表达鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建

以插入鸡Ⅱ型干扰素（IFN－Ⅱ）cDNA序列的重组质粒AIFN为模板，根据鸡痘病毒早晚期启动子PE／L的序列设计上上游引物，鸡IFN－Ⅱ基因的cDNA3'端序列设计了下游引物，采用PCR法扩增包括启动子PE／L和鸡IFN－Ⅱ全长cDNA序列的基因片段。将该扩增片段定向插入鸡痘病毒转移载体1175中，获重组转移载体1175IFN，用以转染已感染鸡痘病毒282E4疫菌株（wt-FPV)的鸡（Gallus gallus)胚成纤维细胞（CEF）。1175IFN与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了表达IFN－Ⅱ的重组鸡痘病毒rFPV-IFN-Ⅱ。通过在含X－gal的营养琼脂上连续挑选篮色病毒斑获得并纯化rFPV-IFN-Ⅱ。以细胞病变抑制实验证实，rFPV-IFN-Ⅱ感染的CEF表达了具有抗水泡性口炎病毒（VSV）活性的鸡IFN－Ⅱ。rFPV-IFN-Ⅱ(M.O.I=0.01)感染CEF72h后，培养上清中IFN－Ⅱ的表达量为1280U／mL。动物实验表明，rFPV-IFN-Ⅱ接种雏鸡7d或14d后，其在体内表达的IFN－Ⅱ可显著减轻载体鸡痘病毒对1日龄SPF雏鸡体重增长的抑制作用。     

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2重组鸡痘病毒的构建

含ＩＢＤＶ保护性抗原ＶＰ２的质粒,以ＳｐｈＩ消化,然后用Ｔ４噬菌体ＤＮＡ聚合酶将末端补平,产物纯化后再以ＳａｌＩ消化一次,经再次纯化后与ＳｍａＩ和ＳａｌＩ分步酶切的鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１相连,使唤基因顺向插入到载体Ｐ７５启动子下游,得到含ＩＢＤ ＶＰ２基因的重组插入载体ｐＦＧ ＶＰ２。     

表达鸡Ⅱ型干扰素重组鸡痘病毒的构建及其特性分析

将鸡Ⅱ型干扰素(ChIFNγ)基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中，获得重组转移载体pSY681-ChIFNγ。将pSY681-ChIFNγ转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞，使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组，产生表达ChIFNγ的重组鸡痘病毒rFPV-ChIFNγ。在含有X-ga1的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选，通过PCR和间接免疫荧光等实验证实获得纯化的、表达ChIFNγ的重组鸡痘病毒。将在鸡胚成纤维细胞中培养72h的rFPV-ChIFNγ上清接种小鼠成纤维细胞(L929)，通过细胞病变抑制实验证明重组ChIFNγ具有抑制水疱性口炎病毒复制的活性，培养上清的抗病毒效价为2048U／mL。     

鸡传染性支气管重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LHB株病毒攻击的免疫保护

rFPV-IFNγS1是一株共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒,将其接种SPF鸡3周后,用传染性支气管管炎病毒异源毒株攻击,考察重组疫苗对异源毒株攻击的保护作用。结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中抗体很快产生,外周血中CD 4 和CD 8 T淋巴细胞与非免疫对照组相比都有显著差异。用LHB株IB病毒攻击后,免疫鸡的病理损伤明显轻于非免疫对照组,并且其排毒时间明显缩短,排毒量明显减少,攻毒后免疫组的发病率为30%(3/10),死亡率为10%(1/10),非免疫对照组的发病率为100%(10/10),死亡率为40%(4/10)。体重分析结果表明,攻毒前后免疫组与对照组相比,体重均没有显著变化,但攻毒后免疫组鸡体重增长的幅度要高于非免疫对照组。从以上结果可以说明,重组疫苗能在动物体内很好表达,对试验动物产生较好的保护作用,同时也减轻了重组疫苗对体重增长的抑制作用。     

新城疫病毒F48E8株核衣壳蛋白基因在鸡痘病毒中的表达及其部分序列分析

通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增了新城疫病毒(NDV)F48E8株核衣壳蛋白(NP)基因,并克隆到pUC18中,得阳性克隆pUCNP.应用分子克隆技术,将NP基因导入鸡痘病毒(FPV)转移载体pFG1175-1中P7.5启动子的下游,得到含NDV NP基因的质粒pFGNP1175-1.利用脂质体转染技术,将该质粒转染FPV疫苗株282E4感染3～4 h的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化多次,得到稳定的重组FPV.用狄高辛标记的探针进行斑点杂交实验,结果表明pFGNP1175-1已与FPV 发生同源重组;用抗NDV的SPF鸡的阳性血清进行间接免疫荧光实验,证实重组FPV在感染细胞中表达了F48E8株NP蛋白.该基因两端部分序列与已发表的D26株NP基因对应区域的核苷酸同源性为89.1%,推断的氨基酸同源性则为93.1%.     

^125I在鸡体内的积累,分布与转移

研究了＾１２５Ｉ通过呼吸道及食道两种途径进入鸡体后，以鸡体不同部位的分布、积螺与转换，以及由粪便、产蛋向体外排出的状况。结果表明，进入鸡体的＾１２５Ｉ几乎可以被各部分呼收，肌肉中含量最低，甲状腺中最高。＾１２５Ｉ在各器官组织中动移可分两种类型：对于大部分器官，＾１２５Ｉ补吸入或食入后 ，第１天即达最大值，以后逐渐减少，以后逐渐减少；另一种是随着进入后时间的延长逐渐达最大值，以后又减少，甲状腺属此类     

口蹄疫病毒整联蛋白受体αvβ6在绵羊体内的组织分布

以间接免疫组化法(IHA)检测口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)整联蛋白αvβ6在健康绵羊(Ovis aries)不同组织器官中的表达分布。研究结果表明,在舌、鼻、唇、软腭、咽、喉头、气管、肺脏和蹄冠状带组织上皮细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物。结果表明,整联蛋白受体αvβ6受体广泛存在于健康绵羊体内的组织器官中,在呼吸系统以及蹄冠状带等多种FMDV易感组织器官的上皮细胞中表达量较高,且主要在细胞膜和细胞质中表达。     

环境中砷元素的分布、化学形态、生物毒性及其污染治理

近年来,由于人类的工农业活动影响,砷污染已经成为一个全球性的环境与健康问题。在物理、化学和生物等作用下,环境中的砷表现出不同的化学形态,砷对生物的毒性与之有着密切联系。环境中的砷通过饮食、饮水、呼吸和接触皮肤等方式进入人体,产生急性或慢性中毒。对于治理和修复已遭受砷污染的环境,目前有一些成熟的治理和修复技术,其中超砷富集植物的发现,植物修复技术被认为是一种修复土壤砷污染的有效技术。     

柑橘溃疡病菌单链二硫键稳定重组抗体的构建、表达和特性

柑橘溃疡病(citrus bacterial canker disease,CBCD)是危害柑橘(Citrus reticulata Blanco)的重要病害,为了给柑橘溃疡病的现场快速诊断提供一种稳定的重组抗体,构建一种快速检测技术,本研究以鼠源抗柑橘溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac)表面脂多糖的二硫键稳定性抗体dsFv为模板进行基因改造,利用重叠延伸PCR在其重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)之间引入一条人类抗体重链恒定区1(CH1)5'端12个氨基酸的序列作为连接肽,构建重组单链二硫键稳定抗体基因sc-dsFv。将获得的基因连接pET24a(+)载体,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱导表达。表达产物经体外复性并以Ni-NTA亲和层析对目标蛋白sc-dsFv进行纯化,利用斑点免疫杂交、ELISA和BIAcore检测抗体的活性、稳定性、特异性及亲和力。构建的抗体基因经测序结果表明,抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因之间成功引入目标连接肽序列,重组sc-dsFv蛋白实现了原核高效表达;通过体...     

久效磷在悬铃木植株体内动态分布的研究

该文通过试验测定了茎部施入的久效磷在悬铃木植株体内的含量,给出了描述久效磷含量变化过程的灰色动态模型,分析了影响久效磷在悬铃木体内动态分布的有关因素及其影响情况。研究结果为开发植株茎部施药技术及机具提供了理论依据。     

重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对伪狂犬病最小免疫剂量的测定

伪狂犬病(Pseudorab ies PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的,可导致多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑髓炎为主要症状的急性传染病。猪是该病毒的中间宿主和传染源,感染后可引起妊娠母猪发生严重的繁殖障碍造成死胎、流产和木乃伊胎,患病仔猪表现为神经症状和呼吸道病,多以死亡告终。在规模化、集约化、现代化高密度养猪地区,PRV可在猪群间不断传播,是危害我国养猪业的一个重要传染病。用疫苗进行免疫接种是预防、甚至消灭伪狂犬病的根本措施。目前伪狂犬病疫苗在我国应用最多的是Bartha-K 61株,该疫苗是20世纪60年代匈牙利Bartha等人将野毒株用鸡胚成纤维细胞反复传代而获得的一个人工致弱疫苗株,该毒株呈现gE基-因缺失表型,其毒力大大减弱,免疫原性很好,是世界上公认的优良疫苗株。我们以Bartha-K61株为载体构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株GP5基因的重组伪狂犬病病毒(rPRV-GP5),但GP5基因的插入是否会改变伪狂犬病病毒Bartha-K61株对伪狂犬病的免疫保护效力?为此本研究通过测定重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对伪狂犬病的最小免疫剂量,评价rPRV-GP5对伪狂犬病的保护效力。24只5~6月龄PRV阴性健康绵羊随机分成6组,每组4只,其中1组为生理盐水对照组,其余5组分别后腿肌注重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)冻干疫苗(病毒含量为5×106.0TCID50/mL)5×104.0TCID50/只、5×103.0TCID50/只、5×102.0TCID50/只、5×101.0TCID50/只和5TCID50/只,免疫后15 d每只绵羊肌注伪狂犬病毒猪源强毒S株1000 LD50。结果表明:对照组和5TCID50/只组的全部绵羊攻毒后4~5 d均出现典型伪狂犬病症状并死亡,5×101.0TCID50/只组4只绵羊中有2只发病并死亡,其余各组全部保护。结论:重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对绵羊最小免疫剂量为100 TCID50/只,GP5基因的插入没有影响伪狂犬弱毒疫苗Bartha-K61株的免疫原性。     

检测马西尼罗热病毒抗体的重组E蛋白-ELISA的建立

摘要：重组质粒pET-E转化宿主菌 BL21，经1.0mmol/L IPTG 诱导，外源基因以包含体的形式获得高效表达。通过Western blotting 检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测WNV抗体的间接ELISA方法。结果表明，抗原的最佳稀释度为8.6ug/mL，血清的最佳稀释度为1：100，待检血清阳性标准初步定为：OD490nm＞2.1×OD490阴性。用此方法检测了450 份血清样品，结果全为阴性。     

新疆城市酸雨分布特征及变化趋势分析

通过对新疆乌鲁木齐、伊宁、哈密与和田4个城市1991-2008年降水pH值、K值（电导率）及相关的天气气候资料处理,分析了新疆城市酸雨分布特征和变化趋势。结果表明:北疆城市酸雨观测次数远远多于南疆城市,新疆城市降雨pH平均值有逐年平缓降低的趋势,乌鲁木齐和伊宁变化起伏大,哈密与和田变化小,K平均值年变化较为复杂,并且变化剧烈。北疆城市平均pH值明显低于南疆城市,大部分在6.0附近波动,总体呈下降趋势,南疆城市降水pH平均值变化幅度小于北疆城市,降水pH平均值大部分在7.00附近波动;北疆城市平均K值远低于南疆城市,起伏变化平缓且有逐年降低趋势,南疆城市变化剧烈。影响降雨pH平均值和K平均值大小的因素有很多,对于南北疆城市的这种变化,降水量多少可能是其主要的因素,南疆沙尘多也可能是其影响因素之一。     

广东省土壤铜环境背景值空间变异研究

在GIS支持下,结合地统计学软件Surfer对广东省261个土壤剖面的铜环境背景值进行空间变异分析,结果表明:背景浓度高的土壤样品通常位于断裂带、盆地和三角洲地区,并与区域盆地的空间分布对应;铜背景值从A层到C层呈明显的增长趋势,但没有底层富集现象;区域广泛分布的花岗岩和断裂构造的分布是土壤铜元素附存和分布状态的主要影响因素,土壤有机质和粘粒含量也在一定程度上影响着土壤铜元素浓度的空间展布。     

杞麓湖盆地土壤有机质多时相空间分布与演变

基于四期土壤采样点数据,结合样点调查和统计年鉴数据,采用普通克里格、多元回归和探索性回归方法预测杞麓湖盆地土壤有机质(SOM)空间分布并分析其影响因素。结果表明指数和椭球模型分别较好地拟合了2008和2011年、2013和2015年的SOM的空间变异性。四个时相的SOM均由西南到中部再到东北部呈现出低-高-低的分布特征,并且高值核心区的位置不变,但高值区范围逐年扩大。前三个时间段内SOM连续增加的区域面积是连续减小的区域面积的两倍多。土壤亚类类型、农业设施和土壤质地各解释SOM变异的14.3%、2.6%和1.3%。SOM的降低主要由粮食和蔬菜的高产出所导致,适当地减少氮肥施用量并增加复合肥施用量能在一定程度上维持甚至提升SOM含量。     

转基因抗虫棉花重组DNA在土壤中分布的实时定量PCR分析

根据转基因抗虫棉花35S启动子与Cry1A（c）基因以及35S启动子与nptⅡ基因之间的构建特异性序列分别设计引物和探针,建立荧光定量PCR检测方法,并对采集于3个生长时期（播种后40、50d和60d）的不同根区（根表、根际和非根际）土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段进行定量分析。结果表明,所建立的荧光定量PCR方法最低能够检测到10个拷贝数的外源重组DNA片段,定量标准曲线相关系数均达到0.998以上,具有很好的重复性。实时定量PCR分析表明,同一生长时期不同根区土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段拷贝数变化情况均为根表土〉根际土〉非根际土,即转基因抗虫棉花重组DNA片段主要分布于根表土壤中,其次为根际土壤和非根际土壤。在60d生长期内,土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段的拷贝数随生长时期的推进均呈现上升趋势,其分布范围逐渐扩大。土壤中35S-nptⅡ片段拷贝数均高于同一生长时期相应根区中35S-Cry1A片段的拷贝数。转基因抗虫棉花对环境可能存在潜在影响。     

苹果褪绿叶斑病毒库尔勒分离物外壳蛋白基因的克隆、原核表达及特异抗血清的制备

利用RT-PCR获得苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）库尔勒香梨分离物外壳蛋白（CP）基因。经序列分析表明，库尔勒香梨（Pyrus sinkiangensis Yu）分离物CP基因由582个核苷酸组成，编码一个由193个氨基酸组成的蛋白质（GenBank accession No．AY669389）。将其克隆到表达载体pET-28a（＋）中，转化大肠杆菌（Eschedchia coli）BL21，筛选得到阳性克隆pET-ACP。用IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳分析表明，预期的22kD外壳蛋白在大肠杆菌中得到大量表达。回收原核表达的目的蛋白，免疫家兔，制备了ACLSV外壳蛋白的特异性抗血清。Western blot分析表明，所制备的抗血清可用于检测样品中的ACLSV。     

贡嘎山东坡亚高山土壤生物有效磷的时空分异

采用湿化学浸提法测定了贡嘎山东坡亚高山带不同海拔(2 628 m、2 781 m、3 044 m和3210m)峨眉冷杉林的土壤生物有效磷(Bio-PL)含量,并利用原位树脂袋包埋法测定了土壤生物有效磷(Bio-PS)供给量,以阐明土壤生物有效磷的垂直分异和季节变化特征及其主要影响因素。研究发现:(1)土壤Bio-PL库及Bio-PS均随海拔升高呈增大趋势,低海拔地区生物有效磷因淋溶大量流失是形成这种梯度变化的主要原因。(2)随土层深度增加,Bio-PL库及Bio-PS显著降低,有机质层(O层)Bio-PL库约占土壤剖面的75%且该层的Bio-PS全年均为正值。O层中较高的有机磷含量和较强的磷酸酶活性是O层生物有效磷富集的重要原因。(3)2 781 m样点O层Bio-PS在9月最高,而3 044 m和3 210 m样点的Bio-PS在6月和9月出现两个高值。各样点矿质土层的Bio-PS全年多低于0,在8月时最低。Bio-PS的季节变化主要受生物吸收及径流流失控制。     

Observations on the spatial and temporal variation in the phosphorus status of lakes in the British Isles

Abstract. An examination of total phosphorus (TP) concentrations from 902 lakes in England, Scotland and Northern Ireland (NI), suggest that only Scottish lakes have a high percentage (73%) of oligotrophic waters (TP<10 μg PI^-1). The TP status of upland lakes in NI was greater than Scottish lakes particularly if lake catchments were afforested. Although lowland lakes in NI drain a predominately non-urbanized landscape, 38% of lakes below 100 m had TP concentrations > 100 μg PI^-1 and only 29% <35 μg PI^-1. English lakes tended to have higher TP concentrations (70% > 101 μg PI^-1) which may reflect P inputs from sewage treatment works (STWs) although lakes draining agricultural catchments frequently produced high TP concentrations. Between 1985 and 1995, annual point source TP inputs to Loch Leven, Scotland, declined by 8 tonnes P or 40% of the 1985 TP loadings to the Loch. As point source inputs were proportionally richer in dissolved molybdate reactive phosphorus (MRP) than diffuse inputs, the MRP loading was reduced by 46%. From 1974 to 1995, TP concentrations in Lough Neagh (NI) increased despite reduced TP inputs from STWs. Partitioning of annual TP loadings from two major inflowing rivers to Lough Neagh, showed river MRP loadings from non-point sources had been increasing at annual rates of 1.9 and 2.3 kg P km^-2. The remaining non-MRP river loadings had not been influenced by lower TP loads from STWs and showed no tendency to increase with time. Insufficient data is available from other lake systems in the British Isles to judge whether the increase in non-point source MRP loadings observed in the Lough Neagh catchment has been repeated elsewhere.     

兔病毒性出血症病毒JX/97株衣壳蛋白基因的序列测定与分析

对中国兔病毒性出血症病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus,RHDV)JX/97株的衣壳蛋白基因进行了克隆和测序。结果表明,该蛋白的核苷酸序列长度为1739nt,推导的氨基酸序列为579aa。利用分子生物学软件分析了该病毒与国内外22!RHDV的基因序列,结果显示,RHDV不同分离株之间的序列同源性几乎都在90%以上。衣壳蛋白基因的系统发生树分析结果表明,所选的RHDV参考毒株按照一定的遗传距离,可以分为4个基因群,基因群之间的距离有加大的趋势,表明RHDV受环境的影响有向不同方向演变的趋向,即RHDV在长期适应特定环境的过程中,有可能逐渐演变成各具特色的RHDV。