成年兔睾丸支持细胞的分离纯化研究

本试验以5月龄公兔为试验动物,去除睾丸被膜及血管,分离出完整的曲精细管后 用0．5％胰蛋白酶和0．1％胶原酶消化并进行低渗处理,将制成的细胞悬液植入25 cm2的培 养瓶,于38．7℃、5％CO2条件下培养,结果表明:经1:3Hanks超纯水低渗处理后,离体支持 细胞纯度和活率分别达到72．04％和84．5％,显著提高了离体支持细胞的获取量和活率。     

抗坏血酸对贮存期鸡精液质量的影响

本试验的目的是评估抗坏血酸对Ross—08鸡体外精子质量的影响．采集8只青年期Ross-308肉种公鸡的精液将将它们混合在一起。混合后的精液用改良林格氏液稀释并添加5个处理水平的抗坏血酸（w／v）（0、0．5％、1％、2％和3％）。4℃贮存，并在贮存后的第0、3、6、10和24h对处理组进行精子活力、活率和畸形率的测定。试验结果表明，在贮存后的第0、3和6h，添加抗坏血酸的处理组与对照组精子质量参数无显著差异。在贮存后的第10h．添加1％抗坏血酸处理组精子活力显著高于对照组和其他处理组，添加了0、0．5％、2％和3％抗坏血酸处理组间没有显著差异：在贮存后的第24h，1％抗坏血酸处理组的精子活力与添加1％和2％抗坏血酸处理组精子活率均高于对照和其他处理组：1％抗坏血酸处理组精子畸形率显著低于对照组和其他处理组：在贮存后的第24h，添加3％的抗坏血酸处理组精子畸形率显著高于对照和其他处理组。     

山丹新麦草成熟胚组织培养研究

本研究以山丹新麦草成熟种子为材料,进行了组织培养再生体系的研究。通过研究和筛选新麦草离体成熟胚愈伤组织诱导培养、继代增殖和分化培养的最佳激素配比,建立了从愈伤组织到再生小植株的再生体系。结果表明：成熟胚愈伤组织诱导的最佳激素配比是MS＋2．4-D2．0mg／L。出愈率为91．7％。继代增殖培养的最佳激素配比是MS＋2．4-D1．5mg／L＋KT0．5mg／L。愈伤组织平均日增重1．43％。分化培养的最佳激素配比是MS＋2．4-D2．0mg／L＋NAA1．0mg／L。其绿色芽点率和出苗率分别为78．5％和49．5％,白化苗率为2．5％。     

活蛹缫丝中不同浓度硅酸钠对蚕蛹健康和产卵量的影响

活蛹缫丝能直接选拔茧丝质优良的个体继代,是家蚕品种改良和选育中提高丝质的有效方法。试验表明：用不同浓度的硅酸钠＋0．1％氢氧化钠的混合液作浸茧液进行活蛹缫丝时,对家蚕的蛹体健康性和产卵量有不同程度的影响。0．4％～0．6％硅酸钠＋0．1％氢氧化钠处理区健蛹率保持在96．67％～98．33％,与对照差异不显著;产卵量比对照减少13．54％～16．44％,对家蚕蛹体影响较小,宜选作活蛹缫丝浸茧液。浓度0．7％以上的硅酸钠＋0．1％氢氧化钠的混合液作浸茧液,对家蚕蛹体健康性及产卵量均有显著影响。     

鸡胚睾丸支持细胞的传代培养与鉴定

以孵化18d的广西土鸡鸡胚为实验材料,采用两步酶消化法分离鸡胚睾丸支持细胞,置于37℃、5％C02的培养箱中培养,用低渗的磷酸缓冲液（PBS）处理进行纯化,并对原代和传代支持细胞进行了鉴定。结果显示,睾丸支持细胞生长良好,已传至第4代;经低渗处理,可去除绝大部分的生精细胞,获得的支持细胞纯度可达95％;鉴定结果显示,支持细胞为碱性磷酸酶（AKP）阴性;油红O染色显示,支持细胞胞质内舍有大量的脂肪滴,核内有双极小体;丫啶橙染色证明支持细胞的细胞质中富含RNA,细胞核内的DNA含量也较高;罗丹明123染色证明支持细胞含有丰富的线粒体。结论：经两步酶消化法以及低渗处理后能得到纯度较高的鸡胚睾丸支持细胞;37℃、5％CO2的培养条件适宜支持细胞的生长;AKP染色、油红O、丫啶橙和罗丹明123等方法简单易行,适用于鸡胚睾丸支持细胞的鉴定。     

同期发情处理方法对受体牛胚胎移植效果影响的研究

试验设计3个组．分别采用CIDR＋PGF2α法、PGF2α一次注射法和PGF2α二次注射法3种不同的处理方法对120头西门塔尔杂交受体牛进行同期发情处理。结果表明：CIDR＋PGF2α法同期发情处理的受体牛黄体不合格率达47．4％．显著高于其他两组（P〈0．05）;胚胎移植产犊率为45．0％,分别比PGF2α一次注射法和PGF2α二次注射法低10．2和13．1个百分点。PGF2α二次注射法同期发情处理后的受体牛黄体不合格率仅20．5％,低于PGF2α一次注射法（P〉0．05）,显著低于CIDR＋PGF2α法（P〈0．05）;胚胎移植产犊率达58．1％,均高于其他两组。本试验初步显示：采用PGF2α二次注射法进行同期发情处理受体牛效果好,成本较低,操作方便,产犊率也较高。     

菊苣组织培养与植株再生的研究

以菊苣叶片、茎段，花蕾和花瓣为外植体，进行离体培养试验，结果表明，叶片，茎段，花蕾可产生淡黄色的愈伤组织，并可诱导出不定芽，出愈率为100％，叶片和茎段的分化率为100％，诱导愈伤组织及分化的最佳培养基为：MS＋BA 2mg/L IBA0.3mg/L，生根培养基为：1／2MS＋NAA 0．1mg/L，生根率为100％。     

无公害添加剂组合对肉仔鸡生产性能的影响

选1日龄商品代艾维因混合健雏480只，按单因子随机试验设计分为4组，每组4个重复，每重复30只进行试验。对照组饲喂基础日粮 5mg／kg维基尼亚霉素；试验l，2，3组鸡21日龄前分别饲喂基础日粮 0．1％生命素 0．5％迈克活菌酶；基础日粮 500玎骧／kg糖萜素 0．5％迈克活菌酶；基础日粮 300mg／／kg糖萜素 0．3％迈克活菌酶 0．06％生命素。21日龄后分别饲喂基础日粮 0．1％生命素 0．3％迈克活菌酶；基础日粮 300叫kg糖萜素 0．3％迈克活菌酶；基础日粮 200mg／kg糖萜素 0．2％迈克活菌酶 0．05％生命素。各组基础日粮完全相同。试验结果表明：3个试验组供试鸡的体增重分别比对照组提高10．24、9．61和12．48％．料重比分别降低7．50、7．08和11．67％，每只鸡实际赢利分别增加0．5ll、0．671和1．019元，生物学综合评定值分别为106．12、105．75和108．56。不同无公害添加剂组合对维基尼亚霉素具有显著替代作用。     

细胞骨架抑制剂、电激活液对兔卵孤雌激活和发育的影响

应用细胞骨架抑制剂细胞松弛素B和秋水仙素处理兔成熟卵母细胞，然后采用电激活的方法激活兔卵母细胞，观察细胞骨架抑制剂对兔卵母细胞孤雌激活和孤雌发育的影响，结果表明：应用不同的电激活液，即甘露醇、Zimmerman氏和山梨醇对兔卵母细胞的孤雌激活效果无显著性差异（P〉0．05）；用7．5μg·mL^-1细胞松弛素B处理卵母细胞后孤雌激活，其2-细胞胚率（82．2％）和囊胚发育率（43．4％）与对照组（76．4％和51．5％）相比无显著性差异（P〉0．05）；用1μg·mL^-1秋水仙素处理兔卵母细胞，兔卵母细胞孤雌激活后的2-细胞胚率（64．9％）和囊胚发育率（23．8％）明显下降，与对照组相比存在显著性差异（P〈0．05）；用细胞松弛素B和秋水仙素共同处理的2-细胞胚率（62．5％）和囊胚发育率（30．9％）与秋水仙素单独处理的结果无显著性差异（P〉0．05）。因此，秋水仙素对兔卵母细胞的孤雌激活影响比CB更大。通过免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜观察发现，细胞骨架抑制剂处理后，经孤雌激活获得的囊胚中，微丝和微管结构未见异常。     

水牛体细胞核移植的研究

系统探讨了水牛体细胞核移植的各种影响因素，并初步建立了水牛体细胞核移植的一整套程序。体外成熟培养22～24h的水牛卵母细胞去核后，将经血清饥饿(0.5％FBs)培养2～9d、0．1mg／L Aphidicolin(APD)培养 0．5％FBs培养2～9d或一般培养法(10％FBS)培养的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞，直接注射到去核的卵母细胞质中，或注射到卵周隙中再经电融合(100V／mm，15μs，电脉冲3次)构建重构胚。重构胚经化学激活后(5pmol／L离子霉素5min，2mmol／L6-DMAP3h)培养7～8d，评定其胚胎发育能力。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0．1mg／L APD 0．5％FBs培养处理后的重组胚卵裂率，均极显著高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞(P＜0.01)，但囊胚发育率无显著差异(P＞0．05)。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0.1mg／L APD 0.5％FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均无显著差异(63．06％比58．70％，P＞0．05)。以水牛颗粒细胞为核供体时，电融舍法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法(P＜0.05)，囊胚发育率无显著差异(P＞0.05)。培养3代和6代的水牛颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞，其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异(P＞0.05)；以这2种细胞不同培养代数作供体进行核移植时，各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异P＞0.05)。这些结果表明：(1)水牛耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定；(2)0.1mg／L APD预培养处理供体细胞能提高水牛体细胞核移植的效果，但血清饥饿培养则无作用；(3)水牛耳皮成纤维细胞和颗粒细胞均可作供核细胞，核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚，但前者的效果略优于后者，且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响；(4)电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法，但两者的总体效率相似。