斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白纯化及其结构分析

通过饱和硫酸铵分步盐析结合柱层析纯化温和气单胞菌免疫的斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白(Ig)，结果表明，斑点叉尾鮰血清Ig主要分布在35％～55％的硫酸铵沉淀区间；而在Sepharose-4B凝胶柱和DEAE-52阴离子交换柱层析纯化的Ig均出现在第1个蛋白质峰。SDS—PAGE分析表明，纯化后的血清Ig纯度提高。通过变性还原、变性非还原和非变性非还原3种条件下的免疫印迹(Westernblot)试验对血清Ig的结构进行初步分析，发现SDS变性还原条件下血清Ig重链分子量为72kD，轻链有3条，其分子量分别为21kD、23．5kD和26kD；在变性非还原条件下血清Ig则出现多种结构形式，主要条带的分子量分别为760kD、525kD、330kD和230kD；而在非变性非还原条件下Ig仅出现一种结构形式，分子量约为870kD。     

斑点叉尾鮰人工繁殖研究

根据斑点叉尾鮰适合在德宏州生长繁殖的生物学特性,在2004~2005年进行了人工繁殖试验。结果表明：斑点叉尾鮰产卵温度范围为25～29℃,最适温度为27℃,水温超过31℃不利于受精卵的胚胎发育和鱼苗成活。孵化水温27～29℃。水中溶氧在5mg/L以上。为今后苗种规模化的生产提供了技术参数,解决了鱼苗长期靠引进,生产规模难以扩大等实际问题。     

斑点叉尾鮰血液学指标研究

对斑点叉尾鮰的血液学各项指标进行测定的结果表明,与健康组对比,患病组除嗜碱性粒细胞及平均HGB浓度略有升高外,其他数据都降低。健康组红细胞数为2.54×1012个/L,患病组为2.28×1012个/L,患病组红细胞数显著降低(P<0.05);健康组白细胞数为224.99×109个/L,患病组为116.20×109个/L,两者存在极显著差异(P<0.01);健康组红细胞压积为42.30%,患病组为37.26%,两者存在极显著差异(P<0.01);健康组血小板总数(血栓细胞)为24.67×109个/L,患病组为2.60×109个/L,两者存在极显著差异(P<0.01)。血清总蛋白和球蛋白含量升高,白蛋白含量降低,其中患病组白蛋白和球蛋白的改变与健康组相比有显著差异(P<0.05)。     

斑点叉尾鮰养殖试验总结

斑点叉尾鮰是原产于美国的一个优质淡水养殖品种。我们于2008年4月从湖北武汉空运引进平均规格4.30g/尾的苗种,投放到宛川水产综合养殖场高盐碱水体中,经六个月养殖,体重250～500g/尾,平均规格350g/尾,增重倍数81.40,饲料系数1.80,成活率达97%,结果表明,该鱼适宜在我县大面积推广。     

斑点叉尾鮰

<正>斑点叉尾鮰是从美国引进的新品种,具有适应性强、含肉率高、无肌间刺和适宜加工等特点。一般面积为20平方米的网箱,养殖产量可达1000公斤,纯利3000元左右。     

斑点叉尾鮰暴发性败血症的免疫预防研究

通过试验确定了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)全菌苗的福尔马林安全灭活浓度、最佳灭活温度及时间,并选取最佳灭活方式,制备了全菌苗F-1、F-2和F-3。采用所得全菌苗免疫斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus),测定了其对斑点叉尾鮰的免疫原性。经注射接种28d后,受免斑点叉尾鮰血清中凝集抗体效价都有显著增加。受免斑点叉尾鮰血液白细胞吞噬活性的测定结果表明,3个免疫组的吞噬百分比和吞噬指数都显著地高于对照组。这表明,采用福尔马林灭活的全菌苗F-1、F-2和F-3,均能在28d内刺激斑点叉尾鮰产生较强的免疫应答。     

斑点叉尾鮰常见病害的防治

介绍斑点叉尾鮰常见病害的防治方法,包括出血性败血病、细菌性肠炎病、烂尾病、小瓜虫病、轮虫病、粘孢子虫病、锚头鳋病等,以供养殖户参考。     

斑点叉尾鮰病害防治技术

总结了斑点叉尾鮰养殖过程中病害的防治措施,包括鱼塘清整与消毒、种苗消毒、水质调节、日常管理以及几种常见病害的防治技术,以为斑点叉尾鮰健康养殖提供参考。     

湘西自治州斑点叉尾鮰产业化发展探究

探讨了湘西自治州斑点叉尾鮰产业发展的现状、优势,制约因素以及发展策略.湘西自治州斑点叉尾鮰产业化发展具有明显的资源优势和产业化发展优势,可以拉动当地农村经济的快速增长.分析了湘西自治州斑点叉尾鮰产业化发展面临的主要问题,提出了促进斑点叉尾鮰产业化发展的建议.     

斑点叉尾鮰鱼头明胶性质的研究

比较了斑点叉尾鮰Ietalurus punetaus鱼头骨明胶与猪皮明胶的凝胶强度、黏度、氨基酸组成、红外结构以及相对分子质量分布等物理化学性质的差异.结果表明:斑点叉尾鮰鱼头骨明胶的Bloom强度和黏度分别比猪皮明胶高26.7 Bloom和3.93 mPa*s;明胶氨基酸总量比猪皮明胶高10.78%～24.63%;斑点叉尾鮰鱼头骨明胶的结构与猪皮明胶一致,同时头三道胶相对分子质量分布与猪皮明胶相似.研究表明,斑点叉尾鮰鱼头明胶具有作为可部分替代哺乳动物明胶的潜力.     

斑点叉尾(鱼回)血清免疫球蛋白纯化及其结构分析

通过饱和硫酸铵分步盐析结合柱层析纯化温和气单胞菌免疫的斑点叉尾(鱼回)血清免疫球蛋白(Ig),结果表明,斑点叉尾(鱼回)血清Ig主要分布在35%～55%的硫酸铵沉淀区间;而在Sepharose-4B凝胶柱和DEAE-52阴离子交换柱层析纯化的Ig均出现在第1个蛋白质峰.SDS-PAGE分析表明,纯化后的血清Ig纯度提高.通过变性还原、变性非还原和非变性非还原3种条件下的免疫印迹(Western blot)试验对血清Ig的结构进行初步分析,发现SDS变性还原条件下血清Ig重链分子量为72 kD,轻链有3条,其分子量分别为21 kD、23.5 kD和26 kD;在变性非还原条件下血清Ig则出现多种结构形式,主要条带的分子量分别为760 kD、525 kD、330 kD和230 kD;而在非变性非还原条件下Ig仅出现一种结构形式,分子量约为870 kD.     

提高冻藏鮰鱼片解冻品质的研究

研究抗冻剂浸渍对-18℃,-30℃和-50℃ 3种冻藏温度的鮰鱼片解冻后的品质和蛋白质变性的影响。结果表明：添加抗冻剂降低了解冻鮰鱼片的pH值,减少解冻后水分流失,维持较低的K值和挥发性盐基氮含量,保持解冻鱼片较好的品质;降低TBARS值,缓解脂肪氧化;保持较高的盐溶蛋白含量和Ca²⁺-ATP 酶活性,减轻解冻鮰鱼片蛋白质冷冻变性的程度。     

磺胺二甲氧嘧啶钠对斑点叉尾鮰血清生化指标和组织的影响

采用灌喂方法,研究不同剂量磺胺二甲氧嘧啶钠(SMS)100、200、400mg/kg对斑点叉尾鮰门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(CRE)、尿素(UREA)等血清生化指标以及肝脏和肾脏组织的影响。结果表明:连续灌药5d后,对照组与给药组斑点叉尾鮰血清中的AST、ALT、ALP、LDH和UREA均无显著性变化,按400mg/kg体质量给药组的肌酐存在显著性变化(P<0.05)。连续灌药10d后,与对照组相比,给药组AST、ALT、ALP、LDH、CRE、UREA均有显著性变化。SMS可导致肝细胞核溶解或细胞溶解,肾脏肾小管上皮细胞局部坏死,且浓度越高,损害越大。试验表明,100mg/kg的剂量对斑点叉尾鮰在较长时间的使用过程中毒副作用较小,在5d内使用是安全的;200mg/kg的剂量在较短时间内使用是安全的,但是不能长时间使用,否则会对肝脏及肾脏造成损伤;而高剂量的400mg/kg对斑点叉尾鮰在较短时间内仍具有较大的毒副作用,表现在肾脏上的损伤。     

斑点叉尾鮰肠败血症PCR诊断方法的建立

为了建立快速、敏感的聚合酶链式反应(PCR)诊断斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus的肠败血症技术,作者根据NCBI公布的鮰爱德华氏细菌序列,设计了一对特异性诊断引物CM3/CM4,对鮰爱德华氏细菌特异基因片段进行PCR扩增试验,PCR反应条件的优化以及不同检测材料的比较,同时测试了该方法的特异性和敏感性,并对广西4个市县临床样品进行了检测.结果表明:用该引物可以扩增到与预计大小相符的276 bp鮰爱德华氏菌特异性片段;PCR反应与Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌、河弧菌、迟缓爱德华氏菌及海豚链球菌无交叉反应;用该PCR法可以检测出病鱼脑、肝、肾及脾中的病原菌,检测的最低细菌数为12个,且病鱼内脏组织、菌落及菌液均可直接用于该PCR扩增;临床菌株检测结果与基于菌株16S rRNA基因序列系统进化分析和生化鉴定结果一致.因此,本试验中所建立的PCR检测方法在斑点叉尾鮰肠败血症的诊断和防治方面具有较好的应用前景.     

不同水温下盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰血浆的药代动力学研究

研究不同水温(18、28 ℃)条件下盐酸氯苯胍(robenidine hydrochloride,ROBH)在斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)血浆的药代动力学特征。以20 mg·kg^-1体质量剂量的盐酸氯苯胍单次口灌斑点叉尾鮰,采用高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中盐酸氯苯胍的浓度,内标法定量,并采用3p97药代动力学软件计算药代动力学参数、开展模型分析。结果表明,在不同水温条件下盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰血浆的药时曲线均符合二室模型特征,动力学方程分别为C_{18 ℃}=4.17e^-0.01t+2.48e^-0.008t-6.65e^-0.05t和C_{28 ℃}=7.69e^-0.02t+0.13e^-0.01t+-7.82e^-0.27t。血浆中盐酸氯苯胍达峰时间T_peak 分别为42.36和10.03 h,峰浓度值C_max分别为3.51和5.76 μg·mL^-1,表观分布容积V/F(c)分别为3.79和2.78 L·kg^-1,分布相的一级速率常数α分别为0.248和0.222 h^-1,消除相的一级速率常数β分别为0.006和0.007 h^-1,吸收半衰期T_1/2(ka)分别为14.67和2.54 h,消除半衰期T_1/2(β) 分别为85.52和58.63 h,中央室向周边室转运的一级速率常数K₁₂分别为0.000 2和0.000 2 h^-1,周边室向中央室转运的一级速率常数K₂₁分别为0.009和0.01 h^-1,药-时曲线下面积分别为554.18和326.74 μg·mL^-1·h^-1。研究结果表明,盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰体血浆的吸收、分布和消除受水温的影响显著,高水温条件下盐酸氯苯胍的达峰时间短,峰浓度值约是低水温时的2倍,水温对血药曲线下面积的影响较大,对肾清除率影响不大。研究结果为盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰养殖过程中不同季节的合理使用提供一定理论依据。     

斑点叉尾鮰柱形病病原的分离鉴定及药敏试验

从网箱患柱形病的斑点叉尾鮰病灶中分离到一株细菌(YZ130310),经回归感染试验证实其具有高度致死性.经形态学观察、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析鉴定,其主要特征为:革兰氏阴性,菌体细长、两端钝圆、弯曲或直的杆状,菌落浅黄色,边缘不整齐呈根须状;氧化酶、过氧化氢酶阳性,分解酪素和明胶,不分解纤维素、几丁质、酪氨酸、七叶灵和淀粉,硝酸盐还原阳性,吲哚和葡萄糖产气阴性.菌株的16S rRNA基因序列分析结果表明,菌株YZ130310与GenBank上登录的柱状黄杆菌(Flavobacterium Columnare)ATCC 49512株的16S rRNA序列同源性最高,其相似性达99.6％;在基于16S rRNA基因序列构建的系统发育树中,菌株YZ130310与柱状黄杆菌(AY095342)聚为一支.综合形态及生理生化特点和分子生物学的分类鉴定结果,菌株YZ130310可鉴定为柱状黄杆菌(F Columnare).16种抗菌药物的敏感性试验结果表明,菌株YZ130310对头孢哌酮等7种药物敏感,对阿米卡星和氧氟沙星2种药物中度敏感,对头孢氨苄等7种药物存在不同程度的耐药性.     

4个品系罗非鱼血清免疫球蛋白的分离纯化及分子量测定

利用A蛋白柱亲和层析法分离纯化了4个品系罗非鱼血清的免疫球蛋白(Ig)。优化的分离纯化条件为:进样量1.0mL血清,4℃结合3.5 h,流速1.3 mL/min。通过标准曲线法测定分离得到的免疫球蛋白最高浓度在1.87～2.95 mg/mL之间。绘制洗脱曲线,比较A蛋白柱亲和层析法分离纯化4个品系罗非鱼血清Ig的效果。SDS-PAGE电泳检测发现,4个品系罗非鱼血清Ig重链、轻链的分子量分别在80、30 ku左右。表明A蛋白柱亲和层析法可用于罗非鱼血清Ig的快速分离纯化。     

斑点叉尾鮰气单胞菌的分离与鉴定

集约化养殖中,气单胞菌属细菌已成为危害渔业生产的重要致病菌。本研究自患病斑点叉尾鮰体内分离出5株气单胞菌,经形态学观察、生长特性及生理生化反应测试、鉴定,其中AHIA02、AHIA04、AHIA05为嗜水气单胞菌;AHIA01、AHIA03为豚鼠气单胞菌。用20种常规抗生素分别对分离菌株进行药物敏感性试验,结果表明:所有分离菌株仅对奥复星、复方新诺明、先锋必素等3种抗生素敏感,交叉耐药性和多重耐药性现象严重。     

奥尼罗非鱼消化道蛋白酶分布与特性

研究了 4组 (Ⅰ～Ⅳ )平均体重分别为 5 5 1 4、 1 2 2 82、 2 2 5 6 8和 1 1 1 81g的奥尼罗非鱼 (Oreochromisniloticus×O .aureus)的消化道蛋白酶分布与特性。结果表明 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组试验鱼肠道各肠段 (前肠、中肠、后肠 )蛋白酶活性相对比值分别为 1∶0 6 6∶0 34、 1∶0 85∶0 5 4和 1∶0 88∶0 74 ,其胃、肝胰脏、全肠中蛋白酶活性相对比值分别为 1∶1 86∶2 1 9、 1∶1 1 1 8∶2 3 84和 1∶3 1 5∶3 5 8。Ⅳ组试验鱼胃、肝胰脏、肠道蛋白酶在pH分别为 2 0、 1 0 0和 9 5～ 1 0 5时活性最高 ;最适反应温度分别为 5 5、 6 0和 5 5℃ ;最适反应底物的质量浓度分别为 1、 0 8和 4g·L-1 。Cu2 + 、Fe2 + 、Zn2 + 、Ca2 + 能提高胃蛋白酶活性 ,Cu2 + 、Zn2 + 会抑制肠道蛋白酶活性 ,但能提高肝胰脏蛋白酶活性 ,Ca2 + 对肝胰脏和肠道蛋白酶活性均有抑制作用。