α-亚麻酸通过提高GSH水平、降低ROS水平促进绵羊卵母细胞抗氧化与氧化平衡能力

为研究体外成熟(IVM)培养基中α-亚麻酸(ALA)对绵羊卵母细胞胞质成熟的影响,实验使用含0(对照组)、100μmol/L ALA的IVM培养基孵育绵羊卵母细胞24 h,测定IVM 24 h后卵母细胞胞质谷胱甘肽(GSH)及活性氧(ROS)水平。结果表明:相较对照组,培养基中添加100μmol/L ALA显著提高了绵羊卵母细胞胞质GSH水平,极显著降低了绵羊卵母细胞胞质ROS水平。由此可知,添加100μmol/L ALA可以显著增强IVM后绵羊卵母细胞的抗氧化能力,显著改善IVM后绵羊卵母细胞氧化平衡状态。     

α-亚麻酸通过提高培养基抗氧化能力促进绵羊卵母细胞体外核成熟

本实验旨在研究体外成熟(IVM)培养基中添加不同浓度α-亚麻酸(ALA)(0、10、50、100、200μmol/L)对绵羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的影响,测定IVM 24 h后培养基中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量。结果表明:与添加0μmol/L ALA相比,培养基中添加50、100μmol/L ALA促进绵羊卵母细胞的卵丘扩展(P<0.05),且100μmol/L ALA卵丘细胞扩展率最高;添加100μmol/L ALA促进绵羊卵母细胞的核成熟(P<0.05);添加200μmol/L ALA则具有抑制卵丘扩展和细胞核成熟的趋势(P<0.05);添加100μmol/L ALA增加SOD活力(P<0.05)和GSH-Px活力(P<0.05);添加50、100μmol/L ALA显著降低MDA含量(P<0.05),又以添加100μmol/L ALA效果最好。综上,添加100μmol/L ALA可以通过抗氧化作用改善绵羊体外成熟培养基微环境,促进卵丘扩展和卵母细胞核成熟。     

白藜芦醇对绵羊卵母细胞体外受精的影响

本试验旨在研究不同浓度（0、0.5、2.0、5.0 μmol/L）白藜芦醇（resveratrol,RES）对绵羊卵母细胞体外受精（in vitro fertilization,IVF）、卵母细胞抗氧化能力及卵丘细胞分泌类固醇激素的影响。绵羊卵母细胞在含不同浓度RES的体外成熟（in vitro maturation,IVM）液中培养24 h以后进行体外受精,并收集IVM液,测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）的活性及脂质过氧化产物丙二醛（monochrome display adapter,MDA）的含量;用酶联免疫法测定雌二醇（estradiol,E₂）和孕酮（progesterone,P₄）的浓度。研究结果表明,与对照组相比,在IVM液中添加0.5 μmol/L RES显著提高卵裂率（P<0.05）,但对受精率和囊胚率没有显著影响（P>0.05）;5.0 μmol/L RES显著降低受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）,对胚胎发育有抑制作用;在IVM和体外培养（in vitro culture,IVC）液中分别添加0.5 μmol/L RES均显著提高受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）。与对照组相比,在IVM液中添加RES对卵丘细胞分泌E₂有一定的抑制作用,5.0 μmol/L RES显著降低E₂浓度（P<0.05）;0.5 μmol/L RES显著提高卵丘细胞P₄分泌量（P<0.05）。0.5和2.0 μmol/L RES增加SOD和GSH-Px等酶的活性,但与对照组相比无显著差异（P>0.05）,却显著降低MDA含量（P<0.05）;而5.0 μmol/L RES显著降低抗氧化酶活性并增加MDA含量（P<0.05）。综上所述,在IVM和IVC液中同时添加0.5 μmol/L RES,通过增强卵母细胞抗氧化能力和P₄的浓度,并降低MDA含量,从而提高胚胎卵裂率和囊胚率。     

α-硫辛酸对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为探究α-硫辛酸（ALA）对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响，本实验将不同浓度的ALA(0、10、25、50μmol/L)添加至体外成熟培养液（IVM）和胚胎发育培养基（PZM-3）中培养，体外成熟培养42 h后检测卵母细胞第一极体排出率，统计卵母细胞孤雌激活胚胎48 h和168 h卵裂率和囊胚率，筛选出ALA最佳添加浓度，并通过检测成熟卵母细胞内活性氧（ROS）水平、谷胱甘肽（GSH）含量、体外成熟卵母细胞内的促凋亡基因Bax的mRNA以及抗氧化基因SOD1、CAT的mRNA表达量，分析ALA在卵母细胞成熟中的作用。结果表明：与对照组相比，25μmol/L ALA组提高了猪卵母细胞第一极体排出率（P<0.05），随着ALA浓度增加，卵母细胞的第一极体排出率呈下降趋势，50μmol/L ALA组降低了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；孤雌胚胎发育能力检测显示，25μmol/L ALA组卵母细胞的卵裂率和囊胚率高于对照组（P<0.05）；与对照组相比，25μmol/L ALA孵育组卵母细胞内ROS水平降低（P<0.05），细胞内GSH含量提高（P<...     

血清和促性腺激素对山羊卵母细胞核体外成熟的影响

试验研究了清和促性腺激素对山羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的,卵母细胞与卵丘扩展的关系以及卵丘扩展与卵母细胞核成熟的关系。结果表明：（1）培养24h，添加PMSG组卵母细胞核成熟率显著高于不加激素组（P＜0．05），而培养到27h，2者成熟率之间差异变得不显著，说明添加PMSG卵母细胞核的最终成熟率没有明显影响，但加速了卵母细胞核的成熟进程；（2）M199＋BSA培养27h，卵母细胞核成熟率显著高于培养24h，而M199＋FCS培养27h与培养24h的成熟差异不显著，说明添加BSA时，卵母细胞核体外成熟速度比添加FCS的慢；（3）卵丘扩展良好与扩展不好的卵母细胞核成熟率以及第1极体形态无统计学差异，说明山羊卵母细胞的核成熟可能不依赖于卵丘扩展；（4）山羊的卵丘扩展产不依赖于卵母细胞；（5）将带壁颗粒细胞与不带壁颗粒细胞的COC分开培养发现，2者卵母细胞核成熟度无明显差异，带有壁颗粒细胞的COC卵丘扩展情况明显优于一般COC。     

罗格列酮对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究体外培养中添加罗格列酮(Rosiglitazone, RSG)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。收集4～6周龄雌性小鼠卵母细胞，随机分为对照组和20μmol/L RSG组。在饱和湿度，38.5℃、5%CO₂培养12 h,统计卵母细胞第一极体排出率。使用DCFH-DA检测卵母细胞内活性氧(ROS);采用CMF2HC检测卵母细胞内谷胱甘肽(GSH)水平；采用JC-1检测卵母细胞内线粒体膜电位；采用实时荧光定量PCR测定抗氧化相关基因的表达水平。结果显示，RSG组卵母细胞第一极体排出率相较于对照组显著提高(P<0.05);与对照组相比，RSG组ROS水平明显降低，GSH和线粒体膜电位水平显著升高(P<0.05)。本研究还发现，RSG组卵母细胞中抗氧化相关基因GPX-3、CAT和SOD-2的mRNA转录水平均显著提高(P<0.05)。结果表明，在体外成熟过程中添加RSG可以提高小鼠卵母细胞成熟率，降低细胞内ROS堆积，提高细胞内GSH水平、卵母细胞线粒体功能和抗氧化基因表达水平，缓解氧化应激造成的损伤，提高卵母细胞体外成熟质量。     

藏红花素对小鼠卵母细胞体外成熟能力的影响

试验旨在探讨藏红花素（crocin）的抗氧化应激作用对小鼠卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。在体外成熟（IVM）培养液中添加不同浓度藏红花素（0、5、10、15、20、25、30 μmol/L），小鼠卵母细胞在体外成熟培养12 h后，检测卵母细胞第一极排出情况、卵母细胞胞质内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量，并进行体外受精（IVF）；体外受精后6 h统计受精率，24 h统计卵裂率，96 h统计囊胚率。结果显示，与对照组相比，10、15 μmol/L藏红花素显著提高了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；当藏红花素浓度继续增加时，卵母细胞的第一极体排出率下降，30 μmol/L藏红花素显著降低了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；5、10、15 μmol/L藏红花素均显著降低了卵母细胞ROS含量（P<0.05），10、15 μmol/L藏红花素均显著提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）。与对照组相比，10 μmol/L藏红花素组受精率、卵裂率、囊胚率差异均不显著（P>0.05），15、20、25、30 μmol/L藏红花素均显著降低受精率和囊胚率（P<0.05），对卵裂率影响不显著（P>0.05）。结果表明，在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加10 μmol/L藏红花素可以显著增加第一极体排出率，显著降低卵母细胞ROS含量、提高卵母细胞GSH含量，但对受精后的胚胎发育无显著影响。     

西洛酰胺对绵羊卵母细胞核成熟及后期胚胎发育的影响

本实验研究不同浓度西洛酰胺(Cilostamide)对绵羊卵母细胞核成熟的抑制效果,并探讨FSH对Cilostamide抑制效果的影响,以及延迟卵母细胞核成熟对随后胚胎发育能力的影响,旨在探索提高绵羊体外胚胎发育能力的新方法。结果表明:5μmol/L的Cilostamide为较合适的添加浓度,使卵母细胞核成熟延迟约4 h;FSH与Cilostamide对抑制核成熟起到协同作用;5μmol/L Cilostamide处理可使绵羊卵母细胞孤雌激活后囊胚率达到40.4%,显著高于对照组29.0%的囊胚率(P<0.05)。     

N-乙酰半胱氨酸对不同直径卵泡来源猪卵母细胞体外成熟效果的影响

旨在在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加N-乙酰半胱氨酸(NAC),揭示NAC对不同直径卵泡来源卵母细胞体外成熟效果的影响，解析其对氧化还原平衡的调控作用。本研究收集猪卵巢上大腔(4～6 mm)、中腔(2～4 mm)、小腔(1～2 mm)卵泡中的卵母细胞，在以上3种卵泡来源猪卵母细胞的体外成熟培养液中，均分别添加0、1、2、4 mmol·L^-1浓度的NAC处理，评价卵丘扩展指数、第一极体排出率等成熟指标，检测卵母细胞中ROS水平、谷胱甘肽(GSH)含量和抗氧化基因的表达水平。结果表明，NAC处理对大腔卵泡来源卵母细胞的卵丘扩展指数和ROS水平无显著影响(P>0.05),对大、中腔卵泡来源卵母细胞的第一极体排出率无显著作用(P>0.05);而适量浓度的NAC(2 mmol·L^-1)处理可显著提高中、小腔卵泡来源卵母细胞的卵丘扩展指数(P<0.05),降低ROS水平(P<0.05),提升小腔卵泡来源卵母细胞的第一极体排出率(P<0.05)。同时，NAC处理对大、中腔卵泡来源卵母细胞中的GSH含量和抗氧化基因SOD、CAT...     

白藜芦醇对猪卵母细胞体外老化的抑制作用

旨在研究白藜芦醇(RES)对猪卵母细胞体外老化的影响及机制。添加不同浓度RES(0、1、2、4μmol/L),体外培养猪卵母细胞44 h后,通过卵丘扩散和第一极体排出率筛选出最佳有效浓度为2μmol/L。卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)成熟培养44 h作为对照组,连续培养68 h作为体外老化组,置于含2μmol/L白藜芦醇成熟培养液中培养68 h,为白藜芦醇处理组。激光扫描共焦显微镜检测染色体和纺锤体,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax表达水平。结果表明:RES处理组和对照组的猪卵母细胞染色体与纺锤体异常率均较老化组显著降低(P<0.01)。用2μmol/L RES处理后,猪卵母细胞Caspase-3和Bax蛋白表达量均有下降,显著低于老化组(P<0.001);Bcl-2蛋白表达量有所升高,但差异不显著。试验表明,RES可明显抑制猪卵母细胞的老化,这一作用可能主要通过抑制线粒体凋亡途径来实现的。     

兔卵母细胞体外成熟培养影响因素的研究

试验旨在探讨卵丘细胞包裹层数、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)对兔卵母细胞体外成熟培养的影响。分别采用切割法和针刺挤压法取母兔卵巢表面的卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes,COCS),将获取的COCS在基础培养液中添加不同浓度表皮生长因子(0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL)及不同浓度的谷胱甘肽(0μmol/mL、0.5μmol/mL、1.0μmol/mL、1.5μmol/mL、2.0μmol/mL)进行体外成熟培养并观察第一极体排出率。结果表明:①手术刀切割法和针刺挤压法平均回收卵母细胞率分别为(22.83、39.29)枚,针刺挤压法显著高于手术刀切割法(P<0.05)。②3层以上卵丘细胞包裹的卵母细胞体外成熟率为81.27%,显著高于1~3层卵丘细胞包裹的体外成熟率63.75%和裸卵细胞体外成熟率23.45%(P<0.05)。③添加20ng/mL的EGF对兔卵母细胞体外成熟培养后成熟率为82.14%,效果最好,且显著高于对照组10ng/mL和30ng/mL EGF组(P<0.05)。④添加不同浓度的谷胱甘肽可以促进和提高兔卵母细胞体外成熟率,其中添加1.0μmol/mL的谷胱甘肽时,卵母细胞成熟率为71.44%,与添加1.5μmol/mL组的相比差异不显著(P>0.05),但显著高于其他组(P<0.05)。结论为添加20ng/mL的EGF和1.0μmol/mL谷胱甘肽,对用针刺挤压法获得3层以上卵丘细胞包裹的兔卵母细胞体外培养效果最佳。     

没食子酸对黄牛卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在研究没食子酸(gallic acid,GA)对黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,进一步优化黄牛卵母细胞体外成熟体系。在卵母细胞体外成熟液(M液)中添加不同浓度没食子酸(0、10、30、50、100μmol/L),成熟22~24h后,统计卵丘扩展情况及卵母细胞成熟率;同时,对成熟的卵母细胞进行正常体外受精(IVF),统计早期胚胎的分裂率、囊胚率、囊胚卵裂球数及卵裂球细胞凋亡率。根据试验结果,选择最优浓度,使卵母细胞在含该浓度没食子酸的成熟液中成熟24h后,检测其细胞内的活性氧水平(ROS)和总谷胱甘肽(TGSH)含量。结果显示,M液中添加30μmol/L没食子酸组卵丘扩展分值和成熟率显著高于对照组(0μmol/L)(P0.05),其他处理组与对照组无显著差异(P0.05);成熟的卵母细胞体外受精后进行后续胚胎培养,其中10和30μmol/L组的分裂率均显著高于对照组和100μmol/L组(P0.05),50和100μmol/L组分裂率较对照组也有所提高,但差异不显著(P0.05);早期囊胚率统计发现,与对照组相比,30和100μmol/L能够显著提高囊胚发育率(P0.05),10和50μmol/L浓度组则无显著差异(P0.05);与对照组相比,30、100μmol/L没食子酸均能显著提高IVF胚胎的早期囊胚卵裂球数(P0.05);但囊胚卵裂球凋亡率与对照组无显著差异(P0.05);对卵母细胞内活性氧和总谷胱甘肽含量检测时,发现30μmol/L没食子酸可显著降低细胞内活性氧水平(P0.05),且显著提高总谷胱甘肽含量(P0.05)。综上所述,在黄牛卵母细胞体外成熟液中添加适量的没食子酸能有效降低卵母细胞内活性氧水平,提高总谷胱甘肽含量,进而提高卵母细胞成熟的质量及其后续IVF胚胎发育能力。     

黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

氧化应激是阻碍胚胎体外发育的重要因素之一,减少氧化应激可能是提高胚胎体外培养效果的途径。本文探讨了不同浓度黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,为体外抗氧化性研究及抗氧化物选择提供参考。试验选择4～6周龄雌性昆明小鼠获取GV期卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的黄芩苷,经37℃、5%CO₂、饱和湿度培养条件体外成熟12 h,统计卵母细胞第一极体排出率,检测卵母细胞胞质内活性氧(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC),并采集8～10周龄雄性昆明小鼠精液,进行体外受精(IVF),分别于受精后6、24、96 h统计受精率、卵裂率和囊胚率。结果表明：体外成熟液中添加40、60μmol/L黄芩苷后,卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),且浓度为40μmol/L极体排出率显著高于60μmol/L,但对成熟后的卵母细胞体外受精率、卵裂率、囊胚率无显著性影响(P>0.05),卵母细胞胞质RO...     

C型钠肽和生长分化因子9预处理对绵羊体外成熟卵母细胞质量和发育能力的影响

为探讨生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)和骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)在协同C型钠肽(C-type natriuretic peptide, CNP)调节卵母细胞减数分裂进程中的作用，提高卵母细胞体外成熟的质量，试验基于CNP预处理的“两步法”体外成熟(in vitro maturation, IVM)体系，研究了预处理阶段添加GDF9和BMP15在调节绵羊卵母细胞减数分裂进程和胞质成熟事件中的作用，并探讨CNP和GDF9联合预处理后对卵母细胞体外成熟质量及发育能力的影响。结果显示，GDF9可显著提高卵丘细胞中CNP受体NPR2基因的表达，从而增加CNP阻滞绵羊卵母细胞减数分裂的效率，而BMP15无此作用。预处理阶段联合添加CNP和GDF9能改善卵丘细胞功能，并且在CNP的作用基础上进一步增加卵母细胞线粒体的活性和数量、GSH含量，并降低ROS水平，从而提高卵母细胞体外成熟后的质量以及体外受精后的发育效率，卵裂率和囊胚率得到显著增加。研究结果不仅表明GDF9能强化CN...     

GM-CSF对猪卵丘细胞扩展相关基因表达的影响

试验旨在研究猪卵母细胞体外培养过程中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对卵丘细胞的影响。在成熟培养液不变的情况下添加10μg/L和100μg/L的GM-CSF,对卵丘卵母细胞复合体(COC)分别培养12、24、48 h,运用CCK8检测试剂盒检测卵丘细胞活性。收集培养48 h的COC,观察卵丘细胞扩展情况,统计卵母细胞极体排出率。结果显示,GM-CSF对卵母细胞极体排出率无显著影响,但有助于3～4级卵丘细胞的扩散。100μg/L的GM-CSF作用48 h,能够极显著提高卵丘细胞的细胞活性(P0.01)。研究表明,100μg/L的GM-CSF可促进COC中3～4级卵丘细胞的扩展。     

L-肉碱对水牛卵母细胞体外成熟的影响

以水牛为模型,通过探讨L-肉碱(L-carnitine)对水牛卵母细胞体外成熟的影响,同时深入研究添加L-肉碱后卵母细胞抗氧化能力的变化情况,以进一步阐明L-肉碱影响卵母细胞成熟的作用机制。水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在添加有不同质量浓度的L-肉碱(0,1,10,100 mg/L即对照组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组)的成熟液中体外成熟培养24h后,统计卵母细胞第一极体排出率。结果显示:Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组卵母细胞第一极体排出率分别为(64.44±1.93)%、(66.17±2.76)%和(63.27±1.19)%,与对照组(56.60±1.56)%相比差异显著(P<0.05)。免疫荧光染色观察显示:添加L-肉碱的各处理组的卵母细胞中活性氧的含量显著低于对照组(P<0.05)。同时,利用酶联免疫法测定卵母细胞中脂质过氧化物丙二醛的含量,结果显示Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组的卵母细胞中脂质过氧化物丙二醛的含量分别为0.125 797,0.125 217,0.124 155μmol/L,极显著低于对照组(0.142 609μmol/L)(P<0.01)。此外,采用实时荧光定量PCR方法检测卵母细胞周围的卵丘细胞中卵丘扩展相关基因ptx3、has2以及卵母细胞抗氧化相关基因gpx4的表达情况,分析结果显示:Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组卵丘细胞中has2的表达量均显著高于对照组的表达量(P<0.05),其中以Ⅱ组的最高;而Ⅱ组和Ⅲ组的卵丘细胞中ptx3基因和卵母细胞中gpx4基因的表达量显著高于对照组(P<0.05)。综上可知,水牛卵母细胞体外成熟液中添加适合质量浓度的L-肉碱能显著提高卵母细胞体外成熟率,推测L-肉碱可以通过提高卵母细胞抗氧化能力来促进卵母细胞的体外成熟。     

萝卜硫素对体外成熟小鼠卵母细胞谷胱甘肽合成相关基因表达的影响

本研究通过比较体内外成熟卵母细胞中谷胱甘肽(GSH)合成相关基因(Gclc、Gclm、Gss)的表达差异,并尝试利用萝卜硫素(Sulforaphane,SFN)来提高卵母细胞中GSH的合成。利用3周龄小鼠卵母细胞进行体外成熟,结果表明:在自然成熟的卵母细胞中,Gclc、Gclm在MⅡ期附近表达较高,而卵丘细胞在MⅠ期表达较高;Gclc、Gclm在体外成熟MⅠ、MⅡ期卵母细胞中的表达均显著低于体内水平(P0.05),而在体外成熟卵丘细胞中仅MⅠ期表达水平低于体内;Gss表达水平没有显著变化。此后尝试分别添加1、5、10、20μmol/L的SFN来改善体外卵母细胞中GSH含量,结果表明添加10μmol/L SFN可以显著提高GSH合成相关基因的m RNA水平(P0.05),最终提高体外卵母细胞中谷胱甘肽含量,以达到优化体外成熟体系的目的。     

没食子酸对黄牛卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在研究没食子酸（gallic acid，GA）对黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响，进一步优化黄牛卵母细胞体外成熟体系。在卵母细胞体外成熟液（M液）中添加不同浓度没食子酸（0、10、30、50、100 μmol/L），成熟22~24 h后，统计卵丘扩展情况及卵母细胞成熟率；同时，对成熟的卵母细胞进行正常体外受精（IVF），统计早期胚胎的分裂率、囊胚率、囊胚卵裂球数及卵裂球细胞凋亡率。根据试验结果，选择最优浓度，使卵母细胞在含该浓度没食子酸的成熟液中成熟24 h后，检测其细胞内的活性氧水平（ROS）和总谷胱甘肽（TGSH）含量。结果显示，M液中添加30 μmol/L没食子酸组卵丘扩展分值和成熟率显著高于对照组（0 μmol/L）（P<0.05），其他处理组与对照组无显著差异（P>0.05）；成熟的卵母细胞体外受精后进行后续胚胎培养，其中10和30 μmol/L组的分裂率均显著高于对照组和100 μmol/L组（P<0.05），50和100 μmol/L组分裂率较对照组也有所提高，但差异不显著（P>0.05）；早期囊胚率统计发现，与对照组相比，30和100 μmol/L能够显著提高囊胚发育率（P<0.05），10和50 μmol/L浓度组则无显著差异（P>0.05）；与对照组相比，30、100 μmol/L没食子酸均能显著提高IVF胚胎的早期囊胚卵裂球数（P<0.05）；但囊胚卵裂球凋亡率与对照组无显著差异（P>0.05）；对卵母细胞内活性氧和总谷胱甘肽含量检测时，发现30 μmol/L没食子酸可显著降低细胞内活性氧水平（P<0.05），且显著提高总谷胱甘肽含量（P<0.05）。综上所述，在黄牛卵母细胞体外成熟液中添加适量的没食子酸能有效降低卵母细胞内活性氧水平，提高总谷胱甘肽含量，进而提高卵母细胞成熟的质量及其后续IVF胚胎发育能力。     

环境雌激素灭多威对牛卵母细胞体外培养质量的影响

试验旨在研究体外培养液中添加灭多威（methomyl，MET）对牛卵母细胞质量的影响。通过免疫荧光染色和实时荧光定量PCR等方法检测牛卵母细胞的卵丘细胞扩展程度、第一极体排出率、活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平、谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平、线粒体膜电位（ΔΨm）以及凋亡相关基因的表达进行评价。结果显示，不同浓度MET不影响卵丘细胞的扩展程度，但200 μmol/L MET处理组卵母细胞的第一极体排出率显著低于对照组（P<0.05）。与对照组相比，200 μmol/L MET处理组的卵母细胞ROS水平显著升高，GSH水平、线粒体膜电位（ΔΨm）均显著降低（P<0.05）。此外，本研究还发现，200 μmol/L MET处理组卵母细胞中促凋亡基因Caspase-3和Bax的mRNA转录水平显著升高，抗凋亡基因Bcl-xl的mRNA转录水平显著降低（P<0.05）。上述结果表明，MET可以通过增加氧化应激和细胞凋亡来降低体外培养牛卵母细胞的质量。     

SIRT1对牦牛卵母细胞体外成熟与老化的影响

旨在探索SIRT1在牦牛卵母细胞体外成熟与老化过程中的作用。本研究在体外成熟液中分别添加SIRT1特异性激动剂SRT2104 (SRT组)和特异性抑制剂Inauhzin (INZ组),牦牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)体外培养24 h后,观察卵丘细胞的扩展和第一极体的排出情况;利用免疫荧光检测体外培养24与36 h后卵母细胞内的ROS水平;采用实时荧光定量PCR法检测体外培养24与36 h后卵母细胞内SIRT1、FOXO3a、SOD2以及Bax的表达水平;体外培养24与36 h后的牦牛卵母细胞进行体外受精,观察并统计其卵裂率与囊胚形成率。结果显示,体外培养24 h,SRT组的卵丘细胞扩展程度显著高于对照组(P0.05),而INZ组的卵丘细胞扩展程度和第一极体排出率显著低于对照组(P0.05)。随着体外培养时间的增加,卵母细胞内的ROS水平显著增加(P0.05);添加SRT2104能显著抑制卵母细胞中ROS水平的积累(P0.05),而添加Inauhzin则显著上调卵母细胞内的ROS水平(P0.05)。体外培养24 h后,SRT组SIRT1、FOXO3a与SOD2的表达水平显著高于对照组(P0.05),但Bax的表达水平显著降低(P0.05);INZ组的SIRT1、FOXO3a与SOD2表达均显著低于对照组(P0.05),但Bax的表达水平显著上调(P0.05)。牦牛卵母细胞体外培养24 h后,SRT组的卵裂率与囊胚形成率显著高于INZ组和对照组(P0.05);卵母细胞体外培养36 h后,INZ组的卵裂率和囊胚形成率显著低于其他组(P0.05)。综上表明,SIRT1参与了牦牛卵母细胞的体外成熟,在体外培养液中适当添加SIRT1激动剂,有利于卵母细胞体外成熟及缓解老化,同时改善早期胚胎的发育能力。