猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定

我国是世界上养猪量和规模最大的国家,最近几年来我国的养猪业已经逐渐走向了规模化和产业化的发展道路,但是因饲养的密度和规模都较大,容易出现猪流感的反复发生和流行,这对于我国养猪事业的良好发展具有十分不利的影响.猪流感病毒(SIV)是正粘病毒科的一部分,会单独诱发相应的猪流感.猪群中一旦发生猪流感,还会给人们的正常生产生活造成严重的负面影响,需要对这中病毒进行全面有效的控制和处理.本文主要是从猪群猪流感的内涵入手,针对猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定情况进行全面细致的分析和说明.     

猪流感病毒的分离与鉴定

从广东某猪场表现发热和流鼻涕等呼吸道症状的猪群采集28份样品,用鸡胚分离到9株病毒。将病毒传代至第6代,经血清学鉴定、理化特性检查、电镜观察、生物学特性检查和人工致病试验,结果表明,4株分离株为H1N1亚型猪流感病毒,5株为H3N2亚型猪流感病毒。     

猪流感病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从我国东北地区猪群中分离出 3株H3 N2 猪流感病毒 (SIV) ,分别命名为A/Swine/Heilongjiang/ 1/ 2 0 0 0、A/Swine/Heilogjiang/ 2 / 2 0 0 0和A/Swine/Heilogjiang/ 3/ 2 0 0 0。SIV分离株第 8代病毒液对 0 .5 %豚鼠红血球的血凝价分别为2 0 48log2 、2 0 48log2 、40 96log2 ;将其制成琼扩 (AGP)抗原与禽流感标准阳性血清均出现清晰白色沉淀线 ;与流感病毒H3 亚型标准阳性血清的血凝抑制 (HI)价分别为 8log2 、7log2 、7log2 ,但不能被鸡新城疫阳性血清抑制。这 3株SIV都为热不稳定型 ;均能凝集驴、绵羊、鸡、兔、豚鼠、小鼠、大鼠、人O型血红血球 ,对马、牛红血球均不凝集 ;感染一个病毒最小致死量的鸡胚平均死亡时间分别为 86 .4、12 9.6和 91.2小时 ;每 0 .2ml病毒液鸡胚半数感染量分别为 4.75lg、4.5lg、和 6 .0lg ;对鸡的静脉内接种致病指数和脑内接种致病指数各为 0 .5 6、0 .32、0 .5 2和 0 .77、0 .38、0 .5 2 ;对小鼠的半数致死量分别为 2 .6lg、2 .0lg和 2 .5lg ;试验感染小鼠、豚鼠和猪均可发病并出现死亡。存活动物接种后第 6天和第 14天的血清 ,其HI价均在 8log2 以上 ,而AGP均为阴性。     

无锡地区猪流感病毒的分离与鉴定

对从江苏省无锡市几个呼吸道症状明显、高热发病的猪群中采集到的棉拭子和猪肺样品进行病毒分离,经纯化后,对病毒的血清型进行鉴定。结果表明:分离获得猪流感病毒(SIV)H3N2亚型1株、H1N1亚型1株、H9N2亚型毒株2株。这一结果为该市有效防控猪流感、深入研究SIV的传播机制和遗传演化规律提供了良好的流行病学资料。     

广西部分地区猪流感病毒的血清学调查

为了解广西猪群中猪流感(SI)的流行情况,以猪流感病毒H3N2亚型作为诊断抗原,采用微量血凝抑制试验(HI)方法,对广西部分市(县)的猪群进行猪流感的血清学调查.在12个市(县)采集的1000份血清中,有10个市(县)检出H3N2抗体,共有257份血清呈H3N2抗体阳性,平均阳性率为25.7%.百色的阳性率最高,达到82.9%,贵港和南宁市郊两地没有检出阳性,其它9个市(县)的阳性率在13.0%～45.7%之间.结果表明我区猪群中很可能存在H3N2亚型猪流感感染,其中百色地区猪流感的感染率比较高.     

广东云浮部分猪场猪流感血清学调查与分析

从广东云浮市猪场采集39个猪场种公猪、后备和经产母猪血清1506份,用微量血球凝集抑制(HI)试验监测H1、H3、H5、H9亚型猪流感抗体。结果表明:所监测猪场大部分猪群存在H1亚型猪流感抗体,场阳性率为71.79%(28/39),猪群血清抗体阳性率在22.2～100%之间,总阳性率为59.07%(890/1506);部分猪群存在H3亚型猪流感抗体,场阳性率为74.35%(29/39),猪群血清抗体阳性率在5～100%之间,总阳性率为67.75%(1020/1506);未监测到H5、H9亚型猪流感抗体的存在。     

一株H1N1亚型猪流感病毒的分离与鉴定及部分生物学特性的研究

本研究从广西某规模化猪场临床病猪肺脏组织中分离到一株猪流感病毒,并对该毒株进行了亚型鉴定和部分生物学特性的研究.结果显示分离到的猪流感病毒为H1N1亚型,HA效价最高达到27.对该毒株分别进行耐热性实验、耐酸性实验、乙醚和氯仿敏感性试验,发现该毒株对热不稳定,并对酸、乙醚和氯仿均敏感,说明该毒株对自然的抵抗力较差.     

华南地区猪群猪流感病毒病原学和血清学调查

为了解华南地区猪群中猪流感病毒(SIV)的流行及其遗传变异情况,本研究从2016年~2017年广东、广西等地猪群236份猪肺脏病料组织和143份鼻拭子样品中分离鉴定得到3株SIV,全基因组测序和遗传演化分析结果显示,3个分离株均属于H1N1亚型欧亚类禽分支SIV,并且均与pdm09分支病毒株发生了重组。HA蛋白分子特征分析结果显示,A/Swine/Guangxi/NK/2016 HA蛋白第23位糖基化位点发生了缺失。3265份血清样品抗体监测结果显示,欧亚类禽H1N1、pdm09 H1N1和H3N2 SIV的血清抗体阳性率分别为27.53%、20.98%和34.85%。另外,0.64%的(21份)血清样品为H9N2亚型流感病毒抗体阳性,并且猪群中不同亚型和不同分支SIV之间混合感染的情况非常普遍。猪群中流感病毒血清抗体监测结果显示,EA H1N1、pdm09和H3N2亚型SIV HI抗体滴度最高均可达到1:1280,而H9N2亚型HI抗体滴度最高为1:160,表明H9N2 AIV虽然可以感染猪,但对猪还不适应。各月份的血清抗体阳性率分析显示,SIV的流行具有季节性,冬季(11月、12月和1月份)的流行最为严重。本研究可为华南地区猪群SI防控及疫苗株的筛选提供参考依据。     

东莞市茶山镇猪群H3亚型猪流感病毒感染的血清学调查

由于猪流感病毒和人流感病毒在猪和人之间可以交叉感染和传播,因此对猪流感进行血清学调查具公共卫生意义。本实验对本镇6个村90份非流感免疫猪血清样本用HI的方法进行检测,结果表明H3亚型SIV的感染率较高,应当进一步加强本地区防疫工作。     

猪流感病毒H3N2亚型的分离鉴定与全基因组序列测定

通过鸡胚接种、MDCK细胞培养、血凝及血凝抑制试验、RT-PCR等方法,笔者在四川首次分离并鉴定了1株既能在鸡胚上稳定传代又能在MDCK细胞上稳定产生CPE的H3N2亚型猪流感病毒,命名为A／swine／Sichuan／01／2006（H3N2）;NS基因的测序结果表明：该病毒分离株与A／swine／HongKong／4361／99（H3N2）、A／NewYork／429／2003（H3N2）、A／Queensland／6／2000（H3N2）、A／New South Wales／4／1999（H3N2）等具有代表性的标准毒株的同源性都达到99％;从MDCK细胞中抽提流感病毒基因组进行全基因克隆,构建了11个包含全基因8个基因片段的文库。全基因测序结果表明,A／swine／Siehuan／01／2006（H3N2）共8个节段,全基因序列共计13577bp;基于HA、NA推导蛋白的无根进化树结果显示,四川分离株与人流感标准株A／Queensland／6／2000（H3N2）、A／South Australia／81／2000（H3N2）有较近的亲缘关系,而与猪流感标准株A／swine／Spain／42386／2002（H3N2）的亲缘关系较远。     

猪流感病毒广东株分离鉴定及遗传进化分析

本研究从广东省某猪场采集37份疑似猪流感症状的猪鼻拭子样品,接种于9日龄SPF鸡胚并收集尿囊液,通过血凝试验、血凝抑制试验和RT-PCR鉴定,分离得到一株猪流感病毒,经RT-PCR分别扩增8个基因片段,进行基因测序及序列分析,与GenBank收录的参考毒株比对并构建进化树。结果显示,分离毒株为H1N1亚型猪流感病毒,将其命名为A/swine/Guangdong/2/2018（H1N1）。遗传进化分析显示,分离株8个片段的核酸序列与A/swine/Guangdong/L3/2009（H1N1）对应序列的同源性均达99%以上,与经典型H1N1亚型猪流感病毒处于同一分支。分离毒株HA的裂解位点为PSIQSR↓GL,符合低致病性流感病毒分子特征。HA基因受体位点为190D、225G和226Q,表明本毒株既可以结合SAα-2,6-Gal型人类流感病毒SA受体,也有结合SAα-2,3-Gal型禽类流感病毒SA受体的可能,在28、40、104、304、498、557位氨基酸处有6个潜在糖基化位点;NA蛋白在50、58、63、68、98、146、235位氨基酸处有6个潜在糖基化位点,NA蛋白氨基酸序列活性中心位点为119E、199D、223I、275H、293R、295N,氨基酸分析位点未出现突变,表明本分离株对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性较高,但在M2蛋白中,31位氨基酸由敏感型的（S）突变为抗药的（N）,提示可能对金刚烷胺类药物产生耐药性。开展猪流感病毒分离鉴定与遗传进化分析将为广东地区的猪流感流行和变异情况提供重要信息。     

H3亚型猪流感病毒分离与鉴定

从东莞和鹤山等地不同猪场采集的40份鼻拭子或病死猪的肺、气管病料中分离到4株有血凝活性的病毒,其中3株病毒与新城疫病毒阳性血清的HI试验为阳性,另外1株病毒与抗猪流感H3亚型猪流感病毒阳性血清的HI试验为阳性;根据猪流感病毒M基因设计引物,扩增出预期的约315 bp片段,表明该病毒为H3亚型猪流感病毒。     

重庆市猪群H1亚型猪流感血清学调查

为了解我市猪流感流行状况,从重庆市59个区县58个规模场采集了1056份猪血清,205个散养户采集了768份猪血清,采用HA—H1方法进行H1亚型猪流感抗体检测,结果从21个规模猪场检出H1亚型猪流感,阳性率介于5．33％～81．82％,平均阳性率为7．82％;散养户猪血清H1亚型猪流感介于5．0％～35％,平均阳性率为5．26％。提示H1亚型猪流感在我市部分或局部地区猪流感感染相当高,且目前大部分处于隐性感染状态,应引起高度重视。     

鸡A型禽流感病毒的分离与血清学初步鉴定

从发病率颇高的产蛋鸡群和死亡率达３０％以上的肉鸡群病例中，先后分离到６株Ａ型禽流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代。可以凝集鸡红细胞而不被新城疫阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成的ＡＧＰ抗原与禽流感阳性血清在ＡＧＰ试验中出现白色的沉淀线。用ＡＩＤ９３～１分离株与１５个标准ＨＡ亚型和９个标准ＮＡ亚型的标准血清进行ＨＩ试验，结果鉴定出ＡＩＤ９３～１毒株的血清亚型为Ｈ９Ｎ３。其余５个分离株均可被ＡＩＤ９３－１株的高免血清所抑制。人工复制病例出现明显的临诊症状，可缓慢康复，不引起死亡。用日龄较小的ＡＡ鸡与攻毒鸡同居能感染发病，并引起１／５死亡。健康产蛋母鸡与发病鸡群同场饲养也可感染发病，并引起产蛋下降。这些分离株具有良好的免疫原性。通过电镜观察符合流感病毒的形态特征，病毒粒子的直径为８０～１２０ｎｍ。     

Serological Evidence of Pandemic H1N1 Influenza Virus Infections in Greek Swine

The introduction of the 2009 pandemic H1N1 (pH1N1) influenza virus in pigs changed the epidemiology of influenza A viruses (IAVs) in swine in Europe and the rest of the world. Previously, three IAV subtypes were found in the European pig population: an avian‐like H1N1 and two reassortant H1N2 and H3N2 viruses with human‐origin haemagglutinin (HA) and neuraminidase proteins and internal genes of avian decent. These viruses pose antigenically distinct HAs, which allow the retrospective diagnosis of infection in serological investigations. However, cross‐reactions between the HA of pH1N1 and the HAs of the other circulating H1 IAVs complicate serological diagnosis. The prevalence of IAVs in Greek swine has been poorly investigated. In this study, we examined and compared haemagglutination inhibition (HI) antibody titres against previously established IAVs and pH1N1 in 908 swine sera from 88 herds, collected before and after the 2009 pandemic. While we confirmed the historic presence of the three IAVs established in European swine, we also found that 4% of the pig sera examined after 2009 had HI antibodies only against the pH1N1 virus. Our results indicate that pH1N1 is circulating in Greek pigs and stress out the importance of a vigorous virological surveillance programme.     

猪流感病毒蛋白研究进展

猪流感（swine influenza,SI）是由猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）引起的猪的一种传染病,其在世界各地的广泛存在和流行,给养猪业带来了巨大的经济损失。猪流感病毒属于正黏病毒科A型流感病毒属,作者就猪流感病毒蛋白,包括血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、核蛋白（NP）、基质蛋白（M）、聚合酶蛋白（PA、PB1和PB2）和非结构蛋白（NS）进行简要概述,以期为猪流感病毒的致病机制、诊断、分子流行病学等方面的研究提供参考。     

支气管炎型H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

广东省某鸡场发生一起以严重呼吸困难、急性死亡为特征的病例,5000只鸡在1周内连续死亡400多只。通过病理剖检,几乎所有病死鸡支气管都充满干酪样物质,导致支气管严重阻塞,气管及支气管黏膜严重出血。采集病死鸡的肝脏、脾、肺和气管干酪样物质,病料经处理后通过SPF鸡胚绒毛尿囊膜接种获得一株病毒。通过琼脂凝胶免疫扩散(AGP)试验,该病毒能与禽流感标准阳性血清形成明显沉淀线,初步确定该病毒为禽流感病毒;通过血凝HA试验,该病毒能够凝集鸡红细胞,但此血凝现象不能被抗NDV血清、抗EDSV-76血清、抗H 5亚型流感单因子血清、抗H 7亚型流感单因子血清所抑制,而能被抗H 9亚型禽流感单因子血清所抑制,以及通过H 9亚型流感病毒的RT-PCR分子生物学诊断方法,最终确诊该病毒为H 9亚型禽流感病毒。动物回归试验,攻毒鸡表现与临床发病鸡一致的症状及典型病理变化,患鸡支气管被干酷样物严重阻塞,气管、支气管黏膜较严重出血,通过病料的病毒分离与鉴定,能再次分离到该病毒。