柑桔体细胞杂种的抗性研究

以４个柑桔体细胞杂种哈姆林甜橙＋飞龙炽（ＣｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｈａｍｌｉｎ＋ＰｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａＲａｆ．ｃｖ．ＦｌｙｉｎｇＤｒａｇｏｎ）、哈姆林甜橙＋粗柠檬（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｈａｍｌｉｎ＋Ｃ．ｊａｍｈｉｒｉＬ．）、伏今夏橙＋宁波金柑（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｏｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ十ＦｏｒｔｕｎｅｌｌａｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａＳｗｉｎｇｌｅｃｖ．Ｍｅｉｗａ）、伏令夏橙＋宜昌橙（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ＋Ｃ．ｉｃｈａｎｇｅｎｓｉｓＳｗｉｎｇｌｅ）及其融合亲本为试材，对其抗寒性、耐热性和抗脚腐病性能进行了研究，并从叶片膜脂脂肪酸成分分析了体细胞杂种的抗寒性和耐热性。研究结果表明，哈姆林甜橙＋飞龙枳杂种表现抗脚腐病、抗寒（－１４℃）、耐热（５２℃）、矮化、半落叶、扦插易生根，是极有希望的新砧木类型；伏令夏橙＋宜昌橙杂种表现抗寒（－１２℃）；哈姆林甜橙＋粗柠檬杂种表现耐热（５３℃）。４个体细胞杂种的抗性较之抗性弱的亲本一方都有提高。     

柑桔体细胞杂种的花粉育性及其遗传稳定性

对原生质体融合产生的５个已开花的体细胞杂种的花粉育性观察表明，它们的花粉染色活力在０－９０．１８％之间。其中４个体细胞杂种的花粉育性介于双亲之间，偏向高值亲本；种间异源四倍体体细胞杂种产生７．１８％－１８．５９％的小花粉，这类花粉只有正常花粉粒的１／３左右大小、内空。脐橙与红桔的体细胞杂种不产生花粉。墨西哥来檬与伏令夏橙的体细胞杂种花粉育性稳定，年份间无显著差异；粗柠檬与哈姆林甜橙的体细胞杂种无性繁殖后代之间，花粉育性无显著差异。     

柑桔体细胞杂种的花粉育性及其遗传稳定性

对原生质体融合产生的５个已开花的体细胞杂种的花粉育性观察表明，它们的花粉染色活力在０－９０．１８％之间，其中４个体细胞杂种的花粉育性介于双亲之间，偏向亲值亲本，种间异源四倍体体细胞杂种产生７．１８％￣１８．５９％的小花粉，这类花粉只有正常花粉粒的１／３左右大小、内空，脐橙与结桔的体细胞杂种不产生花粉，墨西哥来檬与伏令夏橙的体细胞杂种花粉育性稳定，年份间无显著差异，粗柠檬与哈姆林甜橙的体细胞杂种无性     

培养三倍体柑桔植株的研究

以柑桔异源四倍体体细胞杂种（哈姆林甜橙（ＣｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂｅｃｋｃｖ．Ｈａｍｌｉｎｓｗｅｅｔｏｒａｎｇｅ）＋粗柠檬（Ｃ．ｊａｍｂｈｉｒｉＬｕｓｈｃｖ．Ｒｏｕｇｈｌｅｍｏｎ）为父本与单胚的二倍体柑桔类型（宜昌橙（Ｃ．ｉｃｈａｎｇｅｎｓｉｓＳｗｉｎｇｌｅ）与华农本地早（Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａＢｌａｎｃｏｃｖ．Ｈｕａｎｏｎｇｂｅｎｄｉａｚｏ）的杂交后代）杂交。通过幼胚早期离体培养,获得     

柑桔体细胞杂种植物学性状,生长特性及其扦插繁殖研究

采用宜昌橙和伏令夏橙,金柑和伏令夏橙,哈姆林和粗柠檬融合的３个体细胞杂种,进行高接和扦插繁殖,并以尊或枳作比较,试验结果表明：体细胞杂种之间的生长量存在显著差异,并均受亲本影响;杂种的叶子植物学性状,与亲本相比,叶形指数变小;杂种的刺生长并与不两亲本均成正相关;杂种扦插成活率偏向高值亲本,其中两个杂种具有与枳扦插应用一样的潜力。     

柑桔体细胞杂种植物学性状、生长特性及其扦插繁殖研究

采用宜昌橙和伏令夏橙、金柑和伏令夏橙、哈姆林和粗柠檬融合的3个体细胞杂种,进行高接和扦插繁殖,并以亲本或枳作比较。试验结果表明：体细胞杂种之间的生长量存在显著差异,并均受亲本影响;杂种的叶子植物学性状,与亲本相比,叶形指数变小;杂种的刺生长并不与两亲本均值成正相关;杂种扦插成活率偏向高值亲本,其中两个杂种具有与枳扦插应用一样的潜力。即使两亲本的扦插成活率均为0,而杂种仍有部分扦插成活。     

培养三倍体柑桔植株的研究

以柑桔异源四倍体体细胞杂种[哈姆林甜橙（CitrussinensisOsbeckcv．Hamlinsweetorange）＋粗柠檬（C．jambhiriLush　cv．Rough　lemon）]为父本与单胚的二倍体柑桔类型[宜昌橙（C．ichangensisSwingle）与华农本地早（C.reticulataBlancocv．Huanongbendizao）的杂交后代]杂交,通过幼胚早期离体培养,获得了113株再生植株,其中89％为三倍体,并初步筛选出了适宜的幼胚离体培养时间为授粉后80d。     

柑桔RAPD技术体系建立与体细胞杂种鉴定

通过优化反应条件,建立起柑桔ＲＡＰＤ分析技术体系,并成功地应用于体细胞杂种鉴定。柑桔ＲＡＰＤ以Ｍｇ２＋为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、〔ｄＮＴＰｓ〕为１００μｍｏｌ／Ｌ时扩增稳定,效果良好。用１６个引物扩增〔哈姆林甜橙（＋）粗柠檬〕融合植株,体细胞杂种表现为双亲谱带之和。结合染色体计数,可将〔Ｐａｇｅ桔柚（＋）粗柠檬〕融合再生的体细胞杂种（异源四倍体）、叶肉亲本类型及同源融合植株区别开来。     

ABT1号生根粉处理瑞必尔葡萄硬枝育苗技术

葡萄优良品种瑞必尔正在生产中大面积推广，该品种硬枝扦插生根较难，我们于１９９７年开始摸索扦插技术，发现ＡＢＴＩ号生根粉处理效果较好，苗木成活率９５％，当年苗高 ９０ ｃｍ以上，基茎粗 １ｃｍ，饱满芽 ６～７个。具体做法是： （１）插条预处理硬核处理前将冬季修剪的茎粗１． ０ ｃｍ，充分成熟、无病虫伤害 １年生硬枝剪为长 ２０ ｃｍ，有２～３个饱满芽的茎段，茎段上剪口距顶部芽１· ５ ｃｍ，剪成平口，下剪口为马耳形或马蹄形，之后每５０根或１００根捆成１捆，并浸入水中浸泡１２～２４ 小时。 （２） ＡＢＴ１号生根…     

柑橘种间体细胞杂种植株遗传变异研究

对6年生哈姆体甜橙 粗柠檬和4年生伏令夏橙 宜昌橙种间体细胞杂种遗传变异进行了研究。体细胞杂种气孔较大，密度较小，染色体数为四倍体（2n=4x=36)。POX、PPO、GOT和SOD4种同工酶图谱上，体细胞杂种为双亲酶带之和，RAPD分析显示，体细胞杂种含有双亲的谱带，同一融合组合不同单株在叶形指数、气孔特征、染色体数目，同工酶和RAPD图谱上表现一致。     

3种柑橘实生砧木及其2种体细胞杂种根系解剖结构的比较

采用石蜡切片法和组织离析法分别对3种柑橘实生砧木和2种体细胞杂种的根系木质部和导管分子的解剖构造进行了比较。结果表明：（1）粗柠檬、红橘和枳3种实生砧木根系的木质部和韧皮部呈同心圆环状排列,而‘红橘+枳’和‘红橘+粗柠檬’两种体细胞杂种木质部和韧皮部呈“海星状”排列,结构异常。（2）导管所占的面积和密度,均以生长势较强的粗柠檬为大,以生长势较弱的枳为小;体细胞杂种没有明显规律。（3）柑橘导管分子属于孔纹导管,穿孔板均为单穿孔,大多分布于端壁上;导管分子两端具尾、倾斜、侧壁穿孔等性状的有无及其比例,反映出生长势的差异及其输导能力的强弱。（4）粗柠檬具有较好输导能力的导管分子结构,而枳较差;体细胞杂种根系的导管分子长度和直径都大于其亲本,在导管分子性状上,向不利于输导能力的较原始性状偏移。     

柑橘种间六倍体体细胞杂种开花及其花粉育性

 二倍体锦橙+种间四倍体体细胞杂种HR (哈姆林甜橙+ 粗柠檬) 的种间六倍体体细胞杂种植株移入温室7年后(即2004年) , 有1株六倍体首次开花, 花粉染色活力40.8% , 花粉萌发率3.7%;2006年该植株再次开花, 花粉染色活力为20.3%。由于自然界中没有柑橘六倍体, 本研究是人工的方法创造出可育的柑橘六倍体体细胞杂种植株的首例报道。     

柑桔原生质体融合再生出叶肉亲本类型植株

粗柠檬(Citrus jambhiri Lush)叶肉原生质体与哈姆林甜橙(C.sinensis Osbeck)悬浮细胞系原生质经聚乙二醇(PEG)诱导融合、再生的植株中,除体细胞杂种外,发现两棵为二倍体,与其亲本一样,2n=2x=18。这两棵植株叶片形态似粗柠檬。GOT、SOD及POX 3种同工酶分析结果显示,其酶带与粗柠檬基本相同,但个别带纹有差异。本文就这类植株的来源问题作了讨论。     

脐橙与粗柠檬体细胞杂种果实类胡萝卜素、糖酸遗传的亲本偏向性

 采用高效液相色谱测定柑橘种间体细胞杂种[‘朋娜’脐橙（Citrus sinensis Osbeck）+ 粗柠檬（C. jambhiri Lush）]和其两个融合亲本果实的类胡萝卜素含量，气相色谱测定可溶性糖及有机酸含量，并检测代谢过程中关键基因的表达，比较分析体细胞杂种果实品质遗传及基因表达特点。结果表明，体细胞杂种类胡萝卜素成分及含量均偏向粗柠檬亲本，柠檬酸、苹果酸积累量也偏向粗柠檬；而蔗糖含量处在中亲值；实时定量PCR 技术检测类胡萝卜素代谢途径中的7 个基因，其中4 个基因在‘朋娜’脐橙中的表达量高于粗柠檬，环化途径中番茄红素ε 环化酶基因（CitLcy-e）、玉米黄质环氧酶基因（CitZep）在体细胞杂种中表达量偏向粗柠檬亲本，显著低于‘朋娜’脐橙。可见粗柠檬遗传物质的表达在体细胞杂种中占主导地位。     

柑桔同源及异源四倍体花粉育性研究

对８个柑桔同源四倍体及通过原生质体融合得到的２个异源四倍体的花粉育性和花粉粒大小进行了测定。结果显示，同源四倍体柑桔花粉育性平均为３６％，约为二倍体（６２％）的６０％。‘伏今夏’甜橙由于是异质结合的染色体易位突变体，其同源四倍体花粉育性比二倍体（２３％）高出５０％。权（Ｐｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ）与甜橙（Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）属间以及来檬（Ｃ．ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）与甜橙种间四倍体体细胞杂种花粉育性介于其双亲之间，花粉育性分别为各自高值亲本的９９％和７５％。同源及异源四倍体花粉粒体积平均为二倍体的２倍或双亲之和。本结果说明，柑桔体细胞杂种可作为杂交亲本进一步被利用。     

不同柑橘砧木对锦橙果实品质的影响

 2006—2008年连续3年研究11种砧木对铜水72-1锦橙果实品质的影响。结果表明：不同砧木对果实颜色和内在品质均有影响,其中以卡里佐枳橙为砧的果实亮度最好,黄色度值最高,果实最大,果皮最薄;以路比枳为砧的果实红色度值和固酸比（TSS/TA）最高,果皮最厚;以沃尔卡姆为砧的亮度最差,黄色度值、单果质量和可食率最低,中心柱最小;以C35枳橙为砧的中心柱最大且维生素C含量最低;以光皮酸橙为砧的果实红色度最低而可食率最高;以里其16-6枳为砧的果实可溶性固形物（TSS）含量最高;以孙楚沙橘为砧的果实可滴定酸（TA）和维生素C含量最高,而TSS/TA最低;果实TSS和TA最低的砧木为枸头橙。品质综合评价,性状表现较好的为孙楚沙橘、卡里佐枳橙和C35枳橙,而表现较差的为兰普莱檬和沃尔卡姆柠檬。     

Evaluation of citrus somatic hybrids for tolerance to Phytophthora nicotianae and citrus tristeza virus

Somatic hybridization is a biotechnology tool that can be used in citrus breeding programs to produce somatic hybrids with the complete genetic combination of both parents. The goal of this work was to test the reaction of citrus somatic hybrids that may be useful as rootstocks to trunk and root infections caused by Phytophthora nicotianae van Breda de Haan (P. parasitica Dastur) and to citrus tristeza virus (CTV). The somatic hybrids evaluated were ‘Caipira’ sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) + ‘Rangpur’ lime (C. limonia Osbeck), ‘Caipira’ sweet orange + ‘Cleopatra’ mandarin (C. reshni hort. ex Tanaka), ‘Caipira’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon (C. volkameriana V. Ten. & Pasq.), ‘Caipira’ sweet orange + rough lemon (C. jambhiri Lush.), ‘Cleopatra’ mandarin + ‘Volkamer’ lemon, ‘Cleopatra’ mandarin + sour orange (C. aurantium L.), ‘Rangpur’ lime + ‘Sunki’ mandarin (C. sunki (Hayata) hort. ex Tanaka), ‘Ruby Blood’ sweet orange (C. sinensis L. Osbeck) + ‘Volkamer’ lemon, ‘Rohde Red’ sweet orange (C. sinensis L. Osbeck) + ‘Volkamer’ lemon, and ‘Valencia’ sweet orange + Fortunella obovata hort. ex Tanaka. For P. nicotianae trunk and root infection assays, plants of the somatic hybrids, obtained from 9-month semi-hardwood cuttings, were evaluated and compared with diploid citrus rootstock cultivars after mycelia inoculation in the trunk or spore infestation in the substrate, respectively. ‘Cleopatra’ mandarin + sour orange, ‘Rangpur’ lime + ‘Sunki’ mandarin, ‘Cleopatra’ mandarin + ‘Volkamer’ lemon, ‘Ruby Blood’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon, ‘Rohde Red’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon, and ‘Caipira’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon had less trunk rot occurrence, whereas the somatic hybrids ‘Cleopatra’ mandarin + ‘Volkamer’ lemon, ‘Cleopatra’ mandarin + sour orange, ‘Caipira’ sweet orange + ‘Volkamer’ lemon, and ‘Caipira’ sweet orange + ‘Rangpur’ lime were tolerant to root rot. For CTV assays, plants of the somatic hybrids along with tolerant and intolerant rootstocks were budded with a mild strain CTV-infected or healthy ‘Valencia’ sweet orange budwood. Differences in average scion shoot length indicated that the hybrids ‘Cleopatra’ mandarin + sour orange and ‘Valencia’ sweet orange + Fortunella obovata were intolerant to CTV.     

澳洲指橘与粗柠檬体细胞杂种倍性FCM分析及其花粉活力检测

利用流式细胞仪对5株澳洲指橘(Microcitrus papuana Swingle,2n=2x=18)与粗柠檬(Citrus jambhiri Osbeck,2n=2x=18)属间体细胞杂种进行倍性分析,以已知倍性的二倍体粗柠檬植株的峰对应荧光值(FL)50作为对照,5棵再生植株的FL值分别为51、51、47、52、48,表明这些体细胞杂种植株均为二倍体。同时,实验结果还表明,HR(HighResolution)试剂盒中的核提取液HR-A和染色液HR-B的最佳处理时间分别是5min和2min。体细胞杂种于2002年3月首次开花,对其花粉活力进行分析,结果表明体细胞杂种的花粉活力为50％～90％。