不同培养条件对绵羊卵母细胞体外成熟和凋亡的影响

目的,探讨不同温度和不同培养时间对绵羊卵母细胞体外培养,成熟和凋亡的影响,选择合适的温度和培养时间为绵羊卵母细胞进行体外成熟提供技术支持。方法:在绵羊死亡30 min之内取出卵巢4~6 h带回实验室,切割法收集卵母细胞。在5%CO_2、饱和湿度等条件相同情况下,分别在36.0℃、37.0℃、37.5℃、38.0℃、38.5℃、39℃下培养24~26 h。实验中获得的结果数据,采用t检验方法进行差异显著性分析。结果:26 h的成熟率高于其他4个时间的成熟率,在培养22 h到26 h过程中,随着培养时间的增加,卵母细胞的成熟率呈增高。但是在26 h过后,随着培养时间增加,卵母细胞的成熟率呈递减趋势,至30 h卵母细胞的成熟率明显低于22 h的成熟率。38.5℃时卵母细胞的成熟率最高,36℃是卵母细胞的凋亡率最高。卵母细胞成熟率的整体趋势是随着温度的上升呈正相关。     

绵羊卵母细胞体外培养实验研究

本实验采集的屠宰绵羊卵母细胞分两批。一批分别以10～15℃,20～25℃,30～35℃运输;另一批分别采用16～18h,20～22h,24～26h,28～30h的体外成熟时间进行实验。卵母细胞由长距离运输运回实验室,经体外受精观察其体外培养发育情况,从而为确立长途运输卵巢体外培养的条件提供必要的实验依据。实验结果显示:在不同运输温度的卵母细胞中,温度为20～25℃时卵母细胞能够进行较好的发育,卵母细胞的成熟率为64.86%,囊胚率为34.58%;在不同体外成熟时间的卵母细胞中,时间为20～22h时卵母细胞能够较好的发育,卵母细胞的成熟率为62.79%,囊胚率为31.70%。     

卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究探讨卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响.研究结果表明,将卵巢分别保存在25～29℃、30～35℃、36～40℃的生理盐水中运输时,卵母细胞体外成熟率分别为55.3%、70.1%、60.7%,各组间无显著性差异(P＞0.05);当将卵母细胞分别培养在无激素的对照组(TCM199 10?S)、添加雌二醇(estradiol)-17β组、LH 雌二醇-17β组时,卵子的成熟率分别为57.8%、64.3%、70.1%,对照组与LH 雌二醇-17β组差异显著(P＜0.05);卵母细胞各自培养22～25 h、26～30 h、31～34 h时,卵子体外成熟率分别为56.3%、65.4%、68.4%,3组间无显著差异(P＞0.05).     

绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

在体外受精过程中,绵羊卵巢卵母细胞体外成熟情况在很大程度上决定着卵母细胞的体外受精率和胚胎发育率.影响卵母细胞成熟的因素很多,主要包括卵泡大小、卵巢的发育阶段、培养基、激素生长因子等.试验从屠宰场采集屠宰后的绵羊卵巢,抽取卵巢表面卵泡中的卵母细胞,选择一级和二级卵母细胞进行体外成熟培养.试验证明,绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养时间以24h为佳,FCS浓度以20%最适宜.试验还发现无菌条件、温度、湿度以及在体外对卵母细胞的操作时间对试验的结果都有很大的影响.通过试验初步探明了适宜绵羊卵母细胞体外成熟的一些基本条件,为全面掌握绵羊卵母细胞体外成熟培养以至整个体外受精技术的完善和规范提供了有益的资料.     

低温长时间保存的绵羊卵巢对卵母细胞发育潜力的影响

本试验比较了绵羊卵巢不同的保存温度、时间与保存液对其卵母细胞孤雌发育能力的影响。结果表明,将绵羊卵巢在14~18℃保存15~17h,对卵母细胞的成熟率(80.9%vs82.2%)、孤雌激活后囊胚的发育率(21.0%vs22.0%)均无显著影响,采用生理盐水或D-PBS保存对卵母细胞的发育亦无显著差异;而将卵巢保存在4℃或25~30℃却显著降低了卵母细胞的成熟率(61.9%vs19%)与卵裂率(8.6%vs9.1%),没有发育到囊胚。从而得出,卵巢在14~18℃保存过夜,不影响卵母细胞的发育能力。     

不同因素对新疆多浪羊卵母细胞体外成熟的影响

为了探索多浪羊卵母细胞体外成熟的影响因素,提高体外受精率,为多浪羊繁殖潜能的发挥提供基础,试验以屠宰场多浪羊卵巢为材料,采用不同运输条件及不同卵母细胞收集方法,研究运输条件及采集方式对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:温度为25~30℃时卵母细胞成熟率(49.4%)与20~25℃(52.9%)相比差异不显著(P0.05),与30~38℃(23.2%)及4~10℃(35.7%)相比差异显著(P0.05)。保存时间1~2 h的成熟率(49.1%)与保存时间2~3 h的成熟率(50.3%)相比差异不显著(P0.05),保存时间6~8 h的成熟率(26.0%)显著低于保存时间1~2 h和2~3 h的成熟率(P0.05)。切割法收集的卵母细胞数及体外成熟率均显著高于抽吸法(P0.05)。卵巢在20~30℃条件下、1~3 h内运回畜牧科技重点实验室卵母细胞体外成熟率最高,而且切割法优于抽吸法。     

猪卵巢卵母细胞采集方法的比较研究

本试验利用抽吸法和剖切法两种采集方法采集猪卵巢卵母细胞,对获得可用卵丘卵母细胞数和卵丘完整程度的影响进行比较研究,并分析在卵巢收集时不同的保存温度、运输时间对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：剖切法采集细胞数目显著高于抽吸法（P〈0．01）;A、B级卵母细胞的比例在剖切法中显著高于抽吸法（P〈0．05）;抽吸法所采集的c级卵母细胞显著高于剖切法（P〈0．05）;剖切法中卵母细胞卵丘完整率高于抽吸法（P〈O．05）;离体卵巢保存的最佳温度为36℃-38℃;其保存时间为1～1．5h时成熟率57．6％与2—2．5h时成熟率52．8％相比无显著差异（P〉O．05）;保存时间超过6h时卵母细胞的成熟率显著下降。     

季节和方法对牛、绵羊卵母细胞回收及体外成熟的影响

利用屠宰牛、绵羊卵巢,研究了季节和方法对卵母细胞回收及体外成熟的影响。结果表明,季节对牛卵母细胞的回收和利用没有影响;抽吸法是合适的牛卵巢卵母细胞采集方法;季节对绵羊卵母细胞的回收和利用有显著影响,绵羊在非繁殖季节卵母细胞的回收率和可用率显著高于繁殖季节（P<0.05）,而体外成熟率极显著低于繁殖季节（P<0.01）;切割法回收的绵羊卵母细胞可用率（P<0.01）和体外成熟率（P<0.05）显著高于抽吸法,适合绵羊卵母细胞的回收。     

绵羊体外受精技术条件优化的研究

探讨了卵泡液、受精时间和季节对绵羊卵母细胞体外培养效果的影响。从屠宰场采集羊卵巢,抽取卵巢表面2mm-6mm的卵泡卵母细胞,进行体外成熟培养;卵母细胞成熟后,与处理后的精子共同培养进行受精。结果表明,在卵母细胞成熟培养液中添加绵羊卵泡液（SFF）组的卵裂率和囊胚发育率均优于添加同等浓度的牛卵泡液（BFF）组;受精22、18、12h组的卵裂率分别为64.85%、54.39%、48.72%,受精22h和18h组间差异显著（P〈0.05）,受精22h组和12h组间差异极显著（P〈0.01）。秋季绵羊体外受精的卵裂率和囊胚率均高于夏季,差异显著（P〈0.05）,但秋季与春季相比差异不显著（P〉0.05）。因此,进行绵羊卵母细胞体外成熟培养时,培养液中添加SFF;受精时,精卵共培养时间为22h的效果较好。在绵羊的繁殖季节秋季进行体外受精较春季和夏季的结果好。     

影响绵羊体外受精技术因素的研究

作者对影响卵母细胞体外成熟和体外受精的因素进行研究。结果表明,激素FSH和LH明显促进卵母细胞的体外成熟,且10、20和40μg/m l组成熟率高于5μg/m l组,差异显著;运输温度在28~32℃的成熟率高于22~24℃和35~37℃,差异显著;用BO受精体系卵子卵裂率高于TALP受精体系,差异显著;用绵羊冻精进行体外受精,受精前除去大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞卵裂率高于保留大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞。