黑鸡与丝羽乌骨鸡、红原鸡亲缘关系较近。     

以MTT比色法检测鸡脾淋巴细胞转化效果

本研究运用ＭＴＴ比色法以正交试验对鸡脾脏淋巴细胞转化的最佳条件（ｃｏｎＡ量、血清种类和浓度）进行了研究。结果表明，无论血清种类和浓度如何，低剂量ＣｏｎＡ（２．５～１０μｇ／ｍｌ）可以获得较好的转化效果。当ＣｏｎＡ的量确定时，低浓度鸡血清（０．５％～１．２５％）的转化效果优于高浓度（２％～３％）：５％犊牛血清优于任何浓度的鸡血清；无血清培养基优于血清培养基。其最佳组合为无血清ＲＰＭＩ１６４０培养基加ＣｏｎＡ２．５μｇ／ｍｌ。     

MTT法检测犬外周血淋巴细胞转化功能的研究

淋巴细胞转化试验的原理是利用T淋巴细胞与抗原或有丝分裂因子（简称为丝裂原）在体外共同培养，引起细胞内新的DNA合成及细胞分化，淋巴细胞的代谢和形态从而发生一系列变化，进一步转化为淋巴母细胞这一特性来反映机体免疫状态的一种试验，是细胞免疫的一个测定指标。其常用测定方法有形态学方法、同位素掺入法（^3H—TdR掺入法），形态学方法主观性强，费时费力；     

百宜黑鸡与兴义矮脚鸡线粒体DNA 控制区遗传多样性分析

采用PCR和直接测序的方法测定百宜黑鸡和兴义矮脚鸡线粒体DNA控制区全序列,比较分析两种贵州地方鸡种的遗传变异。结果表明,百宜黑鸡、兴义矮脚鸡mtDNA控制区全序列长均为1231 bp;共发现26个变异位点(不包含种内变异位点),占分析位点总数的2.11%,其中12个转换,14个颠换;百宜黑鸡mtDNA控制区的A、T、G、C碱基含量分别为27.096%、33.628%、13.117%、26.159%,矮脚鸡的A、T、G、C碱基含量分别是A26.916%、T33.409%、G13.387%、C26.288%,t检验结果显示,两种鸡mtDNA控制区的A和T含量差异显著。百宜黑鸡和兴义矮脚鸡的遗传距离是0.0379,根据分子钟计算,二者约在190万年前分歧进化。     

鸡B淋巴细胞激活因子(ChBAFF)基因的克隆表达

根据GenBank中收录的鸡B淋巴细胞激活因子(chicken B cell activator factor,ChBAFF)基因序列,设计特异引物,以3周龄鸡法氏囊总PNA为模板,经RT-PCR扩增出ChBAFF的ORF序列,测序后,插入质粒pMAL-c2X,构建重组表达载体,转染到大肠杆菌Rosset(DE3),并以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的25%,融合蛋白的分子量约为75 ku,所表达重组蛋白主要存在于菌体裂解物上清液中,为可溶性表达.以淀粉树脂柱亲和层析纯化重组蛋白后进行SDS-PAGE,用BandScan软件分析,提纯重组蛋白的含量可达97.5%.MTT比色法分析证明,纯化的重组蛋白可显著刺激鸡脾脏淋巴细胞的活化.     

沐川黑鸡与石棉草科鸡性能概述及种质资源保护现状

沐川黑鸡与石棉草科鸡为四川省地方特有品种,在当地畜牧经济发展中起着重要作用,也是新品种培育的重要素材。本文对两个地方鸡种研究现状、保种情况进行概述,为其遗传资源保存和开发利用提供依据。     

3H-TdR掺入法检测鸡不同组织淋巴细胞增殖反应的条件优化

为了检测感染免疫抑制病毒后鸡群的细胞免疫变化,以建立的3H-TdR掺入法观察了外周血、脾脏、胸腺、法氏囊中淋巴细胞的增殖反应,对影响该方法的细胞密度、丝裂原浓度(ConA或LPS)、犊牛血清(FCS)浓度等条件进行优化.结果表明,外周血淋巴细胞增殖试验的最佳条件细胞105～106/mL,ConA 5 mg/L,FCS 10%;脾脏中淋巴细胞最佳条件细胞5×106/mL,ConA 10 mg/L,FCS 10%;胸腺中淋巴细胞最佳条件细胞106/mL,ConA 40 mg/L,FCS 10%;法氏囊中淋巴细胞最佳条件细胞5×106/mL,LPS 40 mg/L,FCS 10%.     

中药成分对雏鸡外周血T淋巴细胞转化的影响

38 0只雏鸡随机分为 19组 ,于 11日龄试验组分别肌肉注射高、低剂量的当归多糖、黄芪多糖、板蓝根多糖、淫羊藿多糖、蜂胶多糖、淫羊藿黄酮、蜂胶黄酮、黄芪皂甙和人参皂甙等 9种中药成分 ,对照组注射同量生理盐水 ,每天 1次 ,连续 3d,于 14日龄用新城疫 系弱毒疫苗首免 ,2 8日龄二免。分别于 35、4 2、4 9和 5 6日龄心脏采血 ,监测 T淋巴细胞转化的动态变化。结果表明 ,所有中药成分均能显著促进 T淋巴细胞转化 ,并有一定的量效和时效关系     

性别和营养水平对福建河田鸡风味前体物质含量的影响

研究了不同性别和日粮能量、蛋白水平对河田鸡胸肌肉中风味前体化合物含量的影响。结果表明：性别对腹脂率、氨基酸（Asp、Thr、Ser、Pro、Cys除外）以及肌内脂肪（IMF）及其饱和脂肪酸（SFA）、单不饱和脂肪酸（MUFA）、多不饱和脂肪酸（PUFA）含量有显著影响（P〈0．05），而对肌苷酸（IMP）含量无显著影响（P〉0．05）；公鸡的总氨基酸（TAA）、肌苷酸、肌内脂肪中的SFA、MUFA含量略高于母鸡，母鸡的肌内脂肪及其PUFA含量明显高于公鸡。能量水平对肌苷酸、肌内脂肪及其SFA、MUFA、PUFA以及总氨基酸含量有显著影响（P〈0．05）；当鸡采食高能日粮时，肌内脂肪中的SFA、MUFA含量会显著升高（P〈0．05），而IMP、IMF、PUFA含量会显著下降（P＜0．05），TAA没有显著变化。蛋白水平对肌内脂肪及其MUFA、PUFA含量以及总氨基酸含量有显著影响（P〈0．05）。当采食高蛋白日粮时，肌内脂肪及SFA、MUFA显著降低，而其PUFA会显著增加（P〈0．05）。风味品尝结果表明，公鸡的香味、鲜味都显著高于母鸡，而嫩度低于母鸡；随着能量和蛋白水平的增加，鲜味和嫩度都显著下降（P〈0．05）。从肉品的总可接受性来看，性别对总可接受性没有显著影响（P〉0．05），低营养水平时的总可接受性大于高营养水平（P〈0．05）。     

复方中药成分对新城疫疫苗免疫雏鸡外周血T淋巴细胞转化和血清抗体效价的影响

选择4种中药成分（黄芪多糖、淫羊藿多糖、峰胶黄酮、人参皂甙）组成2个复方，各按3个剂量水平与新城疫疫苗混合后免疫雏鸡，以无佐剂苗和油乳苗为对照，分别于免疫后7、14、21、28、35、42d采血，用MTT法和微量血凝法测定T淋巴细胞转化和血清抗体效价的动态变化。结果表明。中药佐剂能显著促进淋巴细胞转化。提高血清抗体效价，多数时间点与油佐剂的效果相当，部分时间点显著强于油佐剂。综合判定方1高剂量和方2中剂量的效果最好。     

维生素E缺乏对雏鸡淋巴细胞膜抗氧化及膜流动性的影响

用低维生素E（VE）和添加不饱和脂肪酸的日粮饲喂雏鸡，建立VE缺乏雏鸡模型。分离全血淋巴细胞并制备细胞膜，检测淋巴细胞膜超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)含量；采用荧光偏振法检测淋巴细胞膜流动性。结果表明，VE缺乏雏鸡淋巴细胞膜SOD和GSH-Px活力及膜流动性低于对照组，MDA含量高于对照组，组间差异显著或极显著 (P<0.05、P<0.01)。说明VE对维持雏鸡淋巴细胞膜功能起重要作用。     

The influence of regular physical activity on the cell-mediated immunity in pigs

The influence of moderate regular physical activity on the cell-mediated immunity was studied in growing pigs. Ten animals were subjected to physical training on a large animal treadmill, and 10 were kept in their pens throughout a 12-week experimental period. Regardless of whether the pigs underwent training or not, a whole blood lymphocyte stimulation test performed at 3 stages of the experiment revealed an equal ability of the cells to respond to stimulation induced by pokeweed mitogen and phytohaemaglutinin. The influence of serum from the pigs of the trained and untrained groups was studied in a stimulation test with purified mononuclear cells obtained from 2 healthy control pigs. The results indicated that no additional serum factors released by the physical training altered the blastogenic response of these lymphocytes. It is concluded that moderate exercise should not be regarded as a stressor which alters the cellular immunity in pigs.     

日粮营养和半胱胺制剂对山羊手术前后淋巴细胞转化的影响

研究了日粮营养和口服半胱胺制剂对山羊手术前后淋巴细胞转化能力的影响。结果显示 ,正常生理状况下 ,增加日粮营养可显著提高山羊淋巴细胞转化能力 (P <0 0 5)。半胱胺制剂可改善手术创伤导致的免疫抑制 ,显著阻止严重手术创伤后淋巴细胞的刺激指数的下降 (P <0 0 5)。     

Study on the Effect of Ricin on Human Peripheral Blood B Lymphocyte and the Expression of Related Genes

This study was amied to learn the toxic effects of ricin on human peripheral blood B lymphocytes（IM-9）and the expression of related genes.The extracted ricin of different concentrations were added to culture cells for 6 and 12 h to make sure the median inhibitory concentration,then culture cells at the median inhibitory concentration for 2,6,10 and 12 h,at each time point detect the expression of immune related genes CD40,IL-1β,TNF-α and apoptosis related genes Bcl-2,Bax,Caspase-3.The results showed that the inhibitory effect of ricin on IM-9 cells was increased with the increase of concentration and time.The expression of TNF-α and CD40 genes increased significantly in experimental group than control group at 6 h（P<0.05).10 and 12 h reached extremely significant level（P<0.01);There was no significance of IL-1β gene expression between experimental and control groups（P>0.05).About apoptosis gene,the Bax gene expression decreased extremely significantly in experimental group at 10 h（P<0.05）and decreased significantly at 12 h（P<0.05);Bcl-2 gene had reached significant levels of four time periods（P<0.05), and 2,12 h were extremely significant（P<0.01);The expression of Caspase-3 reduced at 6 h,the other time points increased significantly（P<0.05),at 2 h reached extremely significant level（P<0.01).It showed that the gene expression of IM-9 cells could be significantly affected by ricin,TNF-α and CD40 genes were two potential genes to evaluate the toxicity by IM-9 cells.     

蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞的作用及相关基因表达的研究

试验旨在研究蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞（IM-9）毒性作用及对相关基因表达的影响。将提取的蓖麻蛋白按不同浓度添加到培养基培养6、12 h,研究剂量－时间效应,确定半数抑制浓度,然后以半数抑制浓度培养细胞2、6、10、12 h,在每个时间段检测免疫相关基因CD40、IL-1β、TNF-α和凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果表明,蓖麻蛋白对IM-9细胞的毒性作用随浓度和时间的增加而增强。取接近半数抑制浓度20 ng/mL作用IM-9细胞2、6、10、12 h,免疫相关基因中,TNF-α和CD40基因在6 h试验组表达量与对照组相比显著升高（P<0.05）,10、12 h达到极显著水平（P<0.01）;IL-1β基因表达量试验组、对照组间差异不显著（P>0.05）。凋亡基因中,与对照比相比,试验组Bax基因表达量10 h极显著降低（P<0.01）,12 h显著降低（P<0.05）;Bcl-2基因表达量4个时间段均达到显著水平（P<0.05）,2、12 h达到极显著水平（P<0.01）;Caspase-3基因除6 h表达量降低外,其他时间段表达量均显著升高（P<0.05）,2 h为极显著水平（P<0.01）。表明蓖麻蛋白能显著影响IM-9细胞的基因表达,TNF-α和CD40基因是两个潜在用IM-9细胞评价蛋白毒性的检测基因。