苹果柱型基因的ISSR分子标记研究

 以普通型苹果品种‘富士’和柱型苹果‘舞姿’以及其杂交后代的柱型与非柱型实生苗为试材, 建立了苹果的ISSR ( Inter-Simple Squence Repeat polymorphic DNA) 分子标记体系, 并将ISSR 标记用于苹果柱型基因Co 的遗传分析。结果表明, 在20μL 反应体系中各组分的用量为Taq DNA 聚合酶1U、Mg²⁺ 的浓度为2.5 mmol·L^-1 、模板DNA 用量20 ng、引物浓度0.2μmol·L - 1及退火温度52 ℃, 80 %引物具有良好的扩增能力。调整模板DNA 的用量、引物浓度及退火温度能够优化苹果ISSR-PCR 扩增体系。从所筛选的65 个引物中获得了35 个ISSR 标记, 其中33 个标记呈现1∶1 分离, 可用于苹果柱型基因的遗传分析。     

结球甘蓝SSR检测体系的建立及优化

摘，要：以结球甘蓝自交系15R(南宝)和14S（北黑大平头）为试材，建立了甘蓝SSR-PCR反应体系，并从 PCR反应组成、扩增程序等环节对SSR-PCR反应体系进行了优化。即10.00 μL反应体系组成为：1× Buffer(含20.00 mmol·L^-1 MgCl₂)、50.00 μmol·L^-1 dNTPs、0.40 U Taq DNA聚合酶、0.40 μmol·L^-1 SSR引物、1.00 μL DNA(60.00 ng·μL^-1)，加ddH2O至终体积10.00 μL；对基本扩增程序作了改进，适 宜的扩增程序为：94 ℃预变性5 min后进行20个迫降循环，94 ℃变性45 s，60 ℃退火45 s，72 ℃延伸 1 min，每个循环降低0.5 ℃；再进行15个循环，94 ℃变性45 s，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min；72 ℃延伸10 min，16 ℃保存。对PCR产物的电泳检测采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染法）。     

外源钙对苹果果实乙烯生成的影响

 外源Ca2 + 浓度低于350 mmol ·L^-1时, 可促进‘红富士’苹果果实乙烯释放, 在400 ～1 000 mmol·L^-1之间时, 乙烯的释放速率仅为对照的29. 8 %～41 %。分别用高浓度(500 mmol·L^-1) 与低浓度(80 mmol·L^-1) CaCl₂处理果实12 h, 随处理时间延长, 低浓度钙促进乙烯释放量持续增加, 12 h 时乙烯释放量是2 h 时的2. 9 倍, 而高浓度钙抑制乙烯生成的效应比较稳定, 保持在12. 6～14. 4 nL·g^-1。低浓度的Mg²⁺、Mn²⁺也有刺激乙烯生成的作用。Ca²⁺的胞内流动抑制剂La³⁺及CaM的抑制剂TFP (三氟啦嗪) 在80 mmol·L^-1的CaCl₂存在时, 明显抑制乙烯释放。     

梨叶片中苹果褪绿叶斑病毒的引物原位标记检测

 选用带苹果褪绿叶斑病毒的香梨叶片，制备成适合进行原位RT-PCR的石蜡切片。设计特异引物，利用引物原位标记技术对切片组织中的病毒进行了检测研究，结果表明，PRINS-FITC染色法和PRINS-Rhodamine染色法均能获得良好的检测效果，有病毒部位分别显示绿色荧光和红色荧光，而且荧光出现的位置与原位RT-PCR检测的结果一致。由此证明引物原位标记技术可用于果树病毒的原位检测。     

两种独行菜种子cDNA-SRAP反应体系的建立及优化

以2种独行菜种子为试材,采用cDNA-SRAP技术,研究了dNTPs、Mg~(2+)、上下游引物、cDNA模板、Taq DNA聚合酶浓度等5个因素对独行菜cDNA-SRAP反应体系扩增结果的影响,以期得到适合2种独行菜种子的cDNA-SRAP反应体系,并且对cDNA-SRAP扩增条件进行了优化。结果表明:优化的最佳cDNA-SRAP反应体系(20μL)为10×PCR buffer,cDNA模板用量100ng,Mg~(2+)浓度1.75mmol·L~(-1),dNTPs浓度0.275mmol·L~(-1),引物浓度1.0μmol·L~(-1),Taq DNA聚合酶用量0.5U;利用优化的cDNA-SRAP反应体系能够扩增获得清晰、数目多的条带,可用于后续深入研究2种独行菜不同处理下差异表达基因。     

木菠萝ISSR反应体系的建立和优化

以木菠萝为材料,研究了模板DNA、Taq DNA聚合酶、引物、Mg2+ 及dNTPs浓度对ISSR-PCR扩增结果的影响,得出木菠萝ISSR的较佳反应体系为:在20μI反应体系中DNA模板1.6 ng·μI-1,Taq DNA聚合酶1.25 U·(20μl)-1,引物0.24 μmol·L-1,dNTPs 0.2 mmol-1 ,Mg2+ 2 mmol· L-1,10×PCR缓冲液2.0μl.     

正交设计直观分析法优化苦瓜SSR-PCR反应体系

以苦瓜‘MC9’为试材,采用L16(45)正交实验,对苦瓜SSR-PCR反应体系的Mg2+浓度、dNTPs浓度、模板DNA量、Taq聚合酶量、引物浓度等5个因素的4个水平进行优化试验,并通过正交设计直观分析法对Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶量进行了单因素确定。结果表明:最佳反应体系为1μL 10×PCR buffer,Mg2+浓度为1.75mmol·L~(-1),dNTPs浓度为0.25mmol·L~(-1),Taq DNA聚合酶1U,DNA 100ng,引物0.20mmol·L~(-1),ddH2O补足至10μL。     

外源水杨酸对黄瓜叶片几种酶活性和抗氧化物质含量的影响

 采用不同浓度的水杨酸(SA) 对营养液培养的黄瓜( Cucumis sativus L. ) 进行处理, 结果表明, 不同浓度的SA 均明显提高了黄瓜叶片中过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶的活性, 其中以SA 200μmol·L^-1处理的效果最为显著。SA 100μmol·L^-1的处理显著抑制了IAA 氧化酶和抗坏血酸氧化酶的活性, 而SA 200 和400μmol·L^-1的处理则有促进作用。SA 100μmol·L^-1的处理显著增加了黄瓜叶片中还原型抗坏血酸、还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的含量。     

链格孢属小孢子种ISSR和RAPD-PCR最佳反应体系的建立

以13个链格孢属小孢子种菌株为试材,采用正交实验设计的方法,研究Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶和引物4个因素在4个水平上对链格孢属小孢子种的ISSR和RAPD反应体系的影响。结果表明:链格孢属小孢子种ISSR和RAPD的最佳反应体系为25μL的ISSR-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50μL,Mg2+浓度为2.50mmol/L,dNTPs浓度为0.10mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25U;在RAPD-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50μL,Mg2+浓度为2.00mmol/L,dNTPs浓度为0.15mmol/L,引物浓度为0.60μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25U;在此基础上,对最佳反应体系的退火温度进行了筛选确定;在确定退火温度后,采用最佳反应体系,用ISSR引物UBC808和RAPD引物OPE07进行稳定性和通用性验证,结果表明该优化反应体系具有较好的稳定性和通用性。     

辣椒离体植株再生及其变异的SSR检测

采用6个不同基因型辣椒（Capsicum annuum L.）的子叶、下胚轴、去除生长点并带下胚轴和各切去一半的两片子叶、去除生长点并带下胚轴和半片子叶为外植体，分别培养在附加不同激素和 AgNO₃ 的MB₅和MS培养基上，研究不同基因型、外植体、激素配比和AgNO₃等对外植体不定芽诱导和芽伸长的影响。结果表明，不定芽诱导以MB₅+2.0 mg·L^-1 TDZ+1.0 mg·L^-1 IAA+4 mg·L^-1 AgNO₃培养基最佳，诱导率最高可达100 %。而芽伸长的最佳培养基为MB₅+3.0 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 IAA+5.0 mg·L^-1 AgNO₃+2.0 mg·L^-1 GA₃，最高伸长率可达87.5 %。生根培养基为MS+0.2 mg·L^-1 IAA+0.1 mg·L^-1 NAA，生根率均达100 %。不同的外植体类型具有不同的不定芽诱导和芽伸长的能力，以去除生长点并带下胚轴和各切除一半的两片子叶作外植体时的诱导效果最好。用50对SSR引物检测再生植株，其中86株伏地尖的再生植株和对照植株间均没有扩增出差异条带，而茄门再生植株的SSR检测结果有12对引物表现多样性。     

不同供氮水平对韭菜产量和品质的影响

 采用水培法研究了不同供氮水平对‘汉中冬韭’产量、硝酸盐含量和营养品质的影响。结果表明: 2～20 mmol·L ^{- 1}氮素水平范围内, 随韭菜叶片硝酸盐含量增加硝酸还原酶活性也呈升高趋势。当氮素水平为8～12 mmol·L ^{- 1}时, 韭菜产量、维生素C、可溶性糖、蛋白质含量均处于较高水平, 而硝酸盐含量和纤维素含量处于较低水平。以产量和品质作为衡量指标, 水培韭菜以8～12 mmol·L ^{- 1}的氮素水平为宜。     

对羟基苯甲酸对豇豆枯萎病菌的抑制作用

研究了不同浓度的对羟基苯甲酸(p-HB)对豇豆枯萎病菌孢子萌发、菌丝生长及挑战接种后对幼苗发病率的影响。结果表明：低浓度p-HB对豇豆枯萎病菌菌丝生长抑制作用不明显，而中、高浓度（5.0、10.0 mmol·L^-1）p-HB对菌丝生长的抑制作用达到极显著水平；在1.0～10.0mmol·L^-1范围内，p-HB 随着浓度的升高对豇豆枯萎病菌孢子萌发的抑制作用越大；1.0～10.0 mmol·L^-1的p-HB均能降低幼苗的发病率，尤其是浓度为10.0 mmol·L^-1时，能显著降低幼苗的发病率。     

杧果生长期喷施水杨酸处理对果实采后品质和病害的影响

 在杧果（Mangifera indica L. 'Zihua'）生长期分别用1和0.1 mmol·L-1水杨酸（清水为对照）进行3次喷施处理,果实采收后于13℃,85%~95% RH的环境下进行贮藏,并定期取样进行观察测定。结果表明,0.1mmol·L-1水杨酸处理能延缓杧果果实衰老,显著抑制果实病斑扩展,有效降低果实的接种发病率;而1mmol·L-1水杨酸的作用却相反。     

根癌农杆菌介导Cry1Ac基因转化‘雪青’梨获得转基因植株

 以‘雪青’梨叶片愈伤组织为外植体, 经根癌农杆菌介导将CaMV35S启动子调控下的Cry1Ac基因导入‘雪青’梨。698块愈伤组织和231个Kan^r芽与携带表达载体质粒pBX203的根癌农杆菌菌株LBA4404共培养3 d后, 转入含50 mg·L^-1 Kan的筛选培养基培养30 d, 15 d转接1次。结果表明,在MS + 5 mg·L ^-1 6-BA + 0.1 mg·L^-1 IAA筛选培养基中, Kan^r芽率为34.24% , 在1/2MS + 2 mg·L^-1 IBA+ 0.5 mg·L^-1 6-BA + 500 mg·L^-1AC筛选培养基中, 15.58% Kan^r芽生根。共获得再生植株32株, 经PCR和Southern-blot分析证明, 其中4株的基因组已成功导入和整合Cry1Ac基因。     

外源水杨酸对韭菜硝酸盐累积及还原同化的影响

 针对韭菜生产中硝酸盐累积问题，研究了叶面喷施水杨酸(SA)对韭菜硝酸盐累积及还原同化的影响。在不同氮素水平下，叶面喷施3.0 mmol·L^-1SA后6～9 d可明显降低韭菜叶片硝酸盐含量15.9％～21.6％，而当SA水平达到10.0 mmol·L^-1时会加重硝酸盐的积累。叶面喷施3.0 mmol·L^-1SA后9 d，韭菜叶片硝酸还原酶(NR)和谷胺酰氨合成酶(GS)活性分别比对照增加了48.9%和40.3％、净光合速率(Pn)和可溶性蛋白含量分别提高了43.4%和21.3％；同时，韭菜叶片谷氨酸草酰乙酸转氨酶(GOT)活性和谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT)活性也均有增加。因此，叶面喷施的外源水杨酸显著提高了氮还原动力泵NR活性以及氮同化动力泵GS活性，同时调动光合作用和转氨作用的积极协同配合，促进了硝态氮转化为游离氨基酸和可溶性蛋白，减少了硝酸盐进入液泡贮积。     

化感物质己二酸二异丁酯对茄子黄萎病及幼苗生长的化感效应

 采用模拟的方法，研究了己二酸二异丁酯对茄子黄萎菌及茄子种子萌发、幼苗生长的化感效应。结果表明，己二酸二异丁酯在黄萎菌培养的前阶段极显著地抑制了菌丝的生长，培养7 d时，1.0 mmol·L^-1的抑制作用最大；11 d时，则促进了菌丝的生长，但未达到显著水平。田间抗病试验结果表明，各浓度己二酸二异丁酯均提高了茄子幼苗对黄萎病的抗性，其中以0.5 mmol·L^-1处理最好。己二酸二异丁酯低浓度时促进了茄子种子的萌发，增加了幼苗的株高、茎粗、地上和地下部干鲜质量、叶绿素含量和根系活力，而随着浓度增大，促进作用减弱或者表现出抑制作用。低浓度的己二酸二异丁酯对叶片丙二醛（MDA）含量和细胞膜相对透性起化感抑制作用，并随浓度增加作用强度增大；但浓度增至1.0 mmol·L^-1时，表现化感促进作用。     

适于制作人工种子的一品红体细胞胚的培养

 MS + 2,4-D 2.0 mg·L ^{- 1} + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1}固体培养基较适合一品红苞片诱导愈伤组织。MS+ 2,4-D 1.0 mg·L ^{- 1} + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1} +水解酪蛋白80 mg·L ^{- 1}固体培养基上体细胞胚分化率最高。活性炭、MS培养基和悬浮振荡培养有利于高频率体细胞胚发生。球形、心形及梨形胚及时转入添加NAA 0.2 mg·L ^{- 1}、6-BA 0.5 mg·L ^{- 1}及水解酪蛋白80 mg·L ^{- 1}的MS液体培养基中, 有利于高质量体细胞胚发生。子叶期胚及时转入添加ABA 0.5 mg·L ^{- 1}的上述培养基中, 会提高正常体细胞胚的百分率。用高质量(子叶期) 的一品红体细胞胚包埋制作人工种子, 在无菌条件下萌发率为58.1%。     

不同种类外源多胺缓解番茄盐胁迫伤害的研究

采用水培法，以耐盐能力较弱的番茄品种江蔬14号为试验材料，研究了盐胁迫下不同种类、不同浓度外源多胺对番茄幼苗生长及质膜透性 的影响。结果表明：100 mmol·L^-1的NaCl胁迫12 d，番茄幼苗的株高相对生长率、主根长相对生长率及植株的干质量、鲜质量降低，叶片质膜透性 增加；喷施外源多胺可以缓解盐胁迫对幼苗生长的抑制作用，其中100 mg·L^-1 Spd、100 mg·L^-1 Spm和150 mg·L^-1 Put作用效果最为明显。     

盐胁迫下芦荟叶同化组织细胞中ATP酶活性超微结构定位及Si的作用

 利用电镜―细胞化学技术研究了盐胁迫下芦荟（Aloe vera L.）叶同化组织细胞中ATP酶（ATPase）分布特性及外源硅（Si）的作用。结果表明,正常生长情况下,芦荟叶同化组织细胞中液泡膜ATPase活性明显强于质膜ATPase,在细胞壁初生纹孔场观察到很强的ATPase活性。NaCl 100 mmol·L^-1处理30 d,浇灌的营养液中不加可溶性Si,芦荟叶同化组织细胞中液泡膜、质膜和初生纹孔场ATPase活性显著减弱,浇灌的营养液中加Si 2.0 mmol·L^-1处理,芦荟叶同化组织细胞中ATPase活性则显著增强,尤其是在液泡膜和初生纹孔场。叶同化组织细胞中ATPase活性的差异性反映着芦荟叶生理状态和功能的差异性,可溶性Si调节或增强盐胁迫下芦荟ATPase活性是Si缓解芦荟盐胁迫伤害效应的重要细胞生理机制。