芥菜雄性不育系小孢子败育细胞学观察

对芥菜胞质型雄性不育系ＣＭＳＳ９０１０、ＣＭＳＪＬ４４及其保持系Ｓ９０１０、ＪＬ５５不同发育同期小孢观察表明,不育系与保持系在减数分裂期无可见差异,在单核期不育系小孢子呈现败育特征,细胞质内容物减少,花粉壁四周出现空隙,整个小孢子停止膨大。成熟花粉粒在扫描电镜下观察发现,不育系花粉粒较小、干瘪、形态不规则,畸形花粉粒７８％～８９％。说明芥菜型胞质雄性不育系小孢子败育发生在单核期。     

萝卜雄性不育小孢子发育过程物质代谢的研究

以2个秋萝卜,1个春萝卜雄性不育系及其保持系为试材,研究了不同发育时期萝卜叶片的花蕾中的淀粉、可溶性糖及游离脯氨酸含量的变化。结果表明：在苗期和花期叶片中,不育系中各物质的含量均高于保持系;而不育花蕾中各物质含量均低于可育花蕾。认为小孢子发育过程中物质亏缺是导致其败育的重要原因,而营养器官中各物质向生殖器官运输受阻可能是导致不育花蕾中物质含量下降的原因之一。     

王百合雄性不育突变体小孢子败育的细胞学研究

对王百合雄性不育突变体‘白天使’小孢子败育的过程进行了显微观察 .结果显示 :①花粉母细胞减数分裂异常 .花粉母细胞早期出现质壁分离及多核仁现象 ;减数分裂末期Ⅰ ,部分花粉母细胞畸形 ,核结构破坏 ;减数分裂过程中 70 %花粉母细胞出现了染色体结构或数量的变异 .②绒毡层行为异常 .花粉母细胞形成时期至减数分裂末期I ,绒毡层细胞液泡化 ,细胞质稀少 ;有的过度膨胀 ,彼此挤压 ,细胞粘连成团块或分隔成数块 ;单核花粉粒时期 ,绒毡层细胞质浓厚 ,细胞间间隙小 ,与中层细胞联系紧密 ,没有解体 .推测减数分裂及绒毡层行为的异常共同导致了小孢子的败育 .     

棉花雄性不育材料亚棉A的小孢子败育研究

【目的】从细胞学和生理生化两方面研究棉花雄性不育系亚棉A小孢子的败育机理。【方法】亚棉A是从亚比棉×陆地棉3种杂种中选育出来的新的细胞质雄性不育材料。运用光学、电子显微技术及生化指标测定法,对棉花不育系亚棉A及其保持系亚棉B小孢子的不同发育时期进行细胞形态学观察及生理生化特性分析。【结果】不育材料亚棉A的败育时期主要在造孢细胞期至减数分裂细线期前;在显微结构上,败育迹象起始于造孢细胞期,造孢细胞粘连,无核仁,部分已解体,未解体造孢细胞发育成的小孢子母细胞中核仁消失,在减数分裂细线期前完全解体,而绒毡层细胞延迟发育,且与中层细胞在整个花药发育过程中不降解,这些异常现象导致最终形成无花粉粒的花粉囊;在亚显微结构上,造孢细胞和小孢子母细胞中出现线粒体内嵴消失、内质网断裂等降解迹象的同时,相应绒毡层细胞中也出现了线粒体退化的异常现象。生化研究表明,不育系败育后花蕾中的过氧化物酶活性显著高于保持系,而其琥珀酸脱氢酶活性却明显低于保持系;不育系的叶片和不同发育时期花蕾中超氧化物歧化酶和细胞色素氧化酶活性均低于保持系。【结论】绒毡层细胞延迟发育可能是引起亚棉A小孢子败育的主要原因,过氧化物酶、超氧化物歧化酶、细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶活性的变化与其雄性不育相关。     

甘蓝小孢子培养中花蕾长度与细胞单核期的关系

以甘蓝杂种一代品种抽薹植株初花期的花蕾为供体材料,通过镜检观察得出,在甘蓝植株1次分枝花序上花蕾肉眼可见间隔为5d时,花粉小孢子形状呈现在不明显的三裂形与正圆形间,细胞发育正处在单核靠边时期;花蕾生长的长度为4.50～5.49mm,花粉细胞发育所处的单核靠边期的小孢子平均所占比例为76%。采用NLN-14培养基对不同发育时期的小孢子诱导培养,可见所选花蕾的小孢子多数发育处在单核靠边期,小孢子离体培养容易诱导出胚状体。     

西葫芦花蕾纵横径长度与小孢子发育关系研究

【目的】研究西葫芦小孢子发育时期与花蕾纵径长度、横径长度和纵横径比之间的关系,找到一种能够快速准确判断小孢子发育时期的方法。【方法】以“春玉2号”为试材,采集第3位次雄花花蕾,测量其纵径、横径长度,计算纵横径比,观察对应的花蕾小孢子发育时期,寻找它们之间的相关性;同时观察不同位次上雄花小孢子的发育时期,比较各位次在小孢子相同发育时期花蕾纵径和横径长度的差异性。【结果】花蕾纵径长度和横径长度在四分体时期为0.95～1.05 cm和0.48～0.52 cm,在单核早期为1.06～1.15 cm和0.53～0.55 cm,在单核中后期为1.16～1.25 cm 和0.56～0.59 cm,在双核期为1.26～1.35 cm和0.60～0.63 cm,小孢子各发育时期间花蕾纵横径长度均存在显著差异;“春玉2号”前7个位次上雄花小孢子相同发育时期的花蕾纵径长度或横径长度之间最大差值均为0.04 cm,位次间差异不显著。【结论】“春玉2号”小孢子处于单核靠边期时,小孢子细胞膜和细胞壁加厚,细胞中出现大液泡,细胞核被挤到细胞的一侧,靠近细胞壁;小孢子发育时期与花蕾纵径长度或横径长度存在相关性,植株前7个位次上任何一朵雄花花蕾的纵径长度或横径长度均可作为判断小孢子发育时期的依据。     

石竹雄性不育系小孢子形成过程的细胞学观察

 【目的】研究石竹不育系与可育系小孢子形成过程的异同。【方法】利用压片及石蜡切片等方法观察石竹雄性不育系与可育系小孢子发育过程。该不育系（H-37B）是通过在石竹自交6代的自交系中发现的1株雄性不育株与可育株经过连续杂交和2代回交获得的不育系（H-37B）。【结果】可育系小孢子发育经历了造孢细胞、小孢子母细胞、四分体等时期,最后发育成花粉。不育系败育现象在造孢细胞增殖期、小孢子母细胞减数分裂期以及四分体至单核期都有发生。石竹可育花粉外形饱满,圆形,生活力强;而不育花粉外形空瘪,不规则,无生活力。【结论】绒毡层的异常发育是导致小孢子败育的主要原因。     

大白菜小孢子培养

大白菜是我国北方地区比较常见的蔬菜,但是受到育种年限的限制其育种周期比较长,白菜是异花授粉植物,杂种优势非常明显,因此在育种过程中,单倍体育种研究十分重要。常规育种中,一个杂合基因型的大白菜育种材料往往需要5～7代连续自交才能培育出可用作杂交种亲本的系统。游离小孢子培养是一种在单细胞水平上获得双单倍体系统的方法,可在最短的时间里获得优良纯系。一个杂合基因型的大白菜育种材料往往需要4～5代连续自交才培育出可用杂交种亲本的系统,而通过游离小孢子培养只需1～2年就可以得到多种基因型的纯合体,因此,游离小孢子是创造稳定变异材料的准确方法。     

西藏地区大白菜游离小孢子培养方法

介绍大白菜游离小孢子培养方法,包括白菜种子处理及播种、白菜花蕾的处理、超净工作台和实验室的准备、小孢子提取、悬浮孢子培养等方面内容,以为西藏地区农业科研工作者研究十字花科类游离小孢子提取提供有效的技术支持,为西藏地区建立大白菜游离小孢子培养体系打下一个坚实的基础。     

大白菜小孢子胚诱导和植株再生

研究大白菜游离小孢子胚诱导主要影响因素,旨在优化培养体系,创制优异DH群体,获得纯合育种材料。以15个大白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究了基因型、培养基成分、低温预处理、取材时期对小孢子胚发生的影响。结果表明:不同试材的小孢子胚发生频率有明显差异,有13个品种诱导得到了胚状体,最高出胚率达每蕾10.16胚;NLN培养基中添加0.05～0.20mg.L-1的6-BA和0.10mg.L-1NAA对胚状体的发生和发育有促进作用;花蕾低温预处理对胚状体发生有明显促进作用;盛花期取样的小孢子产胚率高于始花期和末花期;改良MS培养基中添加0.10g.L-1的活性炭,有利于胚状体的发育及成苗;MS 0.10mg.L-1NAA为小孢子植株生根最适宜的培养基;建立了高效的大白菜游离小孢子培养与植株再生体系。     

小白菜小孢子培养胚状体的诱导

21个小白菜品种小孢子培养结果表明:适宜的花蕾长为2.5~3.5mm,花瓣与花药长度比为1/2~3/4;0.05~0.10 mg.L-1的细胞分裂素能促进小孢子胚的发生,高于此浓度的细胞分裂素对小孢子胚的产生有抑制作用,并使小孢子胚向畸形化发展;0.05mg.L-16-BA 0.10 mg.L-1NAA的配比可以明显提高成熟胚的比例。     

Genetic Transformation of Brassica campestris L. ssp.pekinensis via Agrobacterium－ with Bt Gene

By means of Agrobacterium-mediated transformation, 43 kanamycin-resistant buds of Chinese cabbage were got. PCR, PCR-Southern blot and dot blot analysis were used to identify and characterize the putative transgenic plants. 26 plants had the predicted bands of the fragment of npt Ⅱ gene. Insect bioassays of 4 transformants showed that toxic protein had been translated and the translation levels were different among these transformants.     

Fertilization in Brassica campestris ssp. pekinensis and its duration of each stage

This paper reports the process of fertilization in Brassica campestris ssp. pekinensis and the duration of each stage. The results are as follows: (1) Pollen germinates on stigma 2–3 h after pollination. (2) 4–8 h after pollination, pollen tube grows in the style. (3) 8–14 h after pollination, pollen tube grows in the ovary and gets into the ovule via the micropyle. (4) 16 h after pollination, one sperm nucleus moves to the egg and enters it. (5) The sperm nucleus adheres to the nuclear membrane of the egg 18 h after pollination. (6) 20 h after pollination, it enters the egg nucleus and male chromatin gradually disperses and 24 h after pollination, a male nucleolus appears. A large female nucleolus and a small male nucleolus occur in the nucleus of the fertilized egg, and zygote formed. The dispersing of sperm chromatin in the egg nucleus takes about 4 h. (7) 32–34 h after pollination, the division of zygote begins. The dormancy stage of the zygote lasts for about 8–10 h. (8) The pair polar nuclei lie in the chalazal end of the egg before fertilization, which may fuse into a secondary nucleus or not. (9) 16–18 h after pollination, the sperm nucleus moves to the polar nuclei or the secondary nucleus. 18 h after pollination, the sperm nucleus adheres to the nuclear membrane of the polar nuclei or that of the secondary nucleus. (10) 20 h after pollination, the sperm nucleus enters one of the polar nuclei or the secondary nucleus and a triple fusion takes place. The process of fusion is similar to the karyogamy but faster. The dispersing of the sperm chromatin in the polar nucleus or secondary nucleus takes about 2 h. (11) 22 h after pollination, the primary endosperm nucleus formed. The female and male nucleoli cannot fuse with each other before mitotic division of the primary endosperm nucleus. (12) 24 h after pollination, the division of the primary endosperm nucleus actually takes place. __________ Translated from Acta Horticulturae Sinica, 2005, 32(5): 812–817 [译自: 园艺学报]     

正交设计在大白菜愈伤组织诱导中的应用

通过L25(56)正交试验,优化及筛选最适合大白菜鲁白六号子叶及下胚轴愈伤组织诱导的4种植物生长调节剂和AgNO3的浓度组合.结果表明,在α-NAA、6-BA、TDZ、ABA和AgNO3中,α-NAA 对子叶愈伤组织诱导率的影响达极显著差异,ABA对子叶愈伤组织诱导率的影响达显著差异,确定以MS 1mg·L-1 α-NAA 1mg·L-1 6-BA 3mg·L-1 TDZ 0.5mg·L-1 ABA 10mg·L-1 AgNO3组合为最佳子叶愈伤组织诱导培养基,MS 0.8mg·L-1 α-NAA 2mg·L-1 6-BA组合为最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基.试验中还发现,愈伤组织发生的同时还伴随着不定芽的发生,不定芽发生率较高的外植体,其产生的愈伤组织较少,且多为致密型愈伤组织.     

Transformation of Chinese Cabbage (Brassica rapa L. ssp.pekinensis) by Agrobacterium Micro-Injection into Flower Bud

We obtained two lines of Chinese head cabbage (Brassica rapa L. ssp. pekinensis) selfed progenies containing both an anti-sense gene of BcpLH and a gene for resistance to kanamycin by micro-injecting buds of their primary transformants (T0) with Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404. 31 positive plants resistant to kanamycien were recovered. Southern blot analysis confirmed the presence of T-DNA in two transgenic plants. One (DHZ-13-1) exhibits the characteristics of out-toward rosette and cauline leaves, and nested flower model in which secondary complete flower developed from the base of the primary ovary and the third flower from the ovary in the secondary flower, and so on, while another(DHZ-6-1) has no phenotype change. ABA and IAA affected the root growth of progeny of DHZ-13-1, but 6-BA was insensitive to hypocotyl growth during its seedling development.     

A Genetic Linkage Map of Brassica carmpestris L.ssp.pekinensis (syn. B.rapa L.ssp.pekinensis )

A molecular genetic map of Chinese cabbage was constructed with a 102 recombinant inbred(RI) population from a cross of two cultivated Chinese cabbage lines 177 and 276, using AFLP and RAPDmarkers. 352 markers including 265 AFLP markers and 87 RAPD markers were integrated into 17 linkagegroups. It covered a total of 2 665.7 cM with an average interval of 7.6 cM. AFLP marker is efficient formap construction while it easily forms clusters to cause big gaps in map. A total of 13. 92% abnormal segrega-tion markers distributed in the map. The molecular genetic map is fundamental for gene localization, compar-ative genomics, and QTL mapping of important agronomic traits.     

大白菜耐热性分子标记的研究

 采用单粒传的方法从大白菜耐热品种 177和热敏感品种 2 76杂交后代获得遗传性稳定的重组近交系群体 ,以此为材料用同工酶以及RAPD和AFLP分子标记技术鉴定了与大白菜耐热性数量性状相关的遗传标记 ,单因子方差分析和多元线性回归分析的结果表明 ,有 9个与耐热性QTL紧密连锁的分子标记 ,包括 5个AFLP标记 ,3个RAPD标记和 1个PGM同工酶标记 ,这些标记对耐热性遗传的贡献率为 4 6 .7%。 9个标记中有 5个分布在同一连锁群上 ,其他4个标记与任何一个标记无连锁关系 ,表明上述 9个标记分布在大白菜的 5个连锁群上。     

Directional Breeding of An Oval-ecotype Male Sterile Line of Chinese Cabbage(Brassica campestris L. ssp. pekinensis)

[目的]探究大白菜定向转育卵圆生态型雄性不育系的方法。[方法]以大白菜核不育＂复等位基因遗传假说＂为理论依据,以甲型两用系‘AB12’为不育供体品系,以卵圆生态型可育品系‘06048’为待转育品系,采用杂交、回交、兄妹交和测交的方法,按照定向转育方案将核不育基因定向转育。[结果]各世代育性分离比率与理论相一致,成功育成了一种不育株率100%的具有‘06048’园艺性状的新核不育系,实现了核不育基因和园艺特性的同时转育。[结论]该研究成果验证此定向转育方案是可行的,进一步为基因型为 msms的其他园艺性状的大白菜定向转育提供理论基础,也可以推广应用到整个芸薹属其它经济作物中,极大的拓宽了优良核不育基因的实际应用范围。     

平头型大白菜核基因雄性不育系的选育与利用

以复等位基因遗传的直筒型大白菜雄性不育系"两用系"为不育源,采用连续回交转育性状的同时测交鉴定基因型的方法,向平头型大白菜小孢子DH系S50中转育雄性不育基因,育成了不育度和不育株率均为100%、植物学性状与S50相近的平头型大白菜雄性不育系.