重组猪乳铁蛋白(rPLF)对断奶仔猪血清IL-1、IL-2水平的影响

通过两个试验探讨了重组猪乳铁蛋白(rPLF)对断奶仔猪血清免疫因子IL-1和IL-2水平的影响.两试验都按体重将90头28日龄断奶仔猪分成3个处理组:对照组(基础日粮)、抗生素组(基础日粮 20 mg/kg黄霉素 110 mg/kg金霉素)和rPLF组(基础日粮 730 mg/kgrPLF),试验期30 d.试验1采用杜长嘉断奶仔猪;试验2采用杜长大断奶仔猪,分两期试验(断奶后1～15 d和16～30 d).试验结束后,各处理组分别取3头体重相近的小母猪屠宰,测定血清中IL-1和IL-2的浓度.结果表明,与对照组相比,rPLF能显著提高杜长嘉仔猪血清中IL-2的水平,达46.64%(P＜0.01);显著提高杜长大仔猪断奶前期和后期血清中IL-2水平(P＜0.05);IL-1也有提高趋势.两试验结果揭示,rPLF能通过提高断奶仔猪血清中IL-1和IL-2的水平而增强断奶仔猪的免疫力.     

表达猪乳铁蛋白肽重组屎肠球菌对断奶仔猪生长性能的影响及其抗ETEC感染效果研究

本试验以表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌(pNZ8112-PLFcin/Ef)饲喂断奶仔猪,研究其对仔猪生长性能的影响和抗产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染的效果。选取28日龄体重相近的健康断奶仔猪36头,随机分为3组(重组屎肠球菌组、空载体组和培养基组),每组3个重复,每个重复4头仔猪。重组屎肠球菌组和空载体组分别饲喂添加pNZ8112-PLFcin/Ef(6×1012 CFU/kg)和pNZ8112/Ef(6×1012 CFU/kg)的基础日粮,而培养基组饲喂含有相同体积的GM17液体培养基的基础日粮。试验期26d。结果显示,与培养基组相比,重组屎肠球菌组断奶仔猪的平均日增重极显著提高(P0.01);料重比显著降低(P0.05);腹泻率明显降低,肠道菌群的均匀度和多样性指数均下降。为进一步探究表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌对断奶仔猪抵抗ETEC感染的保护作用,在连续饲喂21d后,每个重复中随机挑选1头体况相近的断奶仔猪灌服ETEC。结果发现,与培养基组相比,攻菌后重组屎肠球菌组断奶仔猪血清白细胞介素-2(IL-2)、免疫球蛋白G(IgG)含量、肠黏液中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平均显著升高(P0.05);脾脏指数显著提高(P0.05),但胸腺指数、肠段长度及重量则均无显著差异(P0.05)。综上所述,表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌能够起到促进断奶仔猪生长及抗ETEC感染的保护作用。     

表达乳铁蛋白肽的猪源罗伊氏乳酸杆菌对断乳仔猪抗霍乱沙门菌感染的效果分析

旨在分析表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗猪霍乱沙门菌感染的作用。将该重组菌连续饲喂28日龄断乳仔猪21 d,并设立空菌组、对照组以及抗生素组。第21天时对断乳仔猪连续口服感染猪霍乱沙门菌3 d,并设置7 d的观察期;仔猪感染后采集试验组与对照组血清、肠黏液及肠组织。检测结果显示重组菌组仔猪平均日增重与免疫器官指数均显著提高（P<0.05）,料重比极显著降低（P<0.01）。感染猪霍乱沙门菌后,相对于对照组,重组菌组仔猪日增重提高,腹泻率降低;重组菌组仔猪血液中IgG以及肠黏液中IL-4、sIgA的量极显著提高（P<0.01）,IL-2、IL-12、IL-6的量显著降低（P<0.05）;重组菌组仔猪肠道紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1的基因转录水平和TLR4、Myd88和MLCK的基因转录水平极显著提高（P<0.01）,仔猪肠道内猪霍乱沙门菌的数量极显著降低（P<0.01）;重组菌组与抗生素组无明显差异（P>0.05）。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21可以提高断乳仔猪的生长性能、促进肠道形态发育、增强肠道屏障功能,并且在一定程度上可以保护仔猪免受猪霍乱沙门菌的感染,表明重组菌作为微生态制剂替代断乳仔猪的饲用抗生素具有一定的应用前景。     

屎肠球菌微胶囊制剂的稳定性及对断乳仔猪生产性能的影响

本试验以自主筛选的一株屎肠球菌为对象,在抗逆性评估的基础上,通过微囊化提高耐热性和稳定性,并进行动物田间小试,评价其对断乳仔猪生长性能的影响。结果显示,通过优化保护剂与壁材的配方,改善喷雾干燥工艺参数,可使喷雾后获得的干物质中活菌数达到1010cfu/g;微囊化的屎肠球菌对高温的耐受性增强,贮存时间更久,对胃液和肠液依然具备较好的耐受性。在仔猪生长性能方面,与空白组相比,饲喂屎肠球菌组仔猪的平均日增重和日采食量分别提高37%和15%,料肉比和腹泻率分别下降16%和65%,说明该屎肠球菌微胶囊制剂可以改善仔猪生长性能。     

屎肠球菌及其在仔猪生产上的研究现状

屎肠球菌不仅具有优良的生物学特性,还可以调节机体免疫功能,提高采食量及饲料转化率,降低腹泻率,改善肠道内环境,促进动物健康,是畜牧生产及食品工业首选使用的益生菌菌种之一。文章主要综述了屎肠球菌的生物学特性及其在仔猪生产上的应用、目前存在的问题及今后的发展方向。     

表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌微胶囊制备工艺的优化

为使重组乳酸乳球菌在发酵生产后便于存储、运输,本试验利用可表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363制备微胶囊,优化微胶囊的制备工艺条件,并对胶囊化后重组菌的相关生物学特性进行检测。通过对不同壁材及壁材浓度进行控制单一变量试验,测定其包埋量,以筛选出最佳壁材及浓度。通过模拟胃肠液环境试验,比较微胶囊释放率,并对不同壁材进行保存期试验,比较最低活菌数,利用响应面试验确定最佳工艺条件,使用最佳工艺条件制备微胶囊后进行验证。优化后的结果为:选取海藻酸钠和壳聚糖作为壁材,在海藻酸钠浓度为2.49%,壳聚糖浓度为0.96%,CaCl₂浓度为6.67%,凝固时间为57 min的条件下微胶囊效果最佳,预测包埋量为7.85×10⁸ CFU/g。微胶囊在模拟胃液中稳定存在,在模拟肠液中可完全破裂,能释放出微胶囊内95%以上的乳酸乳球菌。海藻酸钠-壳聚糖微胶囊在4 ℃保存3周后,微胶囊中活菌数为1.41×10⁷ CFU/g。对微胶囊的最佳工艺条件验证结果为微胶囊的包埋量为8.08×10⁸ CFU/g;常温保存2周后,活菌数仍可达到3.89×10⁶ CFU/g;ELISA方法检测微胶囊内重组乳酸乳球菌可见表达的牛乳铁蛋白肽,抑菌试验可见微胶囊内重组乳酸乳球菌表达的牛乳铁蛋白肽对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌仍具有明显的抑制作用。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌可制备成为低成本、保存期长、耐胃液的微胶囊,为重组乳酸菌在生产中的进一步应用奠定基础。     

屎肠球菌的生物学特性及其对仔猪免疫功能的影响

屎肠球菌是动物肠道正常菌群中的菌类,对维持动物肠道菌群生态平衡起到重要作用。文章综述了屎肠球菌的生物学特性及其对仔猪免疫功能的影响。     

日粮中添加屎肠球菌对断奶仔猪生产性能及腹泻率的影响

选择8kg左右的杜洛克X长白×大白三元杂交猪60头,随机分为2个组,每组设5个重复,每重复10头猪。进行为期52d的饲养试验,研究饲粮中添加屎肠球菌（商品名：康福特）对断奶仔猪生产性能及腹泻率的影响。试验结果表明：试验组比对照组平均日增重提高了15．98％（P〈0．05）,从饲料转化率来看,试验组比对照组提高了9．19％（P〈0．O5）。与对照组相比,添加屎肠球茵腹泻率和腹泻指数均显著降低（P〈0．05）,粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌数量明显增加（P〈0．05）,大肠杆菌数量明显降低（P〈0．O5）。屎肠球菌能显著提高仔猪的生产性能,改善肠道微生物平衡。     

屎肠球菌在断奶仔猪上的应用效果

本试验旨在研究在基础日粮中添加0.05%耐热型屎肠球菌对断奶仔猪生产性能、免疫功能和腹泻率的影响。本试验选取健康状况良好的杜×长×大仔猪80头,按胎次、性别一致,体重相近的原则随机分为2组,每组4个重复,每个重复10头仔猪,试验期40天。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮的基础上添加0.05%的耐热型屎肠球菌产品。结果表明:(1)试验组日增重显著高于对照组(P0.05),但两组日采食量和料重比均无显著差异(P0.05);(2)试验组腹泻率、大肠杆菌数均显著低于对照组(P0.05),乳酸杆菌数显著高于对照组(P0.05);(3)试验组血清中免疫球蛋白高于对照组,但差异不显著(P0.05)。结论:在基础日粮中添加0.05%屎肠球菌,可提高断奶仔猪的生产性能。     

屎肠球菌WEI-10对断奶仔猪的安全性评价

本试验在饲粮中添加屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10,通过对断奶仔猪活跃状态、腹泻分数、生长性能、菌血症以及组织病理学的检测,评价菌株WEI-10对断奶仔猪的安全性。设计2批试验,每批选取26日龄的断奶仔猪253头,平均体重分别为(7.44±1.02)和(8.11±1.51)kg,每批试验分为2组:对照组饲喂基础饲粮(不添加抗生素和益生菌),试验组饲喂在添加基础饲粮中添加菌株WEI-10的试验饲粮(2批试验的试验组每克基础饲粮中添加量分别为1×108和1×107CFU)。每批试验38 d。结果表明:1)2批试验的试验组与对照组,在活跃分数、平均日增重和料重比上均无显著性差异(P0.05)。2)试验组在第5、10和38天腹泻分数均显著性低于对照组(P0.05);第38天,试验组的腹泻分数降为0,对照组腹泻分数在0.6左右。3)2批试验的试验组和对照组均未出现菌血症以及心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠和空肠的病理学改变。由此可见,菌株WEI-10对断奶仔猪不存在安全问题,并且可以减少腹泻。     

重组猪表皮生长因子对早期断奶仔猪生长性能的影响

本试验旨在研究重组猪表皮生长因子(porcine epidermal growth factor,p EGF)对早期断奶仔猪生长性能的影响。选用21日龄断奶三元杂交(杜×长×大)健康仔猪160头,按体重相近、性别比例相同原则随机分成4组,即高档教槽料+500μg/kg p EGF组(GE组)、高档教槽料对照组(GD组)、中档教槽料+500μg/kg p EGF组(ZE组)、中档教槽料对照组(ZD组),每组4个重复,每个重复10头仔猪。试验期为10 d。结果表明:1)GE组平均日增重显著高于GD组(P<0.05),比GD组提高了6.29%;ZE组平均日增重极显著高于ZD组(P<0.01),比ZD组提高了17.08%;2)GE组平均日采食量与GD组无显著差异(P>0.05),ZE组平均日采食量显著高于ZD组(P<0.05),比ZD组提高了4.91%;3)GE组料重比显著低于GD组(P<0.05),比GD组降低了4.31%;ZE组料重比显著低于ZD组(P<0.05),比ZD组降低了10.37%;4)GE组腹泻率比GD组降低了57.14%;ZE组腹泻率比ZD组降低了38.46%。由此可见,饲粮添加p EGF提高了饲料转化率,降低了料重比和腹泻率,从而显著改善断奶仔猪生长性能,降低增重成本。     

国内外猪源产肠毒素大肠杆菌疫苗研究进展

仔猪腹泻是全球规模化猪场最常见的疾病之一,给养猪业带来了巨大的损失。产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起仔猪腹泻的主要病原菌,黏附素和肠毒素是其重要的致病因子,ETEC通过黏附素定植于小肠上皮细胞,在增殖过程中不断产生肠毒素,引起大量水和电解质进入肠腔,导致仔猪腹泻。目前,疫苗免疫是预防ETEC最有效的方法,然而许多商品化大肠杆菌疫苗的临床免疫效果不佳,且地域局限性明显。因此,研制安全、高效、广谱的ETEC疫苗对养猪业具有重要意义。近年来,许多新型试验性ETEC疫苗被相继报道,如ETEC菌毛黏附素和肠毒素疫苗;一些新开发的疫苗,如亚单位疫苗、菌影疫苗、植物载体疫苗和囊泡疫苗等,具有不同的优势,在不同的动物试验中均表现出良好的免疫保护效果。文章简述了国内外学者在ETEC疫苗领域的研究进展,对猪源ETEC各类疫苗的优劣及应用研究情况进行了综述,以期为今后猪源ETEC疫苗的研究提供参考。     

抗菌肽和抗生素对断奶仔猪生长性能的影响

本试验旨在研究日粮中添加抗菌肽和抗生素对断奶仔猪生长性能的影响。选用144头平均体重为(7.32±0.45)kg的杜×长×大三元杂交断奶仔猪,采用4×2析因设计,研究了日粮中添加4个抗菌肽水平(0、1、3、5 g/kg)和2个抗生素(恩拉霉素+抗敌素)水平(0、20 mg/kg + 20 mg/kg)对断奶仔猪生长性能的影响。试验设8个处理组,每组3个重复,每个重复6头猪。试验期为28 d,分为前期(1~14 d)和后期(15~28 d)2个阶段。试验结果表明,抗菌肽和抗生素显著影响断奶仔猪的前期、后期和全期的平均日增重和腹泻率(P<0.05);其中联合添加3 g/kg抗菌肽和20 mg/kg恩拉霉素、20 mg/kg抗敌素,显著提高了断奶仔猪的平均日增重,降低了料重比和腹泻率(P<0.05)。由此可知,抗菌肽和抗生素可一定程度上改善断奶仔猪生长性能,且两者有互作效应。     

猪α-干扰素临床促仔猪生长及疾病预防试验

选择广东四会某猪场40只断奶仔猪为观察对象,开展重组猪α-干扰素在促进生长作用和预防病毒性疾病方面的临床试验。试验1、2组与对照组相比较料重比分别降低6.3%和17.23%,平均每日增重率分别改变了-3.69%和24.85%,成活率分别提高了6.6%和14.3%,腹泻率分别降低了11.5%和26.9%,疾病总防治率分别提高了40.1%和55.49%;试验观察期间,对照组诊断为蓝耳病的4例,死亡1例,试验组则没有发生蓝耳病例。表明猪α-干扰素对仔猪的生长有良好的促进作用,具有显著的紧急预防病毒性疾病效果。     

膨化羽毛粉的营养价值及对断奶仔猪生长性能的影响

选用日龄相近、平均体重约18kg左右的杜长大生长猪128头,按照遗传背景相同、性别比例一致的原则随机分为2组,每组4个重复,每个重复16头猪。对照组饲喂玉米-豆粕基础饲粮,试验组在基础饲粮的基础上用3%的膨化羽毛粉替代6%的豆粕,其余用玉米补充。预试期3d,正式试验期为30d。饲养试验结果表明,在断奶仔猪饲粮中添加3%膨化羽毛粉替代豆粕对日增重、日采食量及料重比均没有显著影响(P>0.05)。     

基于猪小肠上皮细胞炎症模型分析产肠毒素大肠杆菌诱导的转录组表达变化

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）诱导猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数（multiplicity of infection,MOI）为100的ETEC菌液感染IPEC-J2细胞,18 h后收集细胞上清,通过ELISA方法检测炎性因子白细胞介素1β（interleukin 1 β,IL-1β）的分泌水平。由Illumina PE150测序平台进行高通量转录组测序,通过edgeR v 3.12.1软件对测序结果进行差异表达分析,利用GOseq和KOBAS 2.0软件对得到的差异表达mRNA进行GO功能和KEGG通路富集分析,随机挑选5条差异表达mRNA,利用实时荧光定量PCR对其验证。【结果】试验成功建立了ETEC感染诱导的IPEC-J2细胞炎症模型。与对照组相比,炎症模型组共发现529条差异表达mRNA,其中236条表达上调,293条表达下调,包括HSP90AA1、CGNL1、CADPS2、EHBP1等免疫相关基因。GO功能分析表明,ETEC感染后差异表达mRNA显著富集于细胞组分和生物过程,包括细胞内成分（intracellular part）、细胞质（cytoplasm）、核成分（nuclear part）、胞内膜结合细胞器（intracellular membrance-bounded organelle）、膜结合细胞器（membrance-bounded orgabelle）及细胞进程（cellular process）等。KEGG通路分析表明,炎症模型中差异表达基因大多数被注释到疾病相关通路及Toll样受体信号通路、mTOR信号通路、细胞周期、黏附连接等免疫相关信号通路。利用实时荧光定量PCR验证随机挑选的5条差异表达mRNA,结果与测序报告中差异表达mRNA变化趋势一致,证明测序结果可信。【结论】HSP90AA1、CGNL1、CADPS2和EHBP1等基因可能在ETEC黏附IPEC-J2细胞并诱导炎症反应中发挥关键作用,并通过Toll样受体、mTOR等信号通路进行免疫调控。研究结果为进一步揭示ETEC感染诱导炎症反应的分子机制及相关调控网络提供参考依据。     

复合抗菌肽对断奶仔猪生长性能及血清细胞因子含量的影响

本试验旨在研究饲粮复合抗菌肽水平对断奶仔猪生长性能及血清细胞因子含量的影响。将90头26日龄的健康杜×长×大三元杂交断奶仔猪按体重相近、公母各占1/2的原则随机分成5组,每组3个重复,每个重复6头。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加400 mg/kg黄芪多糖,250、500和1 000 mg/kg的复合抗菌肽,试验期28 d。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加250、500和1 000 mg/kg复合抗菌肽和400 mg/kg黄芪多糖均能提高断奶仔猪的平均日增重,降低料重比,且1 000 mg/kg复合抗菌肽的效果均优于400 mg/kg黄芪多糖。2)与对照组相比,饲粮中添加250 mg/kg复合抗菌肽显著或极显著提高断奶仔猪血清白介素-2(IL-2)(46和53日龄)、白介素-4(IL-4)(39、46和53日龄)、白介素-6(IL-6)(39、46和53日龄)、干扰素-γ(IFN-γ)(32、39、46和53日龄)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(53日龄)的含量(P0.05或P0.01);在整个试验期间,除饲粮中添加500 mg/kg复合抗菌肽对32日龄断奶仔猪血清IL-2、IL-4含量和饲粮中添加1 000 mg/kg复合抗菌肽对32日龄断奶仔猪血清IL-4含量无显著影响(P0.05)外,饲粮中添加500和1 000 mg/kg复合抗菌肽均显著或极显著提高断奶仔猪血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ和TNF-α含量(P0.05或P0.01),且效果均优于400 mg/kg黄芪多糖。由此可见,饲粮中添加复合抗菌肽能够提高断奶仔猪的生长性能及免疫功能,以添加量为1 000 mg/kg时效果较好。     

表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响

试验旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响。选取24头7日龄仔猪,随机分为4个处理组,分别为对照组、STa组、LMG194组和K88组。整个试验期间均以人工乳饲喂,预饲期4d,试验第5天进行攻毒,STa组、LMG194组及K88组分别在早晚两次口服灌喂2×109 CFU大肠杆菌LMG194-pBAD-STa、LMG194和K88,对照组灌服等量生理盐水,试验第7天早上各组灌服D-木糖并采血,屠宰并取空肠、回肠组织样品,测量仔猪血常规指标、血浆D-木糖含量及二胺氧化酶(DAO)活力,以及吸收与转运相关基因与蛋白表达量。结果显示,与对照组相比,STa组仔猪血液中中性粒细胞、中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05),LMG194组与K88组仔猪血液中中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05);STa组与K88组仔猪血浆D-木糖含量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组血浆DAO活力显著升高(P<0.05);STa组与LMG194组空肠AQP8、AQP10、KCNJ13和b0,+AT基因表达量均显著降低(P<0.05),K88组空肠AQP8、AQP10基因表达量显著升高(P<0.05);STa组回肠AQP8基因表达量显著降低(P<0.05),AQP10、SGLT-1基因表达量显著升高(P<0.05),LMG194组、K88组AQP8基因表达量显著升高(P<0.05),K88组AQP10、KCNJ13、b0,+AT、SGLT-1基因表达量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组空肠HSP70蛋白的表达量显著升高(P<0.05)。以上结果表明,表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪小肠产生炎症,吸收与转运能力下降。