油松雌性不育系(28号无性系)的RAPD分析

辽宁兴城油松种子园中的 2 8号无性系是雌性不育变异体 .为了探索不育原因 ,揭示与育性相关的分子机制 ,该实验运用RAPD技术对 2 8号雌性不育系及部分可育系进行分析 ,目的在于寻找与 2 8号不育系遗传背景最相近的可育系 ,为进一步研究提供选材依据 .实验结果表明 ,5 9个 10碱基的随机引物共扩增出 2 36个条带 ,其中具有多态性的条带有 4 2个 ,占 17 8% ,证明供试油松无性系间遗传变异性较小 .用NTSYS2 0软件包进行结果分析 ,发现可育系中15号无性系与 2 8号不育系遗传距离较近 ,此组材料可用作研究油松雌性不育分子机制的对比材料 .用S37号引物从2 8号雌性不育系基因组扩增出一条分子量为 75 0bp的特异DNA片段 .     

利用RAPD技术对油松种子园无性系的分析

以陕西陇县八渡油松种子园的14个无性系为材料,提取基因组DNA,采用RAPD技术,分析无性系间的亲缘关系,结果表明:筛选出的8个引物共扩增出23个条带,其中具有多态性的条带14条,占总扩增条带数的60.8%。进一步采用UPGMA法进行亲缘关系及多样性分析,在遗传相似系数为0.71时,14个无性系聚为4类。14个无性系间亲缘关系较远,种子园具有较高的遗传多样性。     

油松雌性不育性与胚珠发育过程中物质代谢关系的初探

该文在不育系雌配子体休眠解除期(Ⅰ)、游离核停止分裂期(Ⅱ)、败育期(Ⅲ)时,取油松可育系和不育系胚珠、珠鳞及由胚珠诱导的悬浮细胞为材料,比较了它们在重量(w)、可溶性糖(ss)、游离氨基酸(aa)和可溶性蛋白质(sp)含量上的变化.结果表明:不育系连体胚珠在Ⅰ期,ss、aa和sp低于可育系;Ⅱ期,ss、aa高于可育系,sp低于可育系;到Ⅲ期,只有aa高于可育系.不育系连体胚珠在3个发育时期,w和aa呈上升趋势,ss和 sp分别呈下降趋势.而可育系连体胚珠的鲜重(fw)、sp呈上升趋势,ss、aa呈下降趋势.在相同营养物质和植物激素条件下,相应连体胚珠发育时期离体培养的两系胚珠和悬浮细胞在fw、ss、aa、sp含量的变化上呈现与可育系连体胚珠相似的趋势,但不育系的fw、sp均高于可育系,ss、aa均低于可育系.不同育性和3个发育时期的连体及离体胚珠的fw、ss、aa、sp差异极显著,不同育性悬浮培养细胞的ss、aa、sp差异极显著.珠鳞的发育与胚珠的发育表现出相关性.我们认为,不育系胚珠内营养物质和植物激素在含量上的不足或配比上的不协调,使胚珠在 ss、aa和sp代谢上出现紊乱,可能导致了不育系胚珠的败育.      

植物雌性不育的研究进展

植物的雌性不育通常是由雌性器官的发育异常造成的 ,包括胚珠、胚囊、卵细胞的发育异常 .该文在参阅了相关文献资料的基础上 ,结合该实验室在文冠果雌性不育方面所做的初步研究工作 ,从形态解剖、组织切片及生理生化等方面总结了雌性不育的表现形式 ,从基因特征、生长调节物质及环境因素等方面总结了引起雌性不育的可能原因 ,还对克服雌性不育的途径等进行了综述 .提出从寻找与育性相关蛋白入手 ,通过测序合成探针 ,在已建立的cDNA文库中进行差示筛选 ,克隆相关基因 ,并对基因的结构和功能进行分析 ,有可能在分子水平上阐明雌性不育机理     

果树雌性不育机理研究进展

深入研究果树雌性不育机理,对于果树生产和育种具有十分重要的应用价值。从细胞生物学、分子生物学角度综述了近年来国内外关于果树雌性不育的表现形式、产生原因等,并阐述了果树雌性不育的利用和克服途径。     

7个水稻光温敏核不育系品种(系)的RAPD多态性分析

利用RAPD技术，从60个随机引物(10bp)中落选出了31个引物，能在供试的7个水稻光温敏核不育系不同品种(系)间扩增出180条稳定性较好的多态性片段．聚类分析结果显示，7个水稻光温敏核不育系品种(系)明量地聚为三类，其中同属于株1S体细胞诱变来的SV5，SVl0发生了较大的变异，相似系数均小于0．470，而SVl和SVl4变异较小，相似系数均大于0．890．H155与杂交亲本培矮64S的遗传差异较小，与杂交亲本株1S的遗传差异较大．该结果与田间农艺性状相符：另外，从7个水稻光温敏核不育系品种(系)的整体来看，相似系数均较大，说明遗传差异较小，遗传背景单一，从而在很大程度上限制了水稻杂种化势的利用．     

陕西地区油松天然群体遗传结构的RAPD分析

利用RAPD技术分析了陕西5个地区油松(Pinus tabulaeformis)天然种群100个个体的遗传多样性和遗传结构,10条10 bp的随机引物共扩增出73个位点.其中,多态性位点64个,多态位点百分率为87.67%.采用类平均法对100株油松材料进行聚类分析,结果表明其遗传相似系数为0.08～0.66.在遗传距离为0.39的水平上,聚类分析为3大类,表明陕西地区天然油松种群间产生一定程度的变异,在分子水平上呈现出遗传多态性,且大部分遗传变异存在于种群内.     

航天诱变水稻雌性半不育突变体rs(s)的变异特性分析

【目的】揭示航天诱变水稻雌性半不育的变异特性。【方法】以常规籼型水稻‘秋B’(野生型)航天搭载诱变获得的雌性半不育突变体rs(s)为研究对象,对其开展形态学、细胞学、生理学和遗传学研究。调查突变体与野生型及其正反交F₁、F₂群体结实率,对亲本的花粉和胚囊育性进行细胞学观察,测定突变体与野生型幼穗生长素(IAA)、细胞分裂素(TZR)、脱落酸(ABA)和赤霉素(GA₃)的含量变化。【结果】突变体rs(s)雄蕊发育正常但雌性半不育,该性状受隐性单基因调控;发育过程中子房干瘪瘦小,柱头伸长不明显,雌蕊在胚囊发育的有丝分裂阶段发生异常,导致胚囊败育;IAA含量在突变体幼穗分化第6阶段急剧增加。【结论】突变体rs(s)是一个新的雌性半不育突变体,在有丝分裂阶段生长素含量急剧增加,可能抑制了雌蕊的生长发育,导致雌蕊发育畸形、雌性半不育。     

小麦雌性不育基因的SSR多态性标记

以普通小麦新601×雌性不育小麦XND126的F2群体作为育性调查以及基因标记群体。通过对育性基因的分析,确定在此组合中雌性不育基因表现为1对主效基因控制;结合混合分组分析法(Bulk Segregant Analy-sis,BSA),首次对小麦雌性不育基因进行了SSR标记研究,通过对一千对微卫星引物的筛选,初步确定了微卫星引物cfd36和gwm296与主效基因连锁。     

油松同工酶位点选择研究

为筛选出国内适于油松遗传研究的同工酶位点及其有效的电泳和染色程序，该文用水平淀粉凝胶电泳方法，分析了油松１８种同工酶系统在不同电泳缓冲系统和染色系统下的表现，研究建立了新的不连续缓冲系统，获得了良好的分析效果；从中筛选了ＧＯＴ，ＬＡＰ，ＡＣＰ，ＳＫＤ，ＭＤＨ，ＡＤＨ，ＭＮＲ，ＰＧＭ和ＣＡＴ９种酶系统，有１５个可作为遗传标记的位点，统计了各位点的等位基因数量．讨论了影响同工酶分析的主要因素     

应用Super SMART cDNA合成技术扩增油松胚珠总RNA

以油松雌性不育突变体和具有相似遗传背景可育系的胚珠为材料,用Plant RNA assistant kit试剂盒提取油松总RNA,采用Super SMART cDNA合成技术合成cDNA第l链,优化扩增第2链,通过设置梯度PCR扩增循环数,电泳分析后鉴定cDNA质量,采用定量法评估其扩增效率。可育系和不育系各1μg总RNA分别成功扩增出46.06和43.59μg纯化的双链cDNA,质量及纯度较高。此方法的应用解决了研究材料有限的问题,可由微量的胚珠总RNA扩增出足够多的高质量双链cDNA,为今后抑制性消减杂交文库的构建奠定基础。     

离体条件下油松成熟合子胚不定芽的形成

为确定油松成熟胚离体培养诱导不定芽的最适条件,以油松成熟胚为外植体材料,分别接种在TE、DCR和MS3种基本培养基上以确定最适培养基;随后按照U6*(64)均匀设计表,在TE培养基中添加不同浓度梯度的植物生长激素6-BA、NAA、KT,建立试验组合以确定最佳激素配比;基于上述实验,进一步探讨了蔗糖浓度对不定芽诱导的影响及6-BA对不定芽生长的影响。结果表明:基本培养基对于不定芽的诱导起重要作用,在TE培养基上不定芽诱导率最高,DCR次之,MS最差;运用Uniform Design Version3.00均匀设计软件,通过数据处理、回归分析及试验优化,得到激素最佳组合为:6-BA6mg/L+NAA0.1mg/L,KT对试验没有显著影响;蔗糖浓度为4.0%时不定芽诱导率最高;培养基中降低6-BA的浓度有利于不定芽的生长,在TE+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中,丛生芽平均长度最长。     

大气O_3浓度升高对城市油松光合作用的影响

为了揭示臭氧(O3)浓度升高对城市森林光合作用的影响机理,利用开顶式气室研究了高浓度O3对沈阳城内油松光合生理特性的影响。结果表明:与对照(自然O3浓度,约45 nmol/mol)相比,在O3浓度升高(80±8)nmol/mol条件下,油松针叶的叶绿素含量降低,而类胡萝卜素含量则呈现出先升高后降低的变化趋势;净光合速率和Hill反应活力明显下降,降幅分别为18.36%~45.95%和11.35%~20.84%;羧化效率降低,降幅为7.50%~26.59%;叶绿体ATP酶活性受到抑制,但Ca2+-ATP酶活性与Mg2+-ATP酶活性的变化趋势略有差异。同时O3浓度升高抑制了油松针叶可溶性糖和淀粉含量的积累,说明O3浓度升高对油松光合作用具有较强的抑制作用。     

油松SSR-PCR引物筛选及反应体系的建立

油松是我国特有的重要乡土针叶树种,开发合适的油松PCR-SSR引物并建立优化的反应体系,是开展油松天然群体和种子园人工群体遗传研究的基础.该研究以油松总DNA为材料,分析了Taq聚合酶、样本浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度以及引物浓度对PCR SSR扩增结果的影响,筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物12对,建立了稳定的、可重复的油松PCR-SSR最佳反应体系及PCR扩增参数.研究结果表明:在15 μL SSR -PCR反应体系中,样本最适宜浓度为30 ng,Mg2+的最适浓度为0.25 mmol/L,dNTP最适浓度为0.2 mmol/L,单引物的最适浓度均为250 nmol/L;Taq聚合酶在15 μL反应体系中宜加入0.375 U.统计利用所选12对引物,对辽宁兴城油松种子园内49个建园无性系进行了SSR-PCR反应,通过6%的变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测,每对引物扩增产物在100～250 bp之间的等位谱带数最大为10,最小为5,不同无性系间DNA谱带多态性丰富.油松SSR-PCR引物筛选及反应体系的建立,为今后利用SSR标记技术开展油松种子园的父本分析及选择性受精研究提供了一个标准化程序和强有力的工具.      

油松无性系雌雄配子体的形成及胚胎发育

油松雄球花于６月下旬开始分化，小孢子发生在翌年的４月２０日左右，４月底或５月初散粉．成熟的花粉粒为４个细胞．雌球花７月中旬分化，次年４月下旬或５月上旬形成大孢子母细胞，经减数分裂后，形成大孢子．雌配子体经历游离核、细胞化、颈卵器及卵细胞形成等阶段后，５月下旬受精，从传粉到受精约需１３个月．胚胎发育包括原胚、胚胎选择及发育和胚胎成熟３个阶段，历时３个半月．不同无性系在雌雄球花发端时间和大小孢子发育进程上存在较大差异，观察的５个无性系进入同一发育阶段的时间最多可相差１０ｄ，平均变幅为一周上下．该文还对新梢生长与花芽分化、胚珠和花粉败育作了讨论．     

油松针叶精油中的单萜成分

单萜是广泛存在于针叶树内的一类化合物，本文用气相色谱／付氏红光外谱（ＧＣ／ＺＸ）与气相色谱／质谱（ＧＣ／ＭＳ）相结合对我国特有树种油松中针叶的单萜成分进行分析测试，共鉴定出单萜成分１１个，其主要成分为：ａ－蒎烯、柠檬烯。     

外生菌根真菌促进油松人工幼林生长的应用研究

从不同林型下分离获得的外生菌根真菌纯培养菌株中，选择了其中劣味乳菇、赫丝膜菌、褐环乳牛肝菌、毛边滑锈伞4株优良菌处，对油松人工幼林（5年生）进行菌剂混合接种试验。结果表明：采用外生菌根真菌对油松幼林接菌，能够使土壤微生物种群数量发生变化；接菌后的土壤中的细菌、真菌、放线菌总数比不接菌的有明显的增加，其中真菌增加732.35%。对接菌油松进行菌根调查发现，接菌后的油松菌根侵染率为75％，不接菌的为20％；对连续两年接种菌剂的油松幼林调查发现，与不接菌剂的相比施用菌剂的油松地径、株高显增加。由此认为，外生菌根真菌作为一项生物接种技术对促进油松幼材的生长具有重要作用。