锯缘青蟹Sox基因的PCR扩增

SRY基因(sex-determining region of the Y chromosome)是人类及哺乳动物睾丸决定因子TDF(testisdetermining factor)的最佳候选基因。SRY蛋白含有204个氨基酸,其中1个约79个氨基酸区域即HMG盒(high mobility group box)是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区。由于SRY的发现,人们进而发现了1个庞大的与性别决定有关的SRY盒-Sox(SRY-related HMG box gene)基因家族。锯缘青蟹是我国重要的海洋经济蟹类之一,其性染色体和性别决定机制仍处于进化的早期阶段,在分子水平上探讨其性别决定机制尚不多见。通过采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG盒保守区的1对兼并引物,扩增了锯缘青蟹基因组的Sox基因。结果表明锯缘青蟹雌雄个体与人一样,均能扩增出1条大小约为216bp左右的基因片段,显示出该基因在进化上的高度保守性,为探索锯缘青蟹的性别决定机制及Sox基因的进化提供了分子资料。     

锯缘青蟹

锯缘青蟹不仅两个钳子大,个头儿也很大,一只螃蟹足足有500g,在市场上能卖100元／500g。大青蟹除了好吃之外,还含有丰富的矿物质、维生素,不仅能够鲜食还能药用。吃螃蟹时通常在调料里放姜末,祛除寒性,而大青蟹是温性食物,所以食用它不吃姜也不会闹肚子,这个优势是锯缘青蟹所独有的。     

锯缘青蟹吊(笼)养技术试验

锯缘青蟹,简称青蟹,是我国著名的一种食用蟹,广温广盐性海产蟹类,适宜生长水温15~31℃,盐度适应范围6.5‰~33‰,青蟹难以适应盐度、温度的剧烈变动,在梅雨高温季节往往会产出红芒和白芒两种疾病,青蟹耐干能力较强,离水后,只要鳃腔里存有少量水份,便可存活数天或数十天。本文现将锯缘青蟹吊(笼)养技术试验进行总结如下。     

印太地区锯缘青蟹的养殖和育肥

印太地区锯缘青蟹的养殖和育肥中国水产科学研究院信息所王宇锯缘青蟹（Ｓｅｙｌｌａｓｅｒｒａｔａ）在海味爱好者中已经普及。由于在主要消费国家和地区马来西亚、新加坡、台湾省和香港需求量增加，而供应量减少。所以锯缘青蟹正在来源于印太地区国家，包括孟加拉国、印...     

大鳞副泥鳅Sox基因保守区的克隆与特征分析 

为探讨大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)的性别决定与分化机制,采用Sox基因HMG盒保守区的2对简并引物,SoxN与Sox9,用以扩增大鳞副泥鳅的基因组DNA,并对其性腺组织进行RT-PCR分析。SoxN引物扩增基因组DNA共获得pdSox1、pdSox2、pdSox3、pdSox4、pdSox11、pdSox14、pdSox19、pd-Sox21等13个Sox基因,分属SoxB与SoxC类群;Sox9引物扩增基因组DNA共获得pdSox8、pdSox9等5个Sox基因,属于SoxE类群,这5个Sox基因均含有一个内含子,且内含子的起始位置一致。基于Sox基因HMG盒蛋白质的遗传距离构建的NJ系统进化树表明,大鳞副泥鳅18个Sox基因在小鼠或斑马鱼中均能找到相应的Sox直系同源基因,其中,pdSox4、pdSox8、pdSox9、pdSox11、pdSox14、pdSox19等6个基因存在基因加倍现象,具有2个或2个以上的拷贝。用Sox9引物对大鳞副泥鳅的性腺进行RT-PCR扩增和测序分析,结果表明,在精巢中表达的是pdSox9a,在卵巢中表达的是pdSox8a。以上结果表明,pdSox8与pdSox9是大鳞副泥鳅的性别相关基因,它们可能在大鳞副泥鳅的性别分化中发挥作用。     

对虾与锯缘青蟹混养的可行性及其增产措施

对虾与锯缘青蟹Scylla serrata(Forskal)混养（下称虾蟹混养）国内、外尚未,凶有系统的理论研究资料,作者经过几年研究,证实虾触混养非保可行,而且可以提高海水池塘综合经济效益,本文从理论与实践结合上论述虾触混养的可行性及其增产措施。     

扩增SRY基因鉴定塔里木兔性别的研究

[目的]采用分子生物学手段对外部性别鉴别特征缺失的塔里木兔进行性别鉴定.[方法]应用双重PCR法同时扩增SRY和APP基因进行性别鉴定.[结果]在验证PCR有效性的基础上,对未知性别的237例塔里木兔样本成功的鉴定出性别,其中121例为雄性,116例为雌性.[结论]实验所使用的引物具有高度的特异性,只能鉴别兔类动物的性别,对一些不完整的或外部性别鉴别特征缺失的兔类样品提供了可行的性别鉴定途径.     

嵌套式PCR扩增SRY基因序列鉴定牛胚胎性别体系的建立

应用源自牛X和Y染色体同源区的1对外引物P1、P2及其各自特异区的2对内引物P3、P4和P5、P6,进行嵌套式PCR反应,对中国荷斯坦公、母牛静脉血样DNA及牛胚胎样DNA进行特异性条带的嵌套式PCR扩增,并对外、内嵌套式引物的PCR反应体系进行了优化,以准确鉴定牛早期胚胎性别.结果表明,在优化了的PCR反应体系下,中国荷斯坦公牛DNA样品得到178bp和262bp的两个条带,而母牛仅得到262bp的1个条带;静脉血样DNA性别鉴定结果与实际性别相符率为100%,表明本试验建立的体系完全可以用于牛早期的胚胎性别鉴定.     

PCR在动物胚胎性别鉴定中的应用

哺乳动物Y染色体短臂上的SRY基因决定雄性发育方向。阐述了利用PCR（Polymerase Chain Reaction-聚合酶链式反应）技术,通过扩增SRY基因对附植前的胚胎进行性别鉴定的原理方法及其优缺点。     

锯缘青蟹血蓝蛋白酚氧化酶活性研究

以锯缘青蟹Scylla serrata为研究对象,运用亲和层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、十二烷基璜酸钠(SDS)-PAGE、Western-blot以及酚氧化酶活性测定等方法研究了锯缘青蟹血蓝蛋白的酚氧化酶活性以及几种金属离子对其酚氧化酶活性的影响.研究结果表明,锯缘青蟹血蓝蛋白在没有任何诱导物作用的情况下表现出酚氧化酶活性,胰蛋白酶对此活性有轻微抑制作用;与对照组相比,Ca2 和Cu2 能使血蓝蛋白酚氧化酶活性显著增强,增强率分别为281%和273%;EDTA可显著抑制Cu2 对血蓝蛋白酚氧化酶活性的激活作用,抑制率达78.5%.由此可知,锯缘青蟹血蓝蛋白确有酚氧化酶活性,且受Ca2 、Cu2 等金属离子作用的影响.     

利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别

根据GenBank中已发表的山羊SRY基因和β-乳球蛋白基因序列设计2对PCR引物,对来自3个1月龄山羊胎儿成纤维细胞的基因组DNA进行PCR扩增,分别以公羊、母羊的基因组DNA为阳性和阴性对照,同时对PCR产物进行序列测定和同源性分析。结果表明,阳性对照和GFF1细胞系有2条扩增带,阴性对照、GFF2和GFF3细胞系只有1条扩增带;序列测定结果表明,PCR扩增产物为SRY基因,利用该方法准确鉴定出1个雄性细胞系和2个雌性细胞系。     

通过粪便确定野生马鹿性别的试验

对已知性别的4份肌肉样品、4份圈养马鹿粪便样品和通过野外马鹿卧迹的排尿位置判断出性别的8份粪便样品进行扩增,其结果与实际性别相吻合。在验证了PCR有效性的基础上,对野外收集的183份马鹿粪便样品中的108份成功鉴定出性别,即:80份为雄性,28份为雌性。同时指出,由于一些粪便DNA样品中存在大量的聚合酶抑制剂,致使无法得到扩增结果。因此,对所有DNA样品均PCR扩增了3次,以提高性别鉴定的准确率和样品的利用率。     

大鲵2个Sox基因HMG–box的克隆及分析

为探明Sox基因在物种进化中的保守性及其性别分型,以大鲵雌、雄个体为材料,参照Sox基因HMG-box保守区的序列,设计简并引物扩增,两因子均在雌、雄个体内得到217 bp PCR扩增产物,不存在性别差异.将二者编码的氨基酸序列与NCBI中其他物种Sox基因编码的氨基酸序列进行比对,其中一个基因与人、斑马鱼、家鼠、鸡、热带爪蟾、扬子鳄Sox11基因的同源性均为90％.另一个基因与罗非鱼、鸭嘴兽、家鼠、红鳍东方鲀、斑马鱼、鸡、人、非洲爪蟾和大鲵Sox14基因的同源性均为90％,故根据大鲵的学名,将这2个基因分别命名为adSox11和adSox14c.adSox11和adSox14c在大鲵精巢、卵巢、肾脏和心脏中均有不同程度表达,而在胃和肝脏中几乎不表达.     

玻璃化液对锯缘青蟹不同时期幼体成活率的影响

以海水养殖对象-锯缘青蟹(Scylla serrata)5种不同时期的幼体为实验材料,利用自行配制的6种不同组合的玻璃化液对试验材料进行处理,处理时间分别是0.5 min、1.0 min、3.0 min、5.0 min、7.0 min,统计最终的成活率.结果表明:在6种不同组合的玻璃化液中,随着处理时间的延长,各期幼体的成活率逐渐下降,在不同组合的玻璃化液和不同的处理时间下均以Z3(第三期蚤状幼体)的成活率最好, F号玻璃化液(20%1.2-丙二醇 20%乙二醇)中幼体的成活率最高.