雪胆中抗MRSA内生细菌的多样性

从雪胆多种组织中分离、筛选出抗MRSA的菌株,采用总DNA ERIC-PCR方法和16S rRNA基因全序列分析方法,对抗MRSA的雪胆内生细菌进行遗传多样性和系统发育分析。结果表明,雪胆内生细菌非常丰富,分离获得25株抗MRSA菌株。在遗传距离为0.50时,25株菌被划分为4个ERIC群和1个独立成群的菌株。     

寒地水稻病害生防菌株L1的鉴定及抑菌机理研究

本研究从寒地水稻根际筛选并鉴定了1株生防细菌,初步命名为芽孢杆菌L1,芽孢杆菌L1发酵培养5 d时发酵液中具有抑菌活性的次生代谢产物对水稻稻瘟病菌及纹枯病菌菌丝生长抑制率都达到最高,分别达74.57%和83.23%,随时间延长抑菌效果不再增加;芽孢杆菌L1的发酵液用硫酸铵梯度沉淀法提取粗蛋白,7个梯度下的粗蛋白对两种菌菌丝均具有抑菌作用,但对稻瘟病菌起主要抑菌作用的蛋白在硫酸铵饱和度50%～60%下沉淀,而对水稻纹枯病菌则在60%～70%,说明芽孢杆菌L1分泌对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌起主要抑菌活性的蛋白可能不是同一类。     

雪胆多糖提取工艺优化及其抗氧化活性分析

[目的]优化雪胆水溶性和水不溶性多糖提取工艺,并分析其抗氧化活性,为雪胆多糖的开发利用提供参考依据.[方法]采用热水浸提法提取雪胆水溶性多糖、碱液浸提法提取雪胆水不溶性多糖,以多糖提取率为考察指标,通过单因素试验和正交试验优化2种雪胆多糖的提取工艺条件,同时测定雪胆多糖清除羟基自由基(·OH)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和超氧阴离子(O-2·)的能力及还原能力.[结果]影响热水浸提雪胆水溶性多糖的因素排序为提取温度>料液比>提取时间,最佳提取工艺条件为:料液比1:16、提取温度80℃、提取时间2.0 h,在此条件下,雪胆水溶性多糖提取率为(28.70±0.63)%;影响碱液浸提雪胆水不溶性多糖的因素排序为料液比>提取温度>提取时间,最佳提取条件为:料液比1:18、提取温度70℃、提取时间2.0 h,在此条件下,雪胆水不溶性多糖提取率为(31.43±0.42)%.雪胆水溶性多糖和水不溶性多糖对·OH和DPPH自由基均有较好的清除效果,2种雪胆多糖质量浓度为0.5 mg/mL时,对DPPH自由基的清除率在50.00%以上,质量浓度为0.1 mg/mL时,对·OH的清除率在50.00%以上;此外,2种多糖具有良好的还原能力和清除O-2·能力,均随多糖质量浓度的增加而增强.[结论]采用正交试验优化获得雪胆水溶性多糖热水浸提工艺和雪胆水不溶性多糖碱液浸提工艺,提取操作简便,方法可行,提取的2种多糖均具有较强的抗氧化活性,可作为天然抗氧化资源加以利用.     

海洋源拮抗细菌对水稻纹枯病的防治

从连云港海域的海水和海泥中分离海洋细菌,以水稻纹枯病菌为指示菌对分离到的海洋细菌的抑菌活性进行检测,经过初筛、纯化、定量复筛,获得11株抑菌效果较好的海洋细菌.采用室内抑菌法测定了这11个活性菌株对8种植物病原真菌的抑制效果,结果表明,菌株MG-sm-3、PY-sw-1、PY-sw-9和Ns-sw-6的抑菌谱广且抑菌活性强.用硫酸铵沉淀法提取了这11个活性菌株的胞外粗蛋白,平板抑菌试验结果表明,菌株PY-sw-1的胞外粗蛋白对7种病原真菌的菌丝生长均有抑制效果,尤其对云薹链格孢(Alternaria brassicae)、灰梨孢(Pyricularia grisea)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)有显著抑制作用.田间试验结果表明,菌株PY-sw-1及其胞外物质对水稻纹枯病的防治效果最好,喷施后7 d的防效分别为63.2%和53.9%.以上试验结果说明一些海洋源微生物对植物病害的防治具有一定的功效.     

枯草芽孢杆菌抑菌活性及蛋白粗提物特性研究（英文）

为了获得无耐药性、无毒副作用的生物药物,减少抗生素的使用,从动物肠道中分离到一株芽孢杆菌,用分子生物法鉴定分离菌;用琼脂扩散法做分离菌体外抑菌试验;用常规培养法筛选分离菌最佳发酵条件;用饱和硫酸铵法提取分离菌抑菌粗蛋白;用比对法检测抑菌粗蛋白的理化特性;鉴定分离菌为枯草芽孢杆菌;对金黄色葡萄球菌、猪丹毒、链球菌有抑菌作用;当温度为30℃、酸碱度为pH7、装液量为75 ml/250 ml、接种量为20%、培养时间为48 h,分离菌发酵效果最好;用80%饱和硫酸铵提取抑菌粗蛋白的方法最好;抑菌粗蛋白有较强的抗热和抗酸能力;有机溶剂、紫外照射对抑菌粗蛋白有一定的影响;蛋白酶类对抑菌粗蛋白有一定的水解作用。所分离的枯草芽孢杆菌可用于防治因金黄色葡萄球菌、猪丹毒、链球菌等引起的疾病,也可加到膨化饲料中用于肠道微生态的调节。     

一株抑耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)芽孢杆菌的筛选与鉴定

为寻找一种对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)具有抑制作用的抗生素替代物,从568株芽孢杆菌中筛选出抑MRSA的芽孢杆菌5株,其中芽孢杆菌64-3的抑菌活性最强。生理生化特性鉴定和16s rDNA基因序列比对分析结果表明,菌株64-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌种(Bacillus subtilis)。该菌株菌体破碎物、菌悬液、发酵上清液和活菌对MRSA的抑菌效果表明,B.subtilis64 3的发酵上清液对MRSA的抑制效果最好。B.subtilis64 3产生的胞外抑菌物质对MRSA具有良好的抑制效果。     

枯草芽孢杆菌B36抑菌活性成分的初步提取

采用有机溶剂沉淀法、溶媒萃取法和大孔吸附树脂法对枯草芽孢杆菌B36菌株发酵产生的抑菌活性成分进行初步提取.结果表明,有机溶剂沉淀法和溶媒萃取法提取抗菌成分的能力较低.而大孔吸附树脂法提取抗菌成分能力强.因此选择大孔树脂HP20进行吸附,以75%乙醇为洗脱剂进行动态解吸初步提取枯草芽孢杆菌B36菌株的抗菌成分.     

鬼针草叶蛋白最佳提取时期与方法的筛选

为了找到鬼针草叶蛋白提取最佳生长期和有效提取方法,研究了鬼针草不同生育期和不同方法对叶蛋白提取的影响。结果表明:在鬼针草4个不同生育期中采用直接加热法提取,叶蛋白提取率和沉淀物中粗蛋白含量依次降低,营养生长期(20.2 mg/g,61.36%)现蕾期(15.9 mg/g,61.25%)盛花期(14.7mg/g,60.97%)结果期(12.1mg/g,54.22%),均以营养生长期为最高。在鬼针草的营养生长期,采用多种方法提取叶蛋白,叶蛋白提取率:酸化加热+聚乙二醇沉淀法(29.4mg/g)酸化加热+乙醇沉淀法(27.9mg/g)酸化加热+氯化钠法(24.7mg/g)酸化加热法(23.1mg/g)直接加热法(20.2mg/g);沉淀物中粗蛋白含量:酸化加热+乙醇沉淀法(65.35%)酸化加热+氯化钠法(60.72%)酸化加热+聚乙二醇沉淀法(57.13%)。     

苍白杆菌SY286抑菌活性蛋白稳定性分析

利用饱和硫酸铵沉淀法从苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)SY286发酵滤液中提取抑菌活性蛋白,通过温度、酸碱度、紫外线以及蛋白酶对活性物质的影响,测定活性物质的稳定性。结果表明,经60%饱和硫酸铵溶液盐析出的活性蛋白对葡萄霜霉病菌的抑菌活性最强,抑制率达81.98%。温度、酸碱度以及紫外线对抑菌粗提蛋白的活性均有一定影响。抑菌粗提蛋白在50℃以下和pH 4～10条件下抑菌活性相对稳定。抑菌粗提蛋白的抑菌活性受蛋白酶的影响较大,蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶均对其活性具有较大影响。     

酵母多肽的分离纯化及其化妆品功效研究

通过反复冻融与超声破碎结合的方法破碎酵母细胞提取酵母蛋白,并以等电点沉淀法对酵母发酵上清液以及酵母细胞液进行纯化,得到粗蛋白,研究蛋白质的抗氧化能力以及抑制酪氨酸酶的能力。结果显示,3种酿酒酵母上清蛋白都具有很好的清除DPPH的能力,2.6 g/L左右的浓度其清除率能达到72%左右;不同酿酒酵母上清蛋白中,酿酒酵母1号上清蛋白对酪氨酸酶具有更好的抑制效果;不同酿酒酵母粗蛋白在0.45 g/L左右基本上不具有清除DPPH自由基的能力,酿酒酵母1号粗蛋白对酪氨酸酶的抑制率相对于其他的酵母粗蛋白来说也更好;3.5 g/L的不同酿酒酵母多肽对DPPH自由基的清除率可达50%左右,对酪氨酸酶的抑制率也可达到12%左右。     

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为了找到鬼针草叶蛋白提取最佳生长期和有效提取方法,研究了鬼针草不同生育期和不同方法对叶蛋白提取的影响.结果表踢:在鬼针草4个不同生育期中采用直接加热法提取,叶蛋白提取率和沉淀物中粗蛋白含量依次降低,营养生长期(20.2 mg/g,61.36％)＞现蕾期(15.9 mg/g,61.25％)＞盛花期(14.7 mg/g,60.97％)＞结果期(12.1 mg/g,54.22％),均以营养生长期为最高.在鬼针草的营养生长期,采用多种方法提取叶蛋白,叶蛋白提取率∶酸化加热+聚乙二醇沉淀法(29.4mg/g)＞酸化加热+乙醇沉淀法(27.9mg/g)＞酸化加热+氯化钠法(24.7mg/g)＞酸化加热法(23.1 mg/g)＞直接加热法(20.2mg/g);沉淀物中粗蛋白含量∶酸化加热+乙醇沉淀法(65.35％)＞酸化加热+氯化钠法(60.72％)＞酸化加热+聚乙二醇沉淀法(57.13％).     

雪胆多酚抗氧化作用及对α-葡萄糖苷酶抑制作用研究

【目的】探讨雪胆多酚与氨基酸的联合抗氧化作用及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。【方法】采用Folin-Ciocalte法测定多酚含量。利用DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基、超氧阴离子清除活性和铁还原能力法,评价雪胆多酚与组氨酸、缬氨酸、甘氨酸之间的联合抗氧化活性。并通过体外法测定雪胆多酚对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。【结果】雪胆多酚、组氨酸、缬氨酸、甘氨酸、组氨酸与雪胆多酚联合、缬氨酸与雪胆多酚联合、甘氨酸与雪胆多酚联合均具有清除DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基、超氧阴离子清除活性的能力,并具有一定的还原能力。抑制性实验结果表明,雪胆多酚对α-葡萄糖苷酶有抑制作用,属于可逆性抑制中的反竞争性抑制类型。【结论】利用体外抗氧化评价方法,明确了雪胆多酚与氨基酸之间具有协同抗氧化能力,以及雪胆多酚对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用,为雪胆多酚的进一步开发利用提供理论依据。     

生防菌BH-2发酵液中抑菌成分的定位及提取研究

为了明确生防菌BH-2发酵液中的抑菌成分及其提取方法,采用管碟法,通过抑菌活性的测定,对其发酵液中抑菌物质及其提取进行了研究。结果表明,生防菌BH-2发酵液中的抑菌作用大致分为活体的抑菌作用和和代谢活性物抑菌作用,且胞外的抗菌代谢物有较好的热稳定性,而胞内不产生抑菌物质。此外,有机溶剂的萃取试验表明,代谢活性物质的极性较强;不同浓度的硫酸铵和乙醇均不能使其沉淀;酸沉淀法基本上可以将其提取出来。这为该菌株的进一步研究和产品开发提供了理论依据和技术支持。     

哈密瓜内生拮抗细菌的筛选及其抑菌物质研究初报

通过测定菌体及胞外分泌物抑菌活性,从378个哈密瓜内生细菌中筛选出了对瓜类细菌性叶斑病菌、疫霉病菌具有较强拮抗活性的菌株。对抗菌活性显著的197菌株的胞外抑菌活性物质进行了初步研究。研究显示:197菌株胞外分泌物的抗菌效价可达80倍;其抗菌活性物质为蛋白质类物质,可通过15%-90%饱和度的硫酸铵盐析,其中75%硫酸铵饱和度提取的粗蛋白的抗菌活性最强;该抗菌蛋白具有一定的耐热性,温度高于40℃后抑菌活性逐渐下降,100℃下仍能保持部分抑菌活性,120℃时全部丧失。     

小檗碱体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的研究

目的 研究小檗碱体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）活性。方法 运用琼脂扩散法、液体稀释法测定并分析小檗碱对MRSA的抑菌环大小、最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）;运用96孔酶标板结晶紫法测定并分析小檗碱对MRSA的最小生物膜清除浓度（MBEC）。结果 与DMSO比较,小檗碱与氯霉素（阳性对照药物）可显著增加MRSA的抑菌环半径（P<0.01）,小檗碱对MRSA的MIC为0.2 mg/mL,MBC为0.4 mg/mL;小檗碱对MRSA的MBEC为0.2 mg/mL。结论 小檗碱对MRSA有比较明显的抗菌、抑菌作用,其效应机制可能与其抑制细菌生物膜的形成有关。     

地衣芽孢杆菌1801的分离鉴定及其活性研究

从泡菜样品中筛选到一株对多种食品腐败指示茵都有抑菌活性的菌株,经初步鉴定为地衣芽孢杆菌1801.用TYG培养基进行发酵培养,其抑菌活性在发酵18 h达到高峰,该茵发酵培养物的抑茵活性对蛋白酶K、热、酸碱较稳定.采用pH3沉淀法可将该茵的活性物质进行初步提取.     

韭菜抗常见病原菌活性成分初步筛选

以韭菜为试材,采用水蒸汽蒸馏提取法与有机溶剂萃取法分别提取韭菜抑菌成分,并通过体外抑菌试验检测不同提取成分的抑菌活性,确定其体外最小抑菌浓度.结果表明:韭菜乙酸乙酯萃取物与韭菜挥发油都具有广谱的抑菌活性,且对不同细菌的最小抑菌浓度不同.     

雪胆属转录组的EST-SSR分子标记开发

[目的]开发雪胆属表达序列标签简单重复序列(SSR)分子标记。[方法]对雪胆属肉花雪胆和母猪雪胆2个种进行转录组测序,检测SSR位点并设计引物,通过PCR扩增和毛细管电泳检验引物的有效性和多态性,并分析种间和种内遗传多样性。[结果]从200对引物中筛选出6对具有高多态性的引物,每对引物检测到的等位基因数5～8个,平均值6.333 3个。有效等位基因(Ne)为2.480 7～4.982 8个,平均值3.760 8个。多态信息含量(PIC)为0.549 5～0.758 3,平均值0.672 9。遗传多样性分析显示,种间和种内居群均存在明显的遗传分化。[结论]该研究开发的EST-SSR引物具有丰富的多态性,为雪胆属植物的遗传多样性研究提供参考依据。     

苹果树腐烂病菌拮抗枯草芽孢杆菌E1R-j抗菌蛋白的分离纯化

【目的】从枯草芽孢杆菌E1R-j菌株的发酵液中分离纯化抗菌蛋白,分析确其对苹果树腐烂病菌菌丝的抑制作用,为更好地利用该菌株防治植物病害和研制生物农药奠定基础。【方法】采用盐酸沉淀法从E1R-j发酵液中提取粗蛋白,并筛选酸沉淀的最佳pH值,然后通过反相柱RESOURCETMRPC、凝胶柱Superdex-75、阴离子交换柱DEAE-Sepharose和脱盐柱层析技术,提取并分离纯化粗蛋白;在粗蛋白分离纯化过程中,以皿内对峙试验测定蛋白的抗菌活性;通过扫描电镜技术,观察抗菌蛋白对病原菌菌丝的抑制作用。【结果】以pH 4.0盐酸沉淀获得的粗蛋白活性最强,抑菌效果最佳。反相柱RESOURCETMRPC获得的活性峰收集物经凝胶柱Superdex-75、阴离子交换柱DEAE-Sepharose和脱盐柱层析后,得到1个对称的活性峰,其收集物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)检测为单一条带,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱中显示有2个分子质量相近的条带,表明该抗菌蛋白可能含有2个亚基,2个亚基的分子质量分别为55和60ku,将该活性蛋白命名为EP-1。扫描电镜结果显示,抗菌蛋白EP-1可使苹果树腐烂病菌菌丝出现膨大、弯曲以及原生质外渗等现象。【结论】通过盐酸沉淀及柱层析技术,从枯草芽孢杆菌E1R-j发酵液中分离纯化出一种分子质量为115ku的抗菌蛋白EP-1,其对苹果树腐烂病菌菌丝生长具有明显的抑制和破坏作用。     

解淀粉芽孢杆菌抑菌活性初步研究

为了进一步分离纯化抑菌蛋白和脂肽类物质,促进拮抗菌的开发和利用,选取2株对多种植物病原真菌具有良好拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌,利用硫酸铵沉淀法粗提2株菌株的抑菌蛋白,酸沉淀法粗提脂态类抑菌物质,分别测定粗提物对多种植物病原真菌的抑制效果。初步检测2株菌株是否具有产纤维素酶、蛋白酶和嗜铁素活性。结果表明:BQD1菌株20%~30%的蛋白粗提液对玉米大斑病菌拮抗作用最强,抑菌直径达31.48mm。TY菌株30%~40%的蛋白粗提液对玉米大斑病菌抑菌直径最高达34.20mm。2株菌株脂态类粗提液对靶标病原菌株的拮抗作用均高于其发酵液,且均可产生纤维素酶、蛋白酶和嗜铁素。