断奶前后仔猪十二指肠、空肠和回肠SGLT1 mRNA表达的变化及半胱胺的影响

研究断奶前后仔猪十二指肠、空肠和回肠SGLT1mRNA表达丰度的变化,并同时观察半胱胺对其表达的影响,从分子水平探讨半胱胺对断奶仔猪葡萄糖吸收的影响与可能的机制。新生仔猪随机分为对照组和实验组,12日龄(D12)起对照组饲喂基础乳猪料,实验组在基础乳猪料中添加120mg/kg半胱胺,两组仔猪均于35日龄断奶,每组分别于断奶前1周、断奶当天、断奶后3d、1周以及断奶后10d随机选取仔猪各6头,宰杀后采集十二指肠、空肠和回肠粘膜,采用RT-PCR方法测定钠-葡萄糖共转运载体1(sodium-glucosecotransporter1,SGLT1)mRNA表达的相对丰度。结果表明,回肠SGLT1mRNA的表达量最高,空肠其次,十二指肠最低;SGLT1mRNA在不同肠段的表达呈现截然不同的发育模式,十二指肠SGLT1mRNA表达量在45d显著上升(P<0.05),而空肠则在42和45d时显著下降(P<0.01),回肠SGLT1mRNA表达在整个实验期间无显著变化;此外,日粮添加半胱胺显著提高38d十二指肠以及42和45d空肠SGLT1mRNA表达,而对回肠SGLT1mRNA表达无显著影响。小肠SGLT1mRNA表达以及日粮添加半胱胺促进SGLT1mRNA表达的作用均呈现时空特异性规律。     

猪肠道寡肽转运载体1(PepT1)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化

研究旨在探讨猪肠道寡肽转运载体（PepT1）mRNA表达的肠段特异性和发育模式,为寡肽营养在养猪生产中的应用提供理论依据。实验分别选取遗传背景相同的1、7、26、30、60、90和150 d蓝塘和长白公猪各5头,测体重后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品;以18S rRNA为内标基因,用实时荧光定量PCR法（SYBR Green Ⅰ试剂盒）检测PepT1 mRNA在60 d长白猪表达的肠段特异性及其在蓝塘和长白猪肠道的发育模式。结果显示：长白猪肠道PepT1 mRNA的表达丰度十二指肠显著高于空肠和回肠（P <0.05）,结肠无PepT1 mRNA的表达;PepT1 mRNA的表达丰度在十二指肠为蓝塘猪7、90 d和长白猪60 d,而在空肠和回肠为蓝塘猪60 d和长白猪90 d时达最高水平（P <0.05）;蓝塘和长白猪肠道PepT1 mRNA的表达在断奶前（28 d断奶）具有不同的发育模式,而在断奶后则具有相似的发育性变化;同一猪种不同肠段PepT1 mRNA的表达模式不同,但空肠和回肠在断奶后具有相似的发育性变化;不同猪种同一肠段PepT1 mRNA的表达蓝塘猪十二指肠在7和90 d、空肠在7和60 d及回肠在30 d时分别显著高于长白猪（P <0.05）。结果说明猪肠道PepT1 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的调控。     

断奶前后仔猪小肠Proglucagon mRNA的时空特异性表达

摘要：目的：胰高血糖素样肽-2（GLP-2）与小肠上皮生长关系密切。研究断奶前后仔猪十二指肠、空肠和回肠GLP-2 mRNA 表达丰度的变化规律，探讨断奶前后仔猪小肠上皮更新缓慢，是否与编码GLP-2的基因 — 胰高血糖素原（Proglucagon）的时空特异性表达有关。方法：本实验随机选取新生仔猪9窝，于35日龄（d）断奶。分别于断奶前1周（28d）、断奶当天（35d）、断奶后72h（38d）、断奶后1周（42d）、断奶后10天（45d）随机选取仔猪6头，屠宰，迅速采取十二指肠、空肠（后段）和回肠粘膜，用RT-PCR检测样品中胰高血糖素原 mRNA表达量。结果：胰高血糖素原基因在小肠中的表达呈现明显的空间（肠段）特异性，空肠和回肠表达丰度较高，而在十二指肠表达很少。胰高血糖素原 mRNA在仔猪空肠和回肠的表达显示截然不同的时间（日龄）特异性模式：空肠胰高血糖素原 mRNA表达在42日龄之前保持较高水平，而在断奶后1周和断奶后10天显著下降；而回肠中胰高血糖素原 mRNA表达水平在本实验观察期内保持稳定，未检测到日龄相关的变化。结论：断奶仔猪小肠GLP-2 mRNA表达呈现时空特异性规律。     

仔猪多胺代谢相关基因的克隆及断奶对其mRNA表达的影响

多胺是一类广泛分布于组织细胞内的天然低分子多价生物活性物质,在动物的消化、营养代谢以及正常生长中发挥重要作用。本实验克隆了猪(Susscrofa)的7个与多胺代谢相关的基因,分别是精氨酸脱羧酶(ADC)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鸟氨酸转氨酶(OAT)、鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白1~3(OAZ1、OAZ2、OAZ3)及多按调控因子-1(PMF1),基因片段长度分别是1602(GenBank No.EU545649)、1422(GenBank No.EU534186)、1465(GenBank No.EU404089)、874(GenBank No.EU545195)、678(GenBank No.EU545196)、667(GenBank No.EU545197)及703bp(GenBankNo.EU534185),开放阅读框的长度分别是1380、1383、1313、681、568、559和615bp,编码的氨基酸数目分别是460、461、439、227、189、186和205。经过比对分析,猪ADC基因编码的氨基酸序列与人、小鼠的同源性分别为89.7%和87%;猪ODC与人(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)和大鼠(Rattus norvegicus)的同源性分别为93.1%、89.8%和90.5%;猪OAT与人、小鼠的同源性分别为91.8%、90.5%和89.8%;猪OAZ1与人、大鼠及小鼠的同源性分别为93.4%、82.5%和83.8%;猪OAZ2与人、大鼠及小鼠的同源性分别为99.5%、98.9%和98.9%;猪OAZ3与人、小鼠和大鼠的同源性分别为90.4%、87.5%和84.2%;猪PMF1基因编码的氨基酸序列与人和小鼠的同源性为84%和70.9%。半定量RT-PCR分析表明,断乳后ADCmRNA的表达量在盲肠和直肠有所增加,其他各组织均有所降低;ODCmRNA的表达量在直肠和盲肠有较大增加,结肠、回肠和空肠的表达量均呈小幅降低;OATmRNA在肾的表达量有明显增加,十二指肠、空肠和回肠都有降低;除了胃,OAZ1mRNA在其他组织表达水平均有所增加;OAZ2mRNA的表达量在所有组织均有不同程度增加,盲肠居首;OAZ3mRNA在肠道组织的表达量均有不同程度增加;PMF1mRNA的表达量在结肠、空肠和回肠与抗酶家族相似,但断乳后有小幅降低。研究结果提示,多胺对仔猪的生长、发育、成熟、适应性和损伤后的恢复具有重要的生物学作用。     

断奶及日龄对仔猪骨髓组织抗菌肽PR-39 基因表达的影响

分别于出生当天、3、14、23、28 日龄随机屠宰杜长大公猪4头，采集骨股骨髓组织。用RT-PCR方法，以18S rRNA作内标，定量分析不同日龄仔猪骨髓组织抗菌肽PR-39 mRNA表达的差异及断奶对其表达的影响。结果表明：不同日龄仔猪骨髓组织PR-39 mRNA 相对丰度有明显的差异(P < 0.05)。出生时较低，吮吸初乳2天后显著增加(P < 0.05)，14日龄时较3日龄显著下降(P < 0.05)，随后随日龄的增加，其表达量呈上升趋势；断奶导致其显著下降(P < 0.05)。     

应用地高辛标记探针原位杂交方法检测仔猪小肠FcRn的表达

摘 要：【研究目的】旨在建立检测仔猪小肠FcRn表达的地高辛标记探针原位杂交的方法,研究FcRn在仔猪小肠各段的表达分布。【方法】根据GenBank公布的猪FcRn 重链（α链）mRNA基因保守序列设计并合成带地高辛标记的原位杂交试验用cDNA探针。经仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度选择,以及H2O2溶液祛除小肠组织中内源性辣根过氧化物酶作用对杂交结果的影响,选择合适的固定剂、细胞膜蛋白消化剂、杂交液和确定杂交反应的温度、时间以及杂交后处理等一系列试验条件优化,建立了检测仔猪小肠FcRn mRNA的原位杂交方法。【结果】①仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度为14 μm;②仔猪小肠内存在内源性辣根过氧化物酶,3％的H2O2溶液祛除该酶的效果良好,但在本研究中内源性辣根过氧化物酶的存在试验结果并无明显影响,无需祛除;③在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织的小肠腺和粘膜下层等部位存在棕黄色阳性颗粒,均检测到清晰的杂交信号。【结论】应用地高辛标记探针进行仔猪小肠FcRn mRNA的原位杂交方法检测效果良好;FcRn mRNA在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织等营养物质吸收部位均有表达,提示FcRn在这些部位的存在与肠道IgG转运的相关性。     

朗德鹅肝脏、脂肪组织LXRα基因表达水平的比较研究

本文采用荧光定量PCR技术检测了填饲、未填饲朗德鹅肝脏、腹脂、皮下脂肪组织和肌肉LXRα基因mRNA的表达水平，并与谷丙转氨酶等6种血清生化指标进行了相关性分析，结果发现：填饲组肝脏、腹脂组织LXRα基因mRNA表达水平显著高于对照组（P<0.05），高肝组皮下脂肪组织LXRα基因mRNA表达水平显著高于对照组、低肝组（P<0.05）；肝脏组织LXRα基因mRNA表达水平与肝重/体重比呈显著正相关（P<0.05），相关系数为0.58，皮下脂肪组织LXRα基因mRNA表达水平与肝重/体重比呈极显著正相关（P<0.01），相关系数为0.77；肝脏LXRα基因mRNA表达水平与血清中甘油三酯、胆碱脂酶含量呈极显著正相关（P<0.01），相关系数分别是0.66和0.70。     

in Gastrointestinal Tracts of Chicken

以30 d Arbor Acre (AA)肉鸡为模型，采集胃肠道样品，采用相对定量RT-PCR方法研究了生长抑素(SS ) mRNA在鸡胃肠道分布的组织特异性。结果表明，腺胃SS mRNA的表达量高于所有肠段，差异极显著 (P＜0.01)；十二指肠和空肠SS mRNA的表达丰度相似，二者均显著高于回肠(P＜0.05)。定性研究显示，肌胃和结直肠均有SS mRNA表达，但其表达量显著低于腺胃、十二指肠、空肠和回肠。SS mRNA在主要的消化(腺胃)、吸收(十二指肠和空肠前段)器官的高丰度表达，提示SS对营养物质的消化吸收具有重要的调控作用。     

绍兴鸭热休克蛋白90基因(HSP90)cDNA克隆与组织表达分析

热休克蛋白(HSP)与生物机体的耐热性能相关。为研究不同热应激模式下与热应激恢复过程绍兴鸭热休克蛋白90基因(HSP90)mRNA在不同组织中表达差异,阐明HSP90基因的热应激保护的分子机理。本研究采用RT-PCR方法从绍兴鸭(Anas platyrhynchos)肝脏组织中克隆HSP90 cDNA序列(GenBank登陆号:JQ837244),编码区序列长度为2211bp,编码736个氨基酸;氨基酸序列比对结果显示,绍兴鸭与家禽(北京鸭、火鸡、鸡、日本鹌鹑)和哺乳动物(大猩猩、人、牛、灰狼等)的基因序列分别有92.6%～99%和80%～88%的同源性;荧光定量PCR结果发现,30℃长期应激能显著提高绍兴鸭垂体中HSP90 mRNA表达量;35℃长期应激能显著提高心脏、肝脏与垂体中HSP90 mRNA表达水平;40℃急性热应激时,心脏、肝脏、肾脏、垂体和胰腺中的HSP90 mRNA表达量达到最高值。恢复性实验表明,热应激恢复1h肝脏和心脏中HSP90 mRNA表达水平最高,均于3h降低到应激前水平。心脏、肝脏与垂体中HSP90 mRNA表达水平与热应激强度显著相关。本研究为以HSP90 mRNA表达水平为衡量指标进行绍兴鸭热应激预防与控制提供资料。     

鸡胃肠道生长抑素(SS)mRNA表达的组织特异性

以30dArborAcre(AA)肉鸡为模型,采集胃肠道样品,采用相对定量RT-PCR方法研究了生长抑素(SS)mRNA在鸡胃肠道分布的组织特异性。结果表明,腺胃SSmRNA的表达量高于所有肠段,差异极显著(P<0.01);十二指肠和空肠SSmRNA的表达丰度相似,二者均显著高于回肠(P<0.05)。定性研究显示,肌胃和结直肠均有SSmRNA表达,但其表达量显著低于腺胃、十二指肠、空肠和回肠。SSmRNA在主要的消化(腺胃)、吸收(十二指肠和空肠前段)器官的高丰度表达,提示SS对营养物质的消化吸收具有重要的调控作用。异性     

日粮淀粉来源对断奶仔猪内脏器官蛋白质合成率的影响

应用稳定同位素L2-H5苯丙氨酸一次性大剂量(1.5mmol/kg)腹腔注射法,研究了日粮淀粉来源对断奶仔猪内脏器官蛋白质合成率的影响。结果表明,玉米淀粉促进了仔猪内脏器官蛋白质的合成,其蛋白质合成率高于糙米淀粉(P>0.05)和糯米淀粉(P<0.05)。其中十二指肠、空肠、回肠、结肠、胰脏和肝脏的蛋白质合成率分别比糯米的高85.87%、47.47%、37.29%、56.29%、43.55%和17.63%。     

Fate of anthocyanins and antioxidant capacity in contents of the gastrointestinal tract of weanling pigs following black raspberry consumption

Many fruits are rich in anthocyanins (ACNs). ACNs have high antioxidant capacity, but because of their apparent low bioavailability, their possible roles in health promotion in vivo are still in question. The objectives of these studies were to determine the fate of ACNs within the gastrointestinal (GI) tract and the effect on the bioavailability and subsequent metabolism of ACNs. Five weanling pigs were fed freeze-dried black raspberry (Rubus occidentalis L.) powder by oral administration, which provided 1146.1 +/- 44.6 micromol TE of oxygen radical absorbance capacity with fluorescein as a fluorescent probe (ORAC(FL)) per kg and 50.5 +/- 3.7 mg per kg total ACNs. After 4 h, the pigs were sacrificed and the contents of five GI segments (duodenum, jejunum, ileum, cecum, and colon) were collected and analyzed for their total antioxidant capacity (TAC, measured as ORAC(FL)) and ACNs. The recoveries of TAC and total ACNs were 46.5 +/- 3.5 and 41.7 +/- 4.9%, respectively. Both total ACNs and TAC were recovered primarily in the ileum, cecum, and colon at 4 h after a meal. Cyanidin aglycone with different sugar moieties showed significant differences in their recovery within the GI tract with sambubiose > sambubiose-rhamnose = rutinose > glucose. Recovery of ACNs within the GI tract was positively and linearly associated with urinary ACN recovery, which suggests that stability within the GI tract and not decreased absorption accounts for the increased recovery. The environment of different segments of the GI tract may determine the stability of individual ACNs. Complex ACNs containing di- or triglycosides disappeared more slowly in the GI tract than simple ACNs such as a monoglycoside. TAC and total ACNs remained high 4 h after feeding, which indicates that ACNs provide significant antioxidant protection in the environment of the gut epithelium.     

免疫应激对肉鸡肠道微生物区系的影响

微生物区系的平衡是确保肠道健康的重点,本研究对不同免疫状态下肉仔鸡消化道内微生物变化规律进行了研究。选用 180 只 AA 肉公鸡随机分 4 个处理,每个处理 5 个重复,每个重复 9 只肉公鸡。实验分为无免疫组、常规免疫组、免疫亢进和免疫抑制 4 个处理组。于 21、28、35 和 42 日龄肠段的内容物,提取总 DNA,并以此为模板获得反映肠道微生物群落结构特征的肠杆菌基因间重复序列 -PCR(ERIC-PCR)指纹图谱,比较各 DNA 样品指纹图谱的相似性指数。ERIC-PCR 扩增产物大部分为 200～2 000 bp 的基因片段,聚类分析显示,各日龄阶段,处理组间十二指肠细菌种群结构的相似性最高(75%),其次是盲肠(40%),回肠(39%)和空肠(38%)的相似性较低。图谱的条带数目为十二指肠>回肠>盲肠>空肠。28 和 35日龄,十二指肠和空肠脂多糖(LPS)组条带都低于 21 日龄,而回肠和盲肠的未见显著变化。21 日龄,回肠环磷酰胺(CYP)组的条带低于其他处理组。不同免疫状态影响回肠、空肠和盲肠道微生物区系,42 日龄,不同免疫状态对微生物数量和种群的影响不明显。     

半定量RT-PCR法评定鸡小肠肽转运载体PepT1基因的表达

摘要：根据鸡肽转运载体cPepT1 mRNA和看家基因β-actin mRNA序列，分别设计cPepT1和β-actin 引物各1对，并通过Mg2+浓度、循环数等PCR条件的优化，建立了包括RNA提取、反转录、PCR的鸡小肠cPepT1基因表达检测方法。采用该方法研究了肉仔鸡cPepT1基因在小肠各段的表达差异。结果显示，肉仔鸡小肠cPepT1表达水平表现为随小肠近端到远端显著降低的趋势，回肠表达水平显著低于十二指肠和空肠，十二指肠和空肠差异不显著。