体外培养时间,卵丘细胞数目对卵母细胞膜电位的影响

应用细胞内微电极技术,研究体外培养时间、卵丘细胞数目对猪卵母细胞模电位的影响。结果表明：体外培养时间对卵母细胞膜电位有显著影响。体外培养０ｈ膜电位为－８．９７±０．５０ｍＶ,１８ｈ膜电位为－４６．４０±１．７０ｍＶ,２４ｈ膜电位为＋１０．６０±１．００ｍＶ,３６ｈ膜电位为＋２６．５０±１．００ｍＶ,５０ｈ膜电位为＋２６．４０±１．１０ｍＶ。卵丘细胞数目对卵母细胞膜电位亦有影响。多丘卵的膜电位为－８．９７±０．５０ｍＶ,少丘卵膜电位为－１．５５±０．６５０ｍＶ,无丘卵的膜电位为＋２．４０±０．３０ｍＶ。     

猪核移植重组胚胎的发育能力

以ＭｃＧｒａｔｈ－Ｓｏｌｔｅｒ（１９８３）提供的去（注）核方法，将猪胚胎的单个卵裂球细胞注入去核的次级成熟卵母细胞，借助电融合的方法（ＡＣ；５Ｖ，１．５ＭＨｚ，１２－１５ｓ；ＤＣ：２ｋＶ／ｃｍ，４０μｓ。电激活／融合液：０．３ｍｏｌ／Ｌ甘露醇＋－．１ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４＋０．１ｍｍｏｌＣａｃＬ２＋７．５ｍｇ／ｍｌＣＣＢ）融入受体胞质构成重级胚，体外培养（培养液为改衣ＴＣＭ－１９９；培养条件为５％     

次黄嘌呤对猪卵母细胞体外自发成熟抑制作用的研究

利用猪卵母细胞体外无血清培养技术,研究了次黄嘌呤（ＨＸ）对猪卵母细胞体外自发成熟的抑制作用。猪卵丘－卵组细胞复合体（ＣＯＣ）和裸卵母细胞（ＤＯ）取自初情期猪卵巢,培养在Ｍ－１９９培养液中,并施以各种自理培养不同时间后,观察卵母细胞核成熟（ＧＶＢＤ）情况。实验结果表明：⑴ＨＸ（１－４mmol/Ｌ）对猪ＣＯＣ的自发成熟具有抑制 作用,且具有剂量领事关系。４mmol/Ｌ的ＨＸ对ＣＯＣ和ＤＯ自发成熟的抑制作用,且具     

猪卵母细胞体外受精中膜电位变化与超微结构关系的研究

应用细胞内微电极技术，测定了猪卵母细胞体外成熟和体外受精过程中膜电位的变化，并结合电镜技术探讨了膜电位变化与卵母细胞超微结构的关系。结果发现，猪卵母细胞在体外发育培养前，膜电位为较小的负值；体外发育培养后，膜电位随着体外发育自发变化，首先发生去极化，然后发生极性倒转，由负值转为正值，体外受精后，膜电位复极化为负值，且随着受精发育负值增大，超微结构结果表明，猪卵母细胞的膜电位变化与超微结构密切相关。     

犬卵母细胞体外成熟的影响因素

采集发情期和间情期犬卵巢,回收大腔（直径大于１ｍｍ）卵泡和不可见卵泡的卵母细胞,在４种成熟液（ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ和ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ）中成熟后进行了受精试验。结果：（１）发情期大于２ｍｍ和１～２ｍｍ的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率（４２．５％,３２．５％）显著高于间情期卵母细胞（２０．４％）,但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率（２８．９％）与间情期卵母细胞差异不显著;（２）在成熟液中添加促性腺激素,能有效地提高卵母细胞成熟率,不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性（３０．０％比７．８％）大于大腔卵泡的卵母细胞（４２．５％比２９．０％）;（３）卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性;（４）ＥＤＳ可诱导卵丘扩散,但不能有效提高卵母细胞的成熟率;（５）发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后,与体外获能的精子进行体外受精,其卵裂率分别为１６．０％（４／２５）,０％（０／４０）和２．５％（１／４０）。     

超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟和体外受精的研究

以ＴＣＭ１９９＋１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ＋青霉素（６ｍｇ／Ｌ）＋链霉素（５ｍｇ／Ｌ）为基础培养液（ＢＭ），再分别加入不同成分，配成５种卵母细胞成熟液：（Ａ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ；（Ｂ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ（２．５ｍｇ／Ｌ）；（Ｃ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２（１ｍｇ／Ｌ）；（Ｄ）ＢＭ＋１０％ＦＣＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２；（Ｅ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２＋颗粒细胞（１．５×１０６～３．０×１０６个／ｍＬ）。在３８．５℃、５％ＣＯ２下培养２６ｈ，排卵后第１天卵巢卵母细胞体外成熟率分别为６７．６７％（２０／３０），６０．４２％（２９／４８），８３．６７％（４１／４９）和８０．８２％（５９／７３），排卵后第５天卵巢卵母细胞，在培液Ｄ中体外成熟率为７１．４３％（４５／６３）。排卵后第１天的９８枚卵巢卵母细胞，体外成熟体外受精卵裂率为２１．４３％，２１枚２细胞胚移植５头受体获２头羔羊。研究表明，超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟卵母细胞，并可通过体外受精获得试管山羊     

牛卵泡卵母细胞冷冻保存后发育潜力的研究

对用３种不同方法（Ａ法：１．０ｍｏｌ／Ｌ甘油平衡，从２０℃开始以１℃／ｍｉｎ的速度降至－℃，植冰，１０ｍｉｎ后以０．３℃／ｍｉｎ降至－３０℃，再以０．１℃／ｍｉｎ降至－３３℃，投入液氮；Ｂ法：１．６ｍｏｌ／Ｌ丙二醇＋０．ｌｍｏ１／Ｌ蔗糖平衡，５℃冰箱中保存１５ｍｉｎ，从Ｏ℃开始按Ａ法中的程序降温；Ｃ法：即玻璃化法）冷冻保存的牛ＧＶ期卵母细胞的发育潜力进行了研究。解冻后，Ｃ组卵母细胞形态正常率显著高于Ａ、Ｂ两组。３种方法冷冻的卵母细胞成熟培养后，平均卵丘扩展率为６０％，其中Ｃ组最高（６９．９％）。卵丘扩展的卵母细胞中，７９．３％发生ＧＶＢＤ，但大多数没有达到ＭＩ期。３组冷冻卵母细胞的体外成熟率、体外受精率分别为１４．２％、８．３％、２０．０％和１０．０％、７．１％、１２．１％，其中Ａ组中有１枚卵裂。     

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状孟庆刚李光鹏曹允考（东北农业大学动物科学系１５００３０）１引言随着哺乳动物胚胎工程技术的发展，人们对猪卵母细胞体外成熟的研究也取得了很大的进展。关于猪卵母细胞体外成熟的理论和培养技术也日渐成熟。相信随此项技术的发展，人们...     

受精用液种类对牛狼母细胞体外受精的影响

比较了应用改良Ｔｙｒｏｄｅ＇ｓ液与０．６％ＢＳＡ－ＴＣＭ１９９作为受精液（实验１）、这两种受精液的不同配比作为受精液（Ｔ：ＢＴ分别为３：１、１：１和１：３；Ｔ为对照组，实验２）和在不同精时间采用不同受精液（先用Ｔ，ＩＶＦ２４ｈ后改用ＢＴ或ＴＣＭ１９９＋１０％发情牛血清，实验３），对经体外成熟培养（ＩＶＭ）后的牛卵母细胞体外受精（ＩＶＦ）效果的影响，结果，应用成分复杂的ＢＴ作为受精液，可以提高受精卵     

白牦牛卵母细胞体外成熟的研究

研究了不同激素配比、性周期阶段对白牦牛卵母细胞体外成熟的影响，同时研究了不同培养基对早期胚胎体外发育的影响。结果表明：M199＋0．2mmol／L丙酮酸钠＋10％NBs＋5．0mg／L LH＋0．5mg／LFSH＋1＞g／ml 17β-E2是白牦牛卵母细胞体外成熟较为理想的培养系统（成熟率79．4％、卵裂率42．5％）。采集白牦牛卵母细胞时卵巢所处性周期阶段（卵泡期、黄体期）影响卵母细胞的体外成熟（成熟率分别为77．6％、69．5％，卵裂率分别为45．7％、35．6％）。输卵管上皮细胞和颗粒细胞是理想的共培养细胞，能有效克服白牦牛早期胚胎发育阻滞（桑囊胚发育率分别为10．6％、7．7％）。     

屠宰绵羊卵巢卵母细胞的体外培养

为了使屠宰绵羊卵巢卵母细胞能够用于体外受精,本文着重探索了使卵巢卵母细胞体外培养成熟的方法和条件。实验结果表明,以TCM-199加10％FCS作为基本培养基,培养24～25小时,可以使绵羊卵巢卵母细胞培养成熟,其成熟率可达55.5％(435/784)。如果在培养液内添加hCG(0.02mg/ml)或LH(0.01mg/ml),并且尽可能保持卵丘细胞的完整,则可以使成熟率提高到76.9％(140/182)～82.9％(112/135)。     

RADIOGRAPHIC EVALUATION OF APPENDICULAR SKELETAL MATURATION IN THE RHESUS MONKEY*

Longitudinal radiographic evaluation of skeletal maturation in 28 rhesus monkeys demonstrated that the majority of appendicular ossification centers were identified radiographically by 175 days of age and that physeal union was complete by 7.3 years in males and 7.2 years in females.     

猪卵母细胞的室温(20℃)保存与成熟培养

猪卵母细胞在TCM-199培养基中,在20℃和37℃(对照)下分别培养24小时和48小时。在TCM-199培养基中加入20％ 3种犊牛的混合血清、5％的猪卵泡液。气体浓度为90％N_2、5.2％O_2和4.8％CO_2。24小时20℃和37℃培养的卵母细胞经台盘蓝鉴别后存活率分别为71％和69％。当培养到48小时,20℃组的成活率明显高于37℃组,分别为61％和25％。电镜观察:20℃组卵母细胞的线粒体较完整,微绒毛较多。而37℃组则相反。当20℃培养24小时后,把卵母细胞移到37℃下继续培养24小时,仍有45％的存活率,11％的颗粒细胞扩散程度较好。染色或切片后可见第一极体和染色体,说明处于第二次成熟分裂的中期。实验说明:猪卵母细胞20℃保存24小时仍有继续发育成熟的潜力。     

牛卵母细胞皮层颗粒荧光染色法质成熟鉴定

以皮层颗粒（ＣＧ）单层分布于质膜下做为卵母细胞质成熟的指数,利用ＣＧ荧光染色法,研究了不同类型牛卵母细胞的质成熟情况。结果表明：（１）采自直径大于５ｍｍ、２￣５ｍｍ一小于２ｍｍ卵泡的卵母细胞,成熟增减前的质成熟率分别为４．２％、１．８％和０,三者间无显著差异 ,但所有的大卵泡卵以及９５．２％的中卵泡卵,ＣＧ已分布于皮层,而小卵泡卵中则有５１．７％的卵子,ＣＧ尚未迁移至皮质区,仍以簇的形式分布于细胞     

不同超数排卵方法所获羔山羊卵母细胞体外成熟率及体外受精率的比较

本研究观察了不同超排处理方法对羔山羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响，并将体外受精胚胎进行了移植，以便探讨利用羔山羊卵母细胞生产体外受精胚胎的技术途径。对２～４月龄羔山羊用ＦＳＨ、ＦＳＨ＋ＬＨ（静脉注射）和ＦＳＨ＋ＬＨ（肌肉注射）三种方法进行超排处理，平均分别回收１６．０、２０．３和１５．０枚卵母细胞。将这些卵母细胞进行２０～２４ｈ的成熟培养后，其成熟率分别为４５．５％，４４．４％和７６．５％。成熟卵母细胞经体外受精，体外发育培养后其２～４细胞胚胎的发生率分别为５．６％ａ、６．７％和３１．７％ｂ（ｂ，ｖｓ，ａ，Ｐ＜０．０５）。将９枚２～４细胞期胚胎移植给６只受体母羊，结果有２只妊娠并产羔２只。     

牛初乳酶解物对离体犊牛小肠上皮细胞增殖和吸收功能的影响

初乳经胃蛋白酶水解处理90分钟后所产生的水解物对离体犊牛小肠上皮细胞有明显的促增殖作用(P<0.01) ,而初乳经胰蛋白酶处理则不表现促增殖活性。初乳酶解物对促进细胞吸收葡萄糖的作用随着酶解处理时间的延长而逐渐增强 ,初乳经胰蛋白酶水解处理90分钟或经胃蛋白酶水解处理150分钟时的产物对细胞吸收葡萄糖的促进作用分别达到最强(P<0.01)。试验结果表明 ,初乳酶解物即小分子蛋白质(肽)具有刺激离体小肠上皮细胞增殖和功能发育的活性。     

不同条件对牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究分析了卵巢不同离体时间（＜３ｈ、４～５ｈ、＞６ｈ），不同培养时间（１８～２２ｈ、２３～２４ｈ、＞３０ｈ），不同成熟培养液（添加ＦＳＨ、ＨＣＧ、ＦＣＳ）以及不同培养温度（３４℃、３６℃、３８．５℃）对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明，小于３小时离体时间成熟率、受精率（７８．８３％、５８．０％）高于其它组；培养时间大于３０小时组成熟率高于其它组（９３．８１％），但受精率低于其它组（２３．０％）；添加ＨＣＧ与ＦＣＳ组成熟率、受精率（８９．４％、７８．９５％）大于ＦＳＨ组；培养温度以３８．５℃为佳，成熟率与受精率（８７．２％、７３．６％）皆高于另二组，差异显著。     

猪卵巢卵母细胞的体外成熟和体外受精

将从屠宰母猪卵巢采得的卵母细胞-卵丘细胞复合体(Oocyte-cumulus Cell Complex.OCC)在含PMSG的M199培养40～44小时,卵丘细胞大部分扩散(86.4％)。48.1％(142/295)的卵母细胞排出第一极体(PBI)。将体外成熟的卵母细胞与体外获能精子授精后30～70小时,80.5％(103/128)的卵母细胞受精并可在体外发育到2～8细胞甚至桑椹胚。本文还对裸卵母细胞的体外成熟和体外受精进行了研究,对体外受精卵的早期发育作了观察。实验结果表明:PMSG对诱导卵丘细胞扩散及卵母细胞的全面成熟有重要作用,在OCC中的卵母细胞成熟率高于裸卵母细胞体外授精后8～10小时将受精卵放入改良KRB液培养可使卵裂比例明显提高。