一株放线菌次生代谢产物抗菌活性的初步研究

从秦岭山区土样中筛选得到一株放线菌,编号为NO.24,对其产生的次生代谢产物的抑菌活性进行了测定。生测结果表明,离体条件下发酵液浓度2 000 mg／L时对烟草赤星病菌、马铃薯干腐病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、番茄晚疫病菌、小麦赤霉病菌、小麦根腐病菌菌丝生长或孢子萌发均有较强的抑制作用。对玉米大斑病菌和番茄灰霉病菌菌丝生长抑制中浓度为240.1 mg／L和350.5 nag／L;对玉米大斑病菌和马铃薯干腐病菌孢子萌发的抑制中浓度分别为155.0 mg／L和124.1 mg／L。盆栽试验在浓度为6 000 mg／L时对小麦白粉病的保护和治疗作用分别为76.13％和70.78%,对黄瓜霜霉病的保护和治疗作用分别为63.93％和59.66％。对NO.24菌株代谢产物进行了粗分离,其抑菌活性成分主要为水溶性物质。     

烟草赤星病菌拮抗菌解淀粉芽胞杆菌YW-2-6鉴定及生防效果

为获得有效拮抗烟草赤星病菌的生防资源,采用稀释分离法和平板对峙法从烟草根际土壤中分离筛选烟草赤星病菌拮抗菌株。通过形态学观察、生理生化特征和16S rDNA序列分析进行鉴定,并测定其对烟株的促生作用,验证菌株的产IAA能力,评价生防菌发酵液对烟草赤星病的田间防效。结果表明,从分离的65株细菌菌株中筛选到5株烟草赤星病拮抗细菌,其中菌株YW-2-6对烟草赤星病菌拮抗效果最好,抑制率为71.32%,初步鉴定菌株YW-2-6为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。菌株YW-2-6对小麦赤霉病菌、辣椒疫霉病菌、烟草靶斑病菌等病原菌具有显著的拮抗作用。YW-2-6发酵液对烟草赤星病防效为56.93%,且菌株YW-2-6对烟株有明显的促生作用。菌株YW-2-6具有良好的生防潜力和开发前景。     

烟草赤星病菌对苯醚甲环唑和氟环唑敏感性测定及田间防效试验

为明确山东省主要烟草产区烟草赤星病菌Alternaria alternata对苯醚甲环唑和氟环唑的敏感性,采用菌丝生长速率法检测苯醚甲环唑和氟环唑对86株烟草赤星病菌菌株的EC_(50),用Spearman’s秩相关系数法分析供试菌株对2种杀菌剂敏感性的相关性,并评价其对烟草赤星病的田间防效。结果表明,苯醚甲环唑对烟草赤星病菌菌丝生长EC_(50)值介于5.3883～8.0316 mg/L之间,平均值为6.9594 mg/L,敏感性频率分布呈连续性偏正态分布,田间烟草赤星病菌对苯醚甲环唑仍然较为敏感,可建立田间烟草赤星病菌对苯醚甲环唑的敏感基线。氟环唑对烟草赤星病菌菌丝生长的EC_(50)值介于0.1253～0.2517 mg/L,平均值为0.1773 mg/L,敏感性频率分布呈连续性偏正态分布,可建立田间烟草赤星病菌对氟环唑的敏感基线。相关性分析结果表明,烟草赤星病菌对苯醚甲环唑和氟环唑敏感性之间不存在明显的相关性。田间试验结果表明,30%苯醚甲环唑悬浮剂对烟草赤星病具有较好的防效,其有效成分150 g/hm~2处理的防效最高,为73.99%;12.5%氟环唑悬浮剂对烟草赤星病的最高防效为70.57%。表明2种三唑类杀菌剂对烟草赤星病防效较好。     

苦皮藤内生真菌A10代谢产物的杀菌活性

从苦皮藤根皮中分离得到一株内生真菌,编号为A10.对其代谢产物进行了杀菌活性研究.生物测定结果表明,A10菌株发酵产物菌丝体的甲醇和乙酸乙酯提取物对多种病原真菌具有较强的杀菌活性.其中乙酸乙酯提取物的杀菌活性较甲醇好,在1000μg/ml浓度下对烟草赤星病菌、小麦根腐病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、苹果轮纹病菌的菌丝生长抑制率均大于90%.盆栽试验结果表明,A10菌株发酵产物菌丝体的乙酸乙酯提取物在2000μg/ml浓度下对小麦白粉病的治疗和保护作用均在70%以上.以生物活性追踪为指导,对活性较好的菌丝体乙酸乙酯提取物部分进行了杀菌活性成分的分离,得到化合物QY01,在浓度为50μg/ml时,QYO1对烟草赤星病菌孢子萌发的抑制率高达98.4%.     

土壤稀有放线菌的选择性分离及其抗菌活性研究

在优化土壤稀有放线菌选择性分离方法的基础上,对从安徽、浙江、山东、陕西等地采集的31份土样中的稀有放线菌进行了选择性分离。结果表明:以改进的HV培养基为分离培养基,将土壤样品稀释100倍,添加2×10-5 g/mL重铬酸钾＋2×10-5 g/mL萘啶酮酸＋1×10-5 g/mL卡那霉素作为抑制剂分离效果最好。以常见植物病原真菌和细菌为指示菌,从分离的417株放线菌中筛选出H32、H75、H223、H227、H238等5株可代谢抗菌活性物质的菌株。离体条件下,5株放线菌菌株发酵液对小麦根腐病菌Bipolaris sorokiniana、玉米大斑病菌Exserohilum turcicum、烟草赤星病菌Alternaria alternate的菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用,其中H223和H238菌株发酵液对病原真菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)值均小于10 mL/L;H32菌株发酵液对小麦根腐病菌、玉米大斑病菌、烟草赤星病菌孢子萌发的EC50值分别为25.5、28.9和29.9 mL/L。5株放线菌发酵液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制作用显著,其中H223菌株发酵液抑制作用最强,抑菌圈达30 mm以上。盆栽实验结果表明,5株放线菌发酵液对小麦白粉病的保护效果为73.45％~82.35％,治疗效果为67.74％~70.80％。     

烟草赤星病颉颃放线菌的分离与鉴定

从健康小麦植株中分离得到21株分离物,经对7种植物病原菌颉颃试验分析,获得1株对烟草赤星病菌等具有良好颉颃活性的菌株2-7。采用平板对峙法、生长速率法、盆栽试验等方法测定其抑菌及生防作用。结果显示,放线菌2-7发酵液对烟草赤星病菌抑制率为62.1%,盆栽防治率为48.73%。通过该菌的培养特征、生理生化指标、细胞壁以及16S rDNA基因序列分析(GenBank登录号:JN638883),将菌株2-7归属于放线菌中的玫瑰暗黄链霉菌(Streptomyces roseofulvus)。     

枯草芽孢杆菌Tpb55挥发物对烟草的防病促生效应

枯草芽孢杆菌Tpb55菌株挥发性代谢产物对烟草赤星病菌菌丝生长、孢子产生具有抑制作用,并延缓黑色素的产生.在相对封闭的试验条件下,Tpb55菌株挥发性物,对烟草赤星病的防治效果达100%.促生效应测定结果表明,Tpb55挥发物对烟草生长无明显毒害作用,且株高、叶长、叶宽和鲜重较显著增加.     

烟草黑胫病拮抗根际芽胞杆菌FB-16的筛选鉴定及其抑菌活性

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从健康烟草根际采集30份土壤样品,分离纯化得到347株细菌,经病原真菌定向筛选后得到1株对烟草黑胫病菌等病原真菌拮抗活性较好的细菌FB-16,其对烟草黑胫病菌的抑菌带宽为23mm。采用菌丝生长速率法、作用机制试验、温室防病试验测定FB-16的抑菌作用,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定。结果显示,菌株FB-16发酵液对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制率为95.96%;其代谢产物对烟草黑胫病菌菌丝有致畸作用;菌株FB-16为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliauefaciens(Gen-Bank登录号为JN245982);饱和度25%硫酸铵获得的抑菌物质对烟草黑胫病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达42.00 mm;FB-16活性产物处理的烟草植株在接种烟草黑胫病菌7天后的防治效果为69.96%。表明菌株FB-16在烟草黑胫病生物防治中具有潜在的利用价值。     

一株沙福芽胞杆菌ZG6的筛选、鉴定及其对茶树轮斑病的生防潜力研究

轮斑病是茶树生产上的重要病害，造成茶叶产量和品质重大损失。为获得有效防治茶树轮斑病的生防菌株，从合肥茶园茶树根部组织中分离筛选到一株对茶树轮斑病菌具有较强拮抗活性的内生细菌ZG6。对峙培养条件下，该菌株对茶树轮斑病菌的菌丝抑制率可达65.38%。基于菌落形态、生理生化特征、16S rRNA和gyrB基因的序列分析，将菌株ZG6鉴定为沙福芽胞杆菌Bacillus safensis。菌株ZG6具有广谱抑菌能力，对油菜菌核病菌、玉米小斑病菌和苹果腐烂病菌表现出较强的抑制效果，抑制率分别为78.82%、64.71%和61.82%。酶学试验结果表明，菌株ZG6在代谢过程中可产生纤维素酶和蛋白酶。茶树离体枝条叶片防效试验结果表明，菌株ZG6的发酵液、无菌发酵滤液与菌液均对茶树轮斑病有预防和控制效果，在茶树离体枝条的叶片上的防效可达69.9%以上。由此可见，沙福芽胞杆菌ZG6具有作为防治茶树轮斑病生防菌剂研发的潜力。     

荧光假单胞菌拮抗菌株对烟草疫霉的抑菌机制及控病效果

为探讨烟草根际生防细菌对烟草疫霉Phytophthora nicotianae的抑菌机制,从重庆地区连作烟田健康烟株根际土壤分离获得5株荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens拮抗菌株。通过平板对峙及代谢产物抑菌试验筛选对烟草疫霉具有高效拮抗作用的菌株,其中,P-72-10菌株抑菌效果最强,抑菌带半径达13.0 mm,相对抑制率为68.57%,且该菌株代谢产物对烟草疫霉菌丝生长有明显的抑制作用,相对抑制率达25.39%～46.03%;显微观察发现该菌株可引起烟草疫霉菌丝的分支增多,菌丝顶端膨大呈畸形,多数菌丝中间或顶端细胞的细胞壁加厚、原生质浓缩和产生类似厚壁孢子的细胞。在温室盆栽条件下P-72-10菌株对烟草黑胫病也表现出良好的控病效果,对抗病和感病品种的相对防效分别为53.57%和66.37%。     

烟草不同发育阶段对赤星病的抗性表现与综合防治技术

人工接种结果表明，随着烟叶自下而上逐渐成熟、衰老，抗病性下降。不同抗性类型的品种，其绿色叶片对病害均表现免疫或近免疫，近成熟叶片高抗，成熟衰老叶片表现为感病，与品种田间抗病性结果一致。田间结果表明，采用增施钾肥、适时打顶和下部叶片近成熟期摘除1～3片底脚叶等措施，提高烟草品种抗病性、配合有效的农药品种综合防治烟草赤星病，在重病区布局抗病品种能有效地推迟病害的发生时期，减慢病情的发展速度，且能减少农药施用量和施用次数，减少环境污染。     

烟草赤星病拮抗细菌的筛选及其控病作用

从烟草叶片上分离到236株非病原细菌,通过平板对峙培养,筛选出对不同致病力的烟草赤星病菌Alternaria alternata(Fr.)Keissl均有拮抗作用的菌株:Ata28、Ata81、Ata124和Ata160.室内测定其对赤星病菌抑菌带的宽度达6.1～10.5mm;室内离体叶片悬滴法测定,提前喷施拮抗菌其防治效果为53.9%～73.0%;接赤星病菌后喷施的防治效果为44.0%～60.0%;在温室中进行盆栽防病试验,防治效果为52.3%～75.8%.无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata28无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强.     

烟草抗赤星病诱导剂SRS2的田间应用

作者在温室、田间上区和大田进行应用示范试验,明确了诱导剂ＳＢＳ２对烟草赤星病的控制作用。室内测定结果表明,ＳＲＳ２与菌核净防治效果相当,均接近１００％。１９９４年在山东沂南作了小区试验,１９９４、１９９５年在山东和安徽８县（市）进行了应用示范试验,结果表明,诱导剂ＳＲＳ２能够较好地控制烟草赤星病,最高可达８５％,平均防治效果为６２．７％,与菌核净相比,ＳＲＳ２的防治效果平均高出２．７％。     

2011年昆明市烟草主要病害发生特点

通过对昆明市烟草病虫害预测预报网络中烟草病毒病、黑胫病、赤星病、炭疽病、白粉病、野火病的发生观测研究,浅析了2011年昆明市6种烟草病害的发生趋势和发生特点。结果表明：2011年昆明市烟草赤星病、炭疽病、白粉病、野火病的发生较为轻微。     

平菇蛋白粗提液诱导烟草对TMV的抗性与细胞中防御酶活性的关系

用200 μg/mL的平菇蛋白粗提液处理枯斑三生烟后接种烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）,在不同时间测定了烟草植株叶片中苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonialyas, PAL）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、过氧化氢酶（catalase, CAT）和过氧化物酶（peroxidase, POD）的活性。结果表明,平菇蛋白粗提液处理枯斑三生烟后,TMV的侵染率下降了70.16%;接种TMV后,平菇蛋白粗提液处理的烟草叶片中的PAL、SOD、CAT和POD活性要明显高于清水对照植株,接种后12 h PAL活性最高,平菇蛋白粗提液处理为清水对照的1.57倍;接种后24 h SOD和POD活性最高,平菇蛋白粗提液处理分别为清水对照的1.55倍和1.51倍;接种后36 h CAT活性最高,平菇蛋白粗提液处理为清水对照的1.6倍。以上研究结果表明,平菇蛋白粗提液诱导烟草抗TMV的活性与烟草叶片内防御酶活性的提高有关。     

烟草赤星病菌菌种保存及致病性研究

在烟草赤星病抗性鉴定和生防菌剂筛选工作中,常因菌种在室内连续多代移植培养导致菌株的致病力衰弱,而影响测定结果的准确性和一致性。对此,本研究尝试将赤星病菌种经Richards培养液制备成菌层,置于4℃低温环境条件下长期保存,连续5年测定其培养性状和致病力,与连续转代培养方法保存的菌种进行比较,结果表明在连续5年的试验过程中,Richards法保存的菌种在培养性状和致病性上没有发生衰退,该菌种保存方法制作简单、经济、可靠,适用于烟草品种抗赤星病鉴定和生防菌剂的筛选工作。     

AT毒素胁迫的再生烟草及后代对赤星病的抗性

从4个烤烟品种幼苗心叶叶碟产生的愈伤组织(CA)在含AT毒素的培养基上经两轮筛选,获得的抗毒素CA用于产生了抗病的一次再生植株。用来自抗病性提高50％以上的一次再生株的二代CA产生了抗病的二次再生植株,品种NC89的二次再生抗病植株被称为NC89—TT。获得种子后,NC89—TT二代苗显示出抗毒素损伤、抗病菌侵入、抗病斑扩展的能力,与NC89比,毒素引起的根和叶部病变至少晚8小时、轻64％,病菌孢子侵染率低60％以上,病斑面积减小92％。     

苦参内生枯草芽孢杆菌B_（36）抗菌物质对番茄叶霉病菌的作用机制

采用大孔树脂吸附法提取苦参内生细菌B36的抗菌物质,研究其对番茄叶霉病菌的作用机制。结果表明,菌株B36抗菌物质粗提物对番茄叶霉病菌抑菌圈直径达20.5mm;引起菌丝畸形,产生囊泡;抑制分生孢子萌发。当抗菌物质浓度为10.6×10^2μg/ml时,对孢子萌发的抑制率达86.56%;果胶酶和羧甲基纤维素酶的酶活分别为0.5911和0.01757U/ml,显著低于对照。说明B36抗菌物质抑制两种菌丝胞外细胞壁水解酶的合成,通过破坏细胞膜结构产生抑菌作用,而抗菌物质对病菌菌丝细胞壁组成物质几丁质和菌丝蛋白质的浓度没有影响。