广西桑树细菌性枯萎病菌生物学特性及防治药剂筛选

选取分离自广西桑园、引起枯萎症状的5种桑树细菌性病原菌,即阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、阴沟肠杆菌阴沟亚种(E.cloacae subsp.cloacae)、阿式肠杆菌(E.asburiae)、桑肠杆菌(E.mori)以及克雷伯氏菌属菌株(Klebsiella sp.),测定其生物学特性及化学药剂的抑菌效果。克雷伯氏菌和桑肠杆菌的最适培养温度分别为33℃和25℃,阿式肠杆菌、阴沟肠杆菌和阴沟肠杆菌阴沟亚种的最适培养温度均为28℃;5种病原菌均能在较广的p H范围内生长,其中阿式肠杆菌和阴沟肠杆菌在中性至偏碱性的培养基中生长最好,其余3种病原菌则在弱酸至弱碱范围能能较好生长;5种病原菌胞外多糖的产量均高于2.8 mg/m L,而以克雷伯氏菌和阿式肠杆菌的含量最高,分别为4.622 mg·m L-1和4.480 mg·m L-1;克雷伯氏菌、阿式肠杆菌和桑肠杆菌的致死温度为55℃,其余2种病原菌的致死温度为54℃;病原菌间的生长曲线存在一定的差异。平板抑菌效果测定显示:中生菌素、氢氧化铜、敌克松、春雷·王铜、农用链霉素和溴菌腈对所有病原菌种类均有一定抑菌效果,氯溴异氰尿酸对克雷伯氏菌没有明显的抑菌效果,但对其余4种病原菌有抑菌效果。中生菌素抑菌效果最好,最低有效抑制浓度为11.3~15.0μg·ml-1,农用链霉素次之,最低有效抑制浓度为7.5~113.0μg·ml-1。本研究结果为进一步研究桑树细菌性枯萎病菌发生发展规律以及田间药剂防治奠定了重要基础。     

大白菜枯萎病病原镰刀菌种类的初步研究

 2014~2016年,由于栽培管理及重茬等原因,大白菜枯萎病在我国大面积发生,造成了巨大的经济损失。为了明确引起大白菜枯萎病的病原菌,本课题组从山东、内蒙古、河北、甘肃等大白菜主产区采集了具有典型枯萎病症状的病样,并对样品中的病原菌进行了分离和鉴定。形态学鉴定结果表明:分离物分别具有尖孢镰刀菌 (Fusarium oxysporum)、茄病镰刀菌 (F. solani) 和木贼镰刀菌 (F. equiseti)的形态学特征。柯赫氏法则验证结果表明:3种病原菌均能使大白菜发病,且发病症状与田间症状一致。此外,基于病原菌的rDNA-ITS和mt SSU序列的测序比对,3种病原菌与尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和木贼镰刀菌的同源性分别达99%~100%,这与形态学鉴定结果相一致。尖孢镰刀菌引起白菜枯萎病为国内首次报道,而茄病镰刀菌和木贼镰刀菌引起白菜枯萎病为国内外首次报道。     

糜子细菌性条斑病病原菌鉴定及其对13种杀菌剂的敏感性

为有效防治糜子细菌性条斑病,采用平板划线分离法对2016年自黑龙江省齐齐哈尔市采集的罹细菌性条斑病的糜子植株进行病原菌分离与纯化,依据柯赫氏法则对其致病性进行测定;采用Biolog自动微生物鉴定系统、16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区序列分析及病原菌的生理生化反应对病原菌进行鉴定;并测定该病原菌对13种常用杀菌剂的敏感性。结果显示,从糜子叶片和叶鞘病斑中共分离纯化获得10株培养性状一致的菌株,经柯赫氏法则验证均为细菌性条斑病病原菌。经Biolog鉴定,3株代表菌株与标准菌株燕麦噬酸菌Acidovorax avenae的相似值分别为0.716、0.705、0.723,序列分析显示,这3株代表菌株与燕麦噬酸菌燕麦亚种A. avenae subsp. avenae的一致性为99%以上;该病原菌的革兰氏染色反应及碳源利用等生理生化反应与对照菌株燕麦噬酸菌ICMP3183表现一致。因此,确定糜子细菌性条斑病病原菌为燕麦噬酸菌。糜子细菌性条斑病病原菌代表菌株MZ121101对80%乙蒜素乳油、30%乙蒜素乳油及0.3%四霉素水剂的敏感性较高,抑制中浓度EC50介于389.31～939.94μg/mL之间,这2种药剂可作为防治糜子细菌性条斑病的首选药剂。     

甘蓝枯萎病病原菌的鉴定

 采用温室接种致病性测定、形态学观察和分子鉴定方法对甘蓝枯萎病病原进行了研究。从北京市延庆县9个甘蓝生产基地采集甘蓝枯萎病病样96份,分离获得来自甘蓝病株根、短缩茎、叶片等器官的30个真菌分离物。经过致病性试验证实,分离物GLW3和GLW8为甘蓝枯萎病病原菌。经形态学鉴定,GLW3为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),GLW8为轮枝样镰刀菌(Fusarium verticillioides)。利用镰刀菌的核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)的保守性和变异性,分别采用真菌通用引物和镰刀菌属及轮枝样镰刀菌特异性引物对GLW3和GLW8进行PCR扩增,并将测序结果在GenBank中进行同源性比对分析,分子鉴定与形态学鉴定结果一致。轮枝样镰刀菌作为甘蓝枯萎病的病原菌系首次报道。     

葫芦砧木萎蔫病病原镰刀菌鉴定及其防治药剂的筛选

本研究对葫芦砧木萎蔫病病原菌进行了分离鉴定及室内杀菌剂筛选, 为葫芦萎蔫病的防控提供参考依据。从嫁接西瓜主产区和葫芦砧木育种大棚采集具有典型萎蔫症状的病样, 进行病原菌的分离和鉴定, 共得到6株分离物。形态学观察发现分离物具有茄病镰刀菌Fusarium solani的特征。基于病原菌的rDNA-ITS和TEF-1α序列分析, 6株分离物的序列与茄病镰刀菌的序列相似性为100%, 与形态学鉴定结果一致。采用柯赫氏法则对分离菌株进行致病力验证, 结果表明, 6株分离物都能使葫芦砧木发病, 且症状与田间发病症状一致, 其中LS-2致病力最强。选用11种杀菌剂对葫芦茄病镰刀菌进行室内毒力测定, 结果表明, 供试药剂中, 20%硅唑·咪鲜胺EW、70%甲基硫菌灵WP和25%多菌灵WP能很好地抑制茄病镰刀菌菌丝的生长, 抑菌率达到80%以上。20%硅唑·咪鲜胺EW的毒力最强, EC50为0.08 μg/mL。     

玉竹根腐病病原鉴定

从湖北省农科院蔬菜研究所蔬菜试验基地采集玉竹病样标本,采用常规组织分离法分离玉竹茎基部病原菌菌株。经过柯赫氏法则致病性测定和18S rDNA分子鉴定。结果表明,湖北玉竹根腐病的根腐症状和病原菌与前人文献描述不同,为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)2种致病菌复合侵染。     

非洲菊枯萎病病原菌鉴定及药剂防治

经对采集的病害标本分离培养、鉴定和致病性测定结果表明 ,危害非洲菊枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.)。药剂防治试验结果显示 ,甲基硫菌灵、百菌清1000倍液和多菌灵800倍液对非洲菊枯萎病防治效果显著     

不同药剂对海南省甜瓜细菌性果斑病病原菌的室内药效测定

采用含毒介质法对引起甜瓜细菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch of melon)的病原菌西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)进行了室内药效测定,评价测定的8种药剂对海南省5个甜瓜主栽区(昌江县、东方市、乐东县、陵水县和三亚市)细菌性果斑病病原菌的抑菌效果,试验结果表明,8种药剂对细菌性果斑病病原菌的抑菌效果各不相同,且相同药剂对不同地区的病原菌抑菌效果也不同,其中,噻霉酮对细菌性果斑病病原菌的抑菌效果最好,抗生素类药剂的抑菌效果普遍较好,如农用链霉素、中生菌素和春雷霉素,而氢氧化铜和琥胶肥酸铜等铜制剂室内效果最差。该试验筛选的对西瓜嗜酸菌(A.citrulli)抑菌效果较好的药剂,可为细菌性果斑病的防治提供参考。     

桑树断枝病病原菌研究

桑树断枝病是浙江省近年在桑树上发生的一种新型病害,来势猛,发病重,损失大,主要发生在兰溪市梅江区一带。病害主要发生在春伐桑枝条的基部,外部病斑多数长2～3cm,内部病斑一般比外部病斑长1～2cm,病部由内向外侵染,逐渐在外部呈黑色斑,斑块渐渐扩展为周斑,并紧缩成颈状,病部纤维组织坏死,韧力较差,脆性大,遇风吹或振动枝条基部病斑处折断倒挂。以桑小粒型菌核病子囊孢子,病椹及病枝组织为材料,进行病原菌的分离与纯化,及田间接种,有6个优势菌种使桑树感染,出现桑树断枝病症状,平均感染率80%左右。经鉴定,桑树断枝病病菌为杯盘菌属Ciboria,…     

桑树断枝病病原菌研究

桑树断枝病是浙江省近年在桑树上发生的一种新型病害,来势猛,发病重,损失大,主要发生在兰溪市梅江区一带。病害主要发生在春伐桑枝条的基部,外部病斑多数长2～3cm,内部病斑一般比外部病斑长1～2cm,病部由内向外侵染,逐渐在外部呈黑色斑,斑块渐渐扩展为周斑,并紧缩成颈状,病部纤维组织坏死,韧力较差,脆性大,遇风吹或振动枝条基部病斑处折断倒挂。以桑小粒型菌核病子囊孢子,病椹及病枝组织为材料,进行病原菌的分离与纯化,及田间接种,有6个优势菌种使桑树感染,出现桑树断枝病症状,平均感染率80%左右。经鉴定,桑树断枝病病菌为杯盘菌属Ciboria,…     

中国番木瓜枯萎病病原菌的首次鉴定

从发病的番木瓜茎基部组织分离培养得到纯分离物,采用形态学和分子生物学方法进行分离物鉴定。经过致病性测定证实,分离物确定为番木瓜枯萎病的病原菌;通过形态学观察表明,与茄腐镰刀菌(Fusarium solani)形态一致。根据真菌的核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)的保守性和变异性,采用通用引物ITS1和ITS4进行PCR扩增,然后将PCR产物纯化后直接测序,对测试菌株与10株来自GenBank中的菌株ITS序列进行聚类分析,结果表明,测试菌株与GenBank上注册的茄腐镰刀菌GU134886、GQ451337、EU625405、EF534183和GQ376115聚在同一分枝上,分子鉴定结果与形态学观察结果一致,此为国内首次报道。     

烟草青枯病拮抗菌株X-60的分离鉴定及其表型组学分析

 为了探寻烟草青枯病的生防菌剂,本研究以烟草青枯病菌为指示菌,从烟草根围土壤中分离获得拮抗细菌X-60,其抑菌圈大小约为37 mm。经形态观察、Biolog鉴定及16S rDNA序列分析,该细菌为解淀粉芽孢杆菌。抗菌谱测定表明,它对烟草灰霉病菌、烟草炭疽病菌、烟草黑胫病菌和烟草赤星病菌均具有较强的拮抗作用,菌丝生长抑制率分别为51.28%、58.97%、60.53%和72.78%。温室盆栽试验表明,X-60菌液灌根对烟草青枯病发生具有良好的预防作用。表型芯片研究结果表明,解淀粉芽孢杆菌能代谢41%的碳源、77%的氮源、86%的磷源、69%的硫源,具有91种生物合成途径;72种碳源、45种氨基酸类氮源和190余种肽类氮源均能显著促进该菌的生长;其高效代谢的磷源有二硫代磷酸盐和半胱胺S-磷酸盐,高效代谢的硫源有硫代硫酸盐、S-甲基-L-半胱氨酸和硫辛酰胺。研究结果为解淀粉芽孢杆菌X-60生防菌剂的开发及将其应用于烟草青枯病的生物防治提供了理论基础。     

橘-芝麻套种模式下芝麻青枯病初侵染源分析

 净作11年的橘园首次套种芝麻,发现园内芝麻青枯病发生严重。为探明芝麻青枯病初侵染源,本研究从芝麻青枯病株上分离到菌株JXRs02,通过形态学、分子生物学以及聚类分析,鉴定其为青枯雷尔氏菌演化型I。利用针刺接种法,将JXRs02菌株接种至柑橘园中的4种杂草凹头苋、青葙、空心莲子草以及加拿大蓬,发现JXRs02能够侵染凹头苋杂草,造成枯萎症状;LAMP检测的结果显示,在凹头苋病株组织内能够检测到青枯雷尔氏菌。依据柯赫氏法则,利用分子生物学方法证明了对凹头苋杂草具有致病性的菌株和造成芝麻青枯症状的病原菌同为青枯雷尔氏菌演化型I。同时发现,在凹头苋、青葙、空心莲子草和加拿大蓬4种杂草的根际土壤中芝麻青枯病菌均能够定殖繁衍。推测凹头苋杂草可能为芝麻青枯病菌的中间寄主,凹头苋、青葙、空心莲子草和加拿大蓬等杂草根际土壤积累的菌源可能为橘园套种芝麻后青枯病的初侵染来源。本研究对制定作物青枯病的防治策略具有一定科学意义。     

Development of a specific molecular tool for the detection of epidemiologically active mulberry causing-disease strains of Ralstonia solanacearum phylotype I (historically race 5-biovar 5) in China

Ralstonia solanacearum causes bacterial wilt disease in many plant species, including mulberry. Here, we used a suppression subtractive hybridization (SSH) approach to identify specific DNA fragments in R. solanacearum race 5-biovar 5. The genome of the R. solanacearum M7 strain was subtracted from that of the GMI1000 strain, resulting in the identification of 85 subtracted fragments. The primer set MG67-F/R for identification of Ralstonia solanacearum race 5-biovar 5 strains was designed on the basis of the clone MG67 sequence. Furthermore, a multiplex PCR was developed by using the primer set MG67-F/MG67R in combination with the species-specific primer pair 759/760. A 156 bp r5-bv5-specific fragment, together with a 282 bp species-specific fragment, was amplified from all tested R. solanacearum r5-bv5 strains. The sensitivity of the multiplex PCR made it possible to detect concentrations as low as 10² CFU ml^?1 of pure culture. Moreover, the r5-bv5-specific multiplex PCR was successfully applied to detect Ralstonia solanacearum race 5-biovar 5 strains in diseased mulberry samples. Therefore, the multiplex PCR assay can be used as a reliable diagnostic technique to enable researchers to rapidly identify isolates of R. solanacearum race 5-biovar 5.     

罗汉果青枯病病原菌株的鉴定

 The pathogen of Siraitia grosvenorii wilt was identified.Six strains were isolated from diseased plants of S.grosvenorii collected from Yongfu County in Guangxi.By using bacteriological identification,pathogenicity tests assay,16S rDNA sequence analysis,the S.grosvenorii wilt was caused by Ralstonia solanacearum.The results of pathogenicity and carbohydrate utilized test demonstrated that the pathogen belonged to race 1 and biovarⅢ of R.solanacearum.     

桑树青枯病与根际土壤肥力及微生物群落结构特征的研究

本文比较分析了桑树青枯病发病和健康植株根际土壤肥力以及微生物（细菌和真菌）群落结构特征差异，旨在挖掘和利用丰富微生物资源的有益功能，为构建桑树青枯病生物防治技术体系奠定基础。结果表明，桑树青枯病发病植株根际土壤中指示土壤肥力与健康状况的生物学性状指标β-葡糖苷酶和磷酸酶的活性显著降低，微生物生物量碳、磷显著下降；细菌门分类水平上，发病植株根际土壤中酸杆菌门、放线菌门和疣微菌门等优势细菌相对丰度降低，变形菌门、绿弯菌门、粘球菌门、厚壁菌门、拟杆菌门等优势细菌相对丰度增加；细菌属分类水平上，发病植株根际土壤富集了硝化螺菌属和放线菌属等特有细菌属，缺失了诸如链霉菌属等具有分泌抗生素功能的优势细菌属。真菌门分类水平上，发病植株根际土壤中子囊菌门和担子菌门真菌相对丰度增加，unclassified_k_Fungi和霉菌门真菌相对丰度降低；真菌属分类水平上，发病植株根际土壤富集了地霉菌属、腐质霉属和丝孢菌属等腐生真菌，缺失了被孢霉属、枝顶孢属和曲霉属等具有产抑菌化合物功能的优势真菌。研究表明，桑树青枯病与根际土壤β-葡糖苷酶、磷酸酶活性，微生物生物量碳、磷以及微生物群落结构都具有一定的相关性。链霉菌属细菌以及被孢霉属、枝顶孢属和曲霉属真菌有望作为生物防控青枯病的有效备选菌属。     

产抗菌素2,4-二乙酰基藤黄酚假单胞杆菌的分离及其防治沙打旺根腐病的室内测定

从山东、内蒙古、北京等地土壤中分离筛选出荧光菌 50 0 0余株 ,其中 1 2 0 0余株为抑制性荧光菌。经PCR检测 ,获得 73株 2 ,4 二乙酰基藤黄酚 (2 ,4 DAPG)产生菌。平板筛选结果表明 ,2 ,4 DAPG产生菌CPF 1 0和 2P8对沙打旺根腐病菌Sad1和Sad2均有较好的抑制效果 ,其中CPF 1 0的抑菌带宽分别为 5.0和 1 2 .0mm ;2P8抑菌带宽分别为 3 .5和 7.0mm。温室试验两次调查表明 ,CPF 1 0对沙打旺根腐病防治效果最好 ,达 63 .5%和 67.8% ;2P8防效也在 40 %左右 ,且均达到极显著水平。 2 ,4 DAPG产生菌可以显著促进沙打旺植株根系发育 ,CPF 1 0处理后地上部株高差异不显著 ,但鲜重和干重与对照相比有极显著的增加 ,说明两菌株菌剂处理可以促进植株生长。根部定殖结果表明 ,两菌株在沙打旺根部都有一定的定殖能力 ,在根表种群数量比较稳定 ,根内细菌数量在调查时间内呈逐渐上升的趋势     

枯草芽孢杆菌SB1的抑菌活性及其对番茄青枯病的防治作用

 Bacillus subtilis strain SB1 isolated from tomato roots was evaluated for its ability to control tomato bacterial wilt under greenhouse conditions.Application of strain SB1 culture suspension suppressed tomato wilt disease both in sterilized and non-sterilized soil,providing 76.03% and 77.78% protection,respectively.Wilt symptom was significantly reduced when strain SB1 was applied before pathogen inoculation,while less suppression was conferred by strain SB1 application after pathogen inoculati...     

Myrothecium leaf spot of mulberry caused by Myrothecium verrucaria

A fungus that formed white colonies with greenish black spore masses was isolated from diseased mulberry leaves in Gunma Prefecture, Japan, in 1995, 1999, and 2000. It was pathogenic to mulberry. The fungus was identified with Myrothecium verrucaria. It has been added to the list of pathogens that cause Myrothecium leaf spot of mulberry and is identified for the first time as a plant pathogen in Japan.