44例犬乳腺肿瘤的病理学分析及p53和HER-2的蛋白表达

为了对犬乳腺肿瘤分类,分析表皮生长因子受体-2(HER-2)与p53的过表达在肿瘤类型上的差异及影响,对所收集的犬乳腺肿瘤标本,进行石蜡切片、H.E.染色,划分肿瘤的病理类型,应用免疫组织化学法检测犬乳腺肿瘤中HER-2基因与p53基因的表达情况。结果 44例犬乳腺肿瘤病理组织切片中,共观察到纤维腺瘤、叶状肿瘤、导管乳头状瘤、浸润性导管癌、浸润性小叶癌(腺泡型)、小叶癌、黏液癌、髓样癌伴随淋巴细胞浸润、混合样癌9种类型;42例犬乳腺肿瘤的免疫组化结果中,HER-2在良性肿瘤中无表达,在恶性肿瘤中的表达率为38.9%,p53在犬乳腺肿瘤中的表达可达78.6%,而在恶性肿瘤中的表达率100%。结论 HER-2与p53的过表达有肿瘤类型的差异性。     

PTEN 基因在犬乳腺肿瘤组织中的表达及临床意义

有关酪氨酸磷酸酶基因（Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosometen,PTEN）在乳腺肿瘤中的检测在人医早有报道。为了研究PTEN基因在犬乳腺肿瘤组织中的表达情况,笔者运用实时荧光PCR定量检测了38例不同的犬乳腺肿瘤组织（包括15例良性乳腺肿瘤和23例恶性乳腺肿瘤）、4例正常犬乳腺组织。结果发现：PTEN基因在犬恶性乳腺肿瘤组织中表达量明显低于其在良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织中的表达量,两者差异极显著（P〈0.001）;PTEN在良性乳腺肿瘤组织中的表达与正常犬乳腺组织相比,差异不显著（P〉0.05）;发生了淋巴结转移的乳腺癌PTEN基因的表达量与未发生转移的乳腺癌组织的表达量间差异亦不显著（P〉0.05）,且PTEN的表达量与肿瘤组织的大小和发病动物年龄无关。结论：PTEN蛋白表达异常可能与乳腺肿瘤发生、发展相关,可考虑作为判断犬乳腺肿瘤生物学行为和预测的指标。     

犬p27蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达分析

为分析犬p27蛋白在犬乳腺肿瘤组织中的表达情况,本研究构建了原核表达重组质粒pET-p27,进行重组蛋白的表达,并将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,制备了抗犬p27蛋白多克隆抗体。将制备的犬p27抗体对临床84例犬乳腺肿瘤组织中的犬p27蛋白表达情况进行了检测。结果显示,制备的抗体效价达1∶12 800以上;western blot检测显示,该多克隆抗体能够与重组蛋白发生特异性反应;免疫组织化学试验表明,犬p27蛋白在犬恶性乳腺肿瘤组织中表达率低于犬良性乳腺肿瘤组织,提示犬p27的表达水平可能与犬乳腺肿瘤的恶性程度相关,本实验为进一步研究犬p27蛋白的生物学功能奠定了基础。     

犬乳腺肿瘤中MUC1的表达及临床意义

为了检测MUC1在乳腺肿瘤的侵袭、转移及病理分级中的作用,本研究通过real-time PCR检测了47例犬乳腺肿瘤组织(20例良性,27例恶性)和3例健康犬乳腺组织中MUC1基因的转录情况,通过IHC检测MUC1在犬乳腺组织中的表达情况,并分析二者与肿瘤恶性程度分级的关系。结果发现:MUC1基因和MUC1在犬乳腺肿瘤组织中高表达,且在不同的恶性分级中差异显著(P0.05)。研究显示MUC1基因和MUC1可作为犬乳腺肿瘤诊断和恶性程度评估的重要指标之一。     

实时荧光定量RT-PCR检测犬乳腺肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)基因方法的建立及初步应用

为了准确地分析血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）在犬乳腺肿瘤形成过程中的作用,试验设计了针对犬VEGF基因的特异性引物,提取乳腺肿瘤组织RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了乳腺肿瘤VEGF基因实时荧光定量PCR检测方法。运用实时荧光定量PCR检测了40例不同的犬乳腺肿瘤病例、2例正常乳腺组织。结果发现：在犬恶性乳腺肿瘤组织中,VEGF基因表达量明显高于良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织（P〈0.001）;在伴有淋巴结转移的犬乳腺癌组织中,VEGF基因表达量明显高于没有发现转移的乳腺癌组织（P〈0.01）,但VEGF基因的表达量与肿瘤的大小和发病动物年龄无关（P〉0.05）。VEGF基因在犬乳腺癌组织中的表达量远高于其在正常乳腺和良性乳腺肿瘤组织中的表达,且与淋巴结是否发生转移相关。因此,VEGF可作为犬乳腺癌转移、复发的预测指标之一。     

Ki-67在犬乳腺肿瘤的表达与分析

本试验通过免疫组化的方法,检测了从中国农业大学教学动物医院收集到的6个正常乳腺组织和135例乳腺肿瘤组织(良性30例,恶性105例)Ki-67的表达率。结果犬乳腺肿瘤组织中的Ki-67蛋白表达率明显高于正常乳腺组织(P0.05);犬恶性肿瘤组织中的Ki-67蛋白表达率明显高于良性肿瘤(P0.05)。表明Ki-67在恶性肿瘤里高表达,可以作为犬乳腺肿瘤疾病诊断的指标。     

SRC-3在犬乳腺癌中的表达及分析

犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种母犬肿瘤疾病。类固醇受体辅助活化因子-3(Steroid receptor activation factor 3,SRC-3)与多种肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关,已成为一个潜在的用于癌症诊断的癌基因标记物。本试验通过免疫组化的方法,检测了从中国农业大学教学动物医院收集到的68例乳腺肿瘤组织SRC-3的表达情况。结果显示,犬恶性乳腺肿瘤组织中的SRC-3蛋白表达率高于正常与良性乳腺肿瘤组织。结果表明,SRC-3在恶性肿瘤里高表达,可以作为犬乳腺肿瘤疾病诊断的参考指标。     

血小板凝血酶蛋白1对犬乳腺肿瘤细胞体外生物学特性的影响分析

本研究旨在深入探讨血小板凝血酶蛋白1(THBS1)对犬乳腺肿瘤细胞CHMp的影响,并阐明其影响犬乳腺肿瘤发生发展的作用机制。通过构建THBS1慢病毒稳定过表达和THBS1沉默表达的犬乳腺肿瘤细胞CHMp细胞系,采用CCK-8试验、划痕试验、Transwell试验、原位荧光检测和流式细胞术检测THBS1对CHMp细胞增殖、迁移、侵袭、细胞凋亡和细胞周期情况的影响;通过qRT-PCR和Western blot检测THBS1对CHMp细胞凋亡相关因子(p53、Bcl-2、Bax)表达情况的影响,验证THBS1对CHMp细胞凋亡通路的影响。结果显示,过表达THBS1能有效增强犬乳腺肿瘤细胞CHMp的增殖、迁移和侵袭能力,并且减少CHMp细胞的凋亡数量,而沉默THBS1后结果与之相反;流式细胞术得出THBS1能够影响CHMp细胞的细胞周期分布;经qRT-PCR和Western blot检测发现,在THBS1过表达后,p53和Bcl-2的表达量均明显增高,Bax的表达量明显减少,在沉默THBS1后结果与之相反。结果表明,THBS1的异常表达能够影响犬乳腺肿瘤细胞CHMp的增殖、迁移、侵袭以及细胞周期;此外,THBS1能够通过影响细胞凋亡因子p53、Bcl-2和Bax的表达来影响CHMp细胞凋亡相关通路,进而影响犬乳腺肿瘤的发生发展。     

CD44、VEGF、p53在犬乳腺肿瘤细胞系中的表达

为了研究犬乳腺肿瘤的转移机制,试验选用从自然发生乳腺肿瘤病例的原发病灶和转移病灶分离培养的4种细胞(CHMp、CHMm、CIPp、CIPm),经传代120代以上、生长性状稳定的细胞系作为研究对象,并对细胞系进行免疫组织化学分析。结果表明:不同细胞系中p53、CD44、VEGF 3种抗体均为阳性反应,但有不同的临床意义;VEGF在4种细胞系中表达无差异,说明在转移组和原发组乳腺肿瘤细胞中功能和作用机理类似;CD44在4种细胞系中的表达均有差异,说明其不能作为独立的预后指标,需要其他因素共同参与调节乳腺肿瘤的浸润和转移;p53在活性和增殖能力最弱的CIPm细胞中表达强度最弱,与组织中的表达结果相符合,说明p53作为动物预后指标是可靠的。     

PTEN基因过表达对犬乳腺肿瘤细胞系CHMm增殖及Bcl-2、Bax基因调控的影响

为探讨过表达的第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)对犬乳腺肿瘤细胞系(CHMm)增殖及Bcl-2、Bax基因的影响,本研究构建了PTEN表达质粒pc DNA-PTEN,采用脂质体转染法将其导入CHMm细胞系,采用western blot检测PTEN蛋白表达情况,CCK-8法检测CHMm细胞增殖情况,荧光定量PCR检测Bcl-2和Bax的基因表达情况。结果显示,转染PTEN的CHMm细胞组的PTEN蛋白表达水平显著高于空载体组和未转染组;转染PTEN细胞组的细胞增殖显著低于空载体组和未转染组(p0.05);转染PTEN的CHMm细胞组Bcl-2的m RNA表达水平显著低于空载体组和未转染组(p0.05);转染PTEN的CHMm细胞组Bax的m RNA表达水平显著高于空载体组和未转染组(p0.05)。本实验将PTEN基因导入犬乳腺肿瘤细胞系(CHMm),抑制犬乳腺肿瘤细胞增殖,为寻找乳腺肿瘤基因治疗新方法提供依据。     

实时荧光定量PCR对犬乳腺肿瘤组织TNFR1基因的定量检测

乳腺肿瘤是母犬中最为常见的肿瘤,运用实时荧光定量PCR检测了37例犬乳腺肿瘤病例和37份正常乳腺组织.结果表明:犬乳腺肿瘤组织中肿瘤坏死因子受体(TNFR1)的表达量显著低于正常对照组织(P<0.05).该试验结果说明,犬乳腺肿瘤的发生很可能与TNFR1表达降低有关,为深人研究肿瘤形成的分子机理提供了重要参考.     

犬乳腺肿瘤组织病理学观察及腱糖蛋白C表达的检测

为了探讨腱糖蛋白C(TNC)表达与犬乳腺肿瘤生物学关系,对23例犬乳腺肿瘤临床病例进行病理学观察及分类,然后采用免疫组化SABC方法检测TNC蛋白在23例犬乳腺肿瘤和2例犬正常乳腺组织中的表达情况。结果显示:23例病例中,良性肿瘤有7例,占30.43%;恶性肿瘤有13例,占56.52%;增生病变有3例,占13.05%。在良性肿瘤中良性混合瘤最多,为3例,其余2例为导管内乳头状腺瘤,1例复杂腺瘤及1例纤维腺瘤。恶性肿瘤中,5例未分化癌,3例癌肉瘤,2例筛状癌,2例固体癌,1例纤维肉瘤,1例混合瘤引起的癌。TNC蛋白主要表达于细胞外基质。犬恶性乳腺肿瘤中,TNC蛋白阳性表达率为46.15%(6/13);良性乳腺肿瘤中,其阳性表达率为42.85%(3/7);乳腺增生病变和正常乳腺组织中,未见其表达。研究结果表明,TNC蛋白可以为犬乳腺肿瘤的鉴别诊断提供参考。     

NLRP3炎症小体及其下游炎症因子在犬乳腺肿瘤组织中的表达

本研究旨在明确NLRP3炎症小体及下游炎症因子在犬乳腺肿瘤中的表达及临床意义.采用RT-qPCR方法检测45例犬乳腺肿瘤组织(15例良性肿瘤和30例恶性肿瘤)以及16例肿瘤旁正常乳腺组织中的NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA的表达水平,并分析NLRP3与肿瘤临床病理学特征的关系(肿瘤大小、...     

IGFBP-2 PTEN蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达

为了探讨IGFBP-2、PTEN蛋白表达与犬乳腺肿瘤生物学行为关系。采用免疫组织化学PV法对临床收集的71例乳腺肿瘤,4例非典型性增生和6例健康犬乳腺组织中IGFBP-2和PTEN蛋白的表达水平进行检测,并分析它们与临床病理特征之间的关系。结果 IGFBP-2和PTEN蛋白染色主要定位于胞浆,少量可见于胞核和胞膜。IGFBP-2和PTEN蛋白在犬正常、增生乳腺组织中和良性乳腺肿瘤中的表达差异不显著(P0.05),但与恶性乳腺肿瘤相比二者表达差异极显著(P0.01)。IGFBP-2和PTEN蛋白表达与患犬年龄、肿瘤大小和预后无关。表明联合检测IGFBP-2、PTEN表达可作为犬乳腺癌生物学行为判断的重要指标。     

犬乳腺肿瘤病理组织学观察及ER PR C-erbB-2的表达分析

通过对20例犬乳腺肿瘤进行病理组织学观察、免疫组织化学染色,探讨犬乳腺肿瘤病理形态学特点,ER、PR、Cerb B-2表达与乳腺肿瘤的关系。结果显示,20例犬乳腺肿瘤,70%为恶性肿瘤,其中良性肿瘤有导管内乳头状瘤和纤维性瘤,恶性肿瘤有浸润性导管癌,单纯癌,小叶原位癌,癌肉瘤,腺癌,恶性肿瘤发病率高于良性肿瘤。免疫组化结果显示-ER、PR在良性肿瘤的表达率均高于恶性肿瘤,P<0.05,差异显著;C-erb B-2在恶性肿瘤中的表达高于良性肿瘤,P<0.05,差异显著。提示,犬乳腺肿瘤恶性肿瘤发病率较高,ER、PR、C-erb B-2对犬乳腺肿瘤发病中的诊断、治疗及预后有重要意义。     

犬乳腺肿瘤的病理组织学观察及p63蛋白的表达

通过对35例犬乳腺肿瘤的临床病史调查、光学显微镜观察和免疫组化染色,探讨了犬乳腺肿瘤的临床病理形态学特点、诊断和鉴别诊断.结果显示34例发生在5岁以上,6岁～10岁为发病高峰期;51.4％的病例为恶性肿瘤,其中44.4％的乳腺癌发生转移.免疫组化染色结果显示,在正常乳腺和良性肿瘤组织中,p63蛋白100％表达,并且仅仅...     

CA15-3在犬乳腺肿瘤中的表达及其临床意义

通过ELISA和IHC分别检测了乳腺肿瘤患犬血清和组织中CA15-3的浓度和表达情况,发现CA15-3在乳腺肿瘤患犬血清浓度(15. 70 U/m L±12. 93 U/m L)明显高于健康犬血液中CA15-3浓度(5. 72 U/m L±4. 82 U/m L)。IHC结果发现,CA15-3 MOD在乳腺肿瘤组织中(0. 21±0. 08)明显高于健康乳腺组织(0. 10±0. 04),且在不同的组织分级中差异显著(P 0. 05)。结论:血清中CA15-3浓度可作为犬乳腺肿瘤早期诊断和预后评估的生物标志物之一,组织中CA15-3蛋白可作为评估犬乳腺肿瘤恶性程度的生物标志物之一。     

microRNA在犬乳腺肿瘤中的研究进展

犬乳腺肿瘤(CMT)在许多方面与人类乳腺癌(HBC)相似，是雌犬死亡率最高的常见肿瘤。到目前为止，大多数犬乳腺肿瘤仅在临床上乳腺发生可见变化时才被发现，手术切除肿块是较为有效的治疗方法。为了在肉眼可见变化之前发现恶性肿瘤，应考虑评估血清或体液中生物标志物。微核糖核酸(miRNA)作为转录后基因调控因子，已成为肿瘤研究中具有吸引力的生物标志物。本文从miRNA的来源、作用机制、与肿瘤发生发展的关系、检测方法、作为生物标志物的应用前景和局限性等方面，综述了miRNA在犬乳腺肿瘤中的研究现状和作为生物标志物在早期临床诊断或癌症进展监测中的应用价值，为犬乳腺肿瘤早期诊断和预后分析应用提供参考。     

p53基因及其在家禽肿瘤性疾病应用研究进展

抑癌基因p53作为一种转录因子,通过调控其靶基因在应激反应中启动的不同生物学过程,包括细胞凋亡、细胞周期阻滞或衰老等,发挥其在肿瘤抑制中的作用。近年人类医学对p53基因进行研究的较多,但是动物医学文献中有关p53基因的研究报道相对较少。论文就国内外对p53基因及其编码产物的结构、作用机制、应用、检测等方面的研究进展以及在禽病中的表达和应用进行综述,为家禽肿瘤性疾病的诊治提供参考。     

miR-502在犬乳腺癌中的表达及意义

旨在研究微小miR-502(cfa-miRNA-502)在犬乳腺癌组织中的表达情况及其临床意义。采用实时定量PCR方法检测30例犬乳腺癌组织及癌旁正常组织中miR-502的表达水平,分析miR-502表达与犬乳腺癌组织临床病理特征(年龄、肿瘤大小、组织学分级和转移)的关系。结果显示:与癌旁组织相比,犬乳腺癌组织中miR-502的表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P0.01);miR-502表达与犬乳腺癌的组织学分级与转移有关(P0.05),但与年龄和肿瘤大小无关(P0.05)。本研究提示miR-502在犬乳腺癌组织中表达上调,其表达与犬乳腺肿瘤的发生、发展有一定关系,miR-502可能作为犬乳腺癌诊断的肿瘤标记物。