中国荷斯坦公牛CN和DUMPS遗传缺陷检测及系谱分析

旨在研究中国荷斯坦牛中瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)和尿苷酸核酶缺乏症(Deficiency of uridinemonophosphate synthase,DUMPS)2种遗传缺陷的携带者比率及系谱来源,并构建更简便的检测方法。本研究通过PCR-RFLP方法对参加我国联合青年公牛后裔测定和良种补贴项目的591头荷斯坦公牛进行了大规模CN和DUMPS的遗传缺陷检测,并构建了奶牛CN隐性有害基因的AS-PCR检测技术。结果,共发现2头CN和1头DUMPS隐性有害基因携带者公牛,携带者比例分别为0.34%和0.17%。经过系谱追溯,2头CN携带者公牛均为澳大利亚公牛Linmack Kriss King-CN后代,DUMPS携带者公牛为美国公牛Skokie sensation Ned后代。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,通过青年公牛预选和选种选配,避免携带者公牛进入后裔测定和良种补贴项目,以逐步降低我国奶牛群体中隐性有害等位基因频率。     

天津地区荷斯坦公牛CVM、DUMPS和CN遗传缺陷检测

本文旨在研究天津地区中国荷斯坦公牛脊椎畸形综合征（Complex vertebral malformation,CVM）、尿苷酸合酶缺乏症（Deftciencv of uridine monophospham synchase,DUMPS）和瓜氨酸血症（Citrullinemia,CN）3种遗传缺陷的携带者比率及系谱来源。通过PIRA—PCR和PCR—RFLP方法分别对天津奶牛发展中心参加全国青年公牛联合后裔测定和国家良种补贴项目的110头荷斯坦公牛进行了CVM、DUMPS和CN三种遗传缺陷检测。共发现6头CVM隐性有害基因携带公牛,携带者比例为5．45％,隐性有害等位基因频率为2．72％。经过系谱分析,其中4头CVM携带者均为美国公牛Carlin—MIvanhoeBell的后代,另外2头因系谱不完整而无法查询。未检测到DuMPs和CN隐性有害基因携带者。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,避免携带公牛进入后裔测定和良种补贴项目,以逐步降低我国奶牛群体中遗传缺陷隐性等位基因频率。     

牛瓜氨酸血症、尿苷酸合酶缺乏症PCR-RFLP检测方法的建立及应用

为了解我国奶牛群中牛瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)、尿苷酸合酶缺乏症(Deficiency of uridine monophophate synthase,DUMPS)的携带和发生情况,根据已报道的ASS、UMPS基因核苷酸序列,设计2对引物建立了相应PCR-RFLP检测方法,并对表型正常的436头荷斯坦母牛及93头荷斯坦公牛进行检测.结果共检出CN、DUMPS杂合牛分别为8和6头,携带率分别为1.55%,1.17%.其中CN、DUMPS公牛杂合子分别为2和1头.     

牛尿苷酸合酶缺乏症PCR-RFLP检测方法的建立

提取牛血液和精液DNA,进行PCR扩增、RFLP分析,建立尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)检测方法。对济南市6个奶牛场224头荷斯坦奶牛及53头种公牛进行了DUMPS的PCR-RFLP检测,共检测出2头杂合母牛(携带者),杂合子占检测母牛群的0.89%,在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型,没有发现隐性突变基因的携带者。实验证明,该方法重复性好、灵敏性高、稳定性可靠。     

牛尿苷酸合酶缺乏症PCR-RFLP检测方法的研究

本研究通过PCR-RFLP建立了直接利用基因组DNA检测尿苷酸合酶缺乏症（DUMPS）突变的方法.对济南市6个奶牛场224头奶牛及53头荷斯坦种公牛进行了DUMPS的PCR-RFLP检测,共检出2头杂合母牛（携带者）,杂合子占检测母牛群的0.89%,在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型,没有发现隐性突变基因的携带者.实验证明,该方法重复性好、灵敏性高、稳定性可靠.     

荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用

为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法，根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列，设计引物，通过条件的优化，建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序，建立了检测CN和DUMPS方法。取243份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序，发现CN野生型238份，CN杂合子型5份，CN突变型0份；DUMPS野生型236份，DUMPS杂合子型5份，DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异，还兼具高通量的特点，适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。     

娟姗牛与荷斯坦青年母牛超排效果比较

本试验对56头娟姗牛与179头荷斯坦青年母牛进行超排处理,分别获得可用胚胎227枚和1242枚;可用胚率分别为57.80%和70.65%,娟姗牛和荷斯坦牛超排黄体数无明显差异(P>0.05),但采胚数明显低于荷斯坦牛,娟姗牛的超排结果明显低于荷斯坦牛的结果(P<0.05),移植受体牛270头,怀孕157头。移植妊娠率分别达到52.54%和50.20%,同期娟姗牛胚胎与荷斯坦牛胚胎移植结果比较,无显著差异(P>0.05)。娟姗牛超排使用FSH剂量为9mg更为经济。青年荷斯坦牛和娟姗牛可用于胚胎生产,但青年娟姗牛的可用胚胎数低于荷斯坦牛。     

娟姗牛与荷斯坦牛X-性控冷冻精液试验研究效果分析

采用娟姗牛与荷斯坦牛X-性控冷冻精液,给娟姗母牛、荷斯坦母牛及胚胎移植供体进行人工授精,以探索两种冷冻精液人工授精受胎效果及供体牛生产胚胎效果。研究结果表明,人工输精试验牛情期受胎率及供体母牛的平均可用胚胎数和可用胚胎率受公牛X-性控冷冻精液的影响;人工输精试验牛的受胎率青年牛优于经产牛,而荷斯坦牛的优于娟珊牛;生产胚胎的供体牛,综合可用胚胎数和可用胚胎率,在同一品种上青年牛的效果优于经产牛,在不同品种而同一年龄上的荷斯坦牛优于娟珊牛。     

娟姗牛与荷斯坦牛超排效果比较

本试验对56头青年娟姗牛和179头荷斯坦青年牛进行超排处理,平均获得可用胚胎数4.05±4.20枚/头次和7.06±3.72枚/头次;可用胚率分别为57.80%和70.65%,娟姗牛和荷斯坦牛超排黄体数无明显差异(P>0.05),但采胚数娟姗牛明显低于荷斯坦牛。共移植受体牛310头,怀孕157头(50.65%)。娟姗牛胚胎与荷斯坦牛胚胎的移植妊娠率分别为52.54%(31/59)和50.20%(126/251),无明显差异(P>0.05)。结果表明,青年荷斯坦牛和青年娟姗牛可用于胚胎生产,但娟姗牛的可用胚胎数低于荷斯坦牛。     

牛性控体外受精冷冻胚胎移植试验

从美国引进的荷斯坦牛性控体外受精冷冻胚胎95枚,以鲁西黄牛、南阳牛、西杂牛、荷斯坦牛为受体进行移植试验.结果显示,移植受体95头,妊娠44头,妊娠率46.3%,流产7头,产母犊37头,效果良好.     

美国荷斯坦牛生产能力及其育种方法

1.美国荷斯坦牛的起源荷斯坦牛起源于欧洲,大约在2000年以前,欧洲的两个部落巴塔维斯(Batavias)和弗里生(Friesians),共同移居到富饶的 RhineDelta 地区。他们当时饲养的黑牛和白牛就是现在荷斯坦牛的祖先。1885年美国育种者联合成立美国荷斯坦——弗里生牛协会,提出了用他们自己的基础牛群改良和培育美国荷斯坦奶牛的目标。从此便开始了美国荷斯坦牛的育种工作。     

湟水谷地大面积推广荷斯坦牛的胚胎移植试验

自1951年美国第1头胚胎移植牛诞生以来，胚胎移植技术发展得非常迅速。到1990年，美国荷斯坦牛核心母牛群的27．5％和最好种公牛的44．0％来自胚胎移植的后代，在欧洲牛冷冻胚胎的使用率达47．8％。据不完全统计，目前全世界年产胚胎移植牛超过35万头。我国牛胚胎移植技术起步较晚，但发展快，1978年手术胚胎移植奶牛诞生，1982年冷冻胚胎移植成功，     

中国荷斯坦牛HH4遗传缺陷单倍型分子筛查

HH4(Holstein Haplotype 4)是在荷斯坦牛群中发现的一种隐性遗传缺陷单倍型,由1号染色体上GART基因g.1277227AC单碱基错义突变引起,隐性基因纯合时引起胚胎早期流产,严重威胁着奶牛养殖者的经济效益。本研究利用飞行时间质谱技术对北京地区332头荷斯坦公牛样品和1 151头母牛样品进行了检测分析,结果表明,在所检测的荷斯坦牛群体中,未发现HH4携带者个体,即均为正常个体。提示HH4单倍型对我国荷斯坦牛群影响较小,在奶牛场的选种选配中可以不予考虑,但在遗传物质引进的时候应重点关注,避免引入有害基因。     

进口荷斯坦牛生产性能的观察报告

1985年前后,黑龙江省内三个系统从美国、丹麦、西德引进荷斯坦青年妊娠母牛,进行纯种繁育以及改良中国荷斯坦牛,提高其生产性能,扩大荷斯坦牛群之目的,同时进行三个品种荷斯坦牛生产性能的比较,为今后引种提供参考。美国荷斯坦牛饲养在庆安县奶牛良种场,丹麦荷斯坦牛饲养在省山市种奶牛场,西德荷斯坦牛饲养在松花江奶牛场。在三场饲养管理条件基本相似     

青海省荷斯坦牛胚胎移植

青海省民和县种畜场2001年引进了48头秦川牛,于2001年4月～2002年6月进行了荷斯坦奶牛胚胎移植,结果12头秦川牛移植成功,所产荷斯坦牛犊生长发育良好。1材料与方法1．1供体胚胎荷斯坦奶牛7日龄冷冻胚胎,由新疆生物科技研究所提供。     

应用广西黄牛作受体进行奶牛胚胎移植的研究

本试验通过超排11头荷斯坦牛,获得42枚可用胚胎,分别移植到19头广西本地黄牛和18头低产奶牛中,广西黄牛受体的妊娠率为36.81%,其中母犊5头,公犊2头。荷斯坦牛受体的妊娠率为44.44%,流产2头,流产率25%,产犊6头,公母各3头。黄牛受体与荷斯坦牛受体生下的荷斯坦胚胎牛初生重差别明显,但经培育后,体重差距逐步缩小;产奶性能无差别。广西本土黄牛可以用于荷斯坦牛胚胎移植的受体牛,加强饲养管理可获得好的受胎率;做好胚胎移植出生犊牛培育,可获得良好的经济效益。     

利用荷斯坦奶牛性控冻精生产性控胚胎试验报告

利用荷斯坦奶牛性控冻精生产性控胚胎的试验。选用澳大利亚进口荷斯坦奶牛为供体,按常规方法进行超数排卵,以国产荷斯坦奶牛性控冻精进行人工授精生产性控胚胎。试验共超排供体牛7头,获胚胎6枚及未受精卵33枚,胚胎中可用的B级和C级胚各1枚,退化胚4枚;移植受体牛2头均未受孕,试验表明性控冻精的质量尤其是有效精子可能是生产性控胚胎的决定因素。     

荷斯坦奶牛与和牛活体采卵-体外受精（OPU/IVF）体系的建立及应用

[目的]研究牛活体采卵-体外受精（ovum pick-up and in vitro fertilization,OPU/IVF）体系,建立高效的牛体外胚胎生产系统。[方法]以从屠宰场采集的健康牛新鲜卵巢为试验材料,进行卵母细胞体外成熟、体外受精、体外胚胎培养相关条件的摸索,重点考查体外胚胎培养液中添加瘦素（leptin）对囊胚率的影响。选取13～15月龄健康荷斯坦奶牛及和牛各10头作为供体,进行活体采卵、卵母细胞体外成熟、体外胚胎生产,记录可用卵数及可用囊胚数,统计卵裂率、囊胚率;2个品种牛的体外冷冻胚胎解冻后,以荷斯坦奶牛为受体进行胚胎移植,移植后45 d统计妊娠率。[结果]添加30 U/mL的leptin可以显著（P<0.05）提高屠宰场来源牛体外胚胎的囊胚率。随机选择供体牛活体采卵,平均每头荷斯坦奶牛获得可用卵7.5枚,平均每头和牛获得可用卵8.1枚;荷斯坦奶牛及和牛的卵裂率分别为84.00%、82.71%,二者差异不显著（P>0.05）。体外培养条件下,平均每头荷斯坦奶牛获得可用囊胚4.3枚,平均每头和牛获得可用囊胚3.7枚;荷斯坦奶牛的囊胚率（57.33%）显著...     

国内荷斯坦种公牛HH4遗传缺陷基因筛查

HH4是新近在荷斯坦牛中发现的一种遗传缺陷,其分子机理为牛1号染色体上的GART基因编码区内的1个A/C错义突变。该遗传缺陷呈隐性遗传、突变等位基因纯合时,导致胚胎早期死亡。本研究针对HH4建立了基于PCR-RFLP技术的分子检测方法。结果表明:通过对466头国内荷斯坦种公牛进行基因筛查,发现6头携带者,均可以追溯到共同的祖先公牛Besne Buck。建议我国今后进口荷斯坦种牛时,对个体进行系谱分析和遗传缺陷基因分子检测,避免引入有害基因;同时,对国内现有荷斯坦公牛群体进行HH4筛查,明确标注每头公牛的携带状态,以便在生产实践中合理选种选配。     

铁锋牧场胚胎移植简讯

一九八五年齐齐哈尔市铁锋牧场与美国万寿有限公司范宁博士协作,用美国荷斯坦奶牛总性能指数100名以内最佳公牛与优秀种子母牛冷冻胚胎,给我黑白花奶牛移植。冻胚移植97头,移植受眙24头,受胎率为24.7%。用黑龙江省畜牧研究所引进的美国荷斯坦牛鲜胚移植12头,移植