利用ITS1和ITS4通用引物扩增香蕉枯萎病菌核酸片段鉴定其生理小种

利用真菌核糖体rDNA区通用引物ITS1和ITS4,扩增采集自香蕉的13株镰刀菌包括18S rDNA部分序列、ITS1-5.8S-ITS2全部序列和28S rDNA部分序列的片段,通过BLAST序列比对分析,确定13株菌为尖孢镰刀菌[Fusarium oxysporum]。采用最大简约法,以层出镰刀菌[F.proliferatum(EU151490)]和茄病镰刀菌[F.solani(GQ376116)]为外群,将13株菌的序列与BLAST检索获得的尖镰孢古巴专化型(F.oxysporum f.sp.Cubense)相应序列构建了系统发育树。系统发育分析结果显示,13株菌与NCBI登录的4个尖镰孢古巴专化型菌株一起被分成3个亚群,亚群聚类结果与回接鉴定结果及文献报道的生理小种结果完全一致。     

棉花主要真菌病害病原菌ITS—RFLP快速鉴定方法

本研究旨在建立大丽轮枝菌、黑白轮枝菌、立枯丝核菌、串珠镰刀菌、粉红单端孢和尖孢镰刀菌6种棉花主要病原真菌的ITS-RFLP快速鉴定方法。通过ITS序列特征分析,得到了4种可以成功鉴别6种病原菌的限制性内切酶,并制作了标准对比图谱。不同病原真菌的ITS-RFLP的产物大小各异,多态性高,参考标准电子图谱可以准确鉴定其种类。该方法具有快速、准确、经济的特点。     

甘蔗梢腐病原菌分离纯化与ITS序列鉴定

采集甘蔗梢腐病发病植株叶片为材料,采用组织分离法,分别取发病甘蔗叶片和叶片的病健交接处,用PDA培养基对甘蔗梢腐病病原菌进行分离和纯化,将纯化后的菌株进行形态学和显微镜观察,采用CTAB法提取菌丝DNA,利用2对真菌ITS通用引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳后,回收特异条带,T克隆测序。结果表明,甘蔗梢腐病原菌ITS序列与镰刀菌属ITS序列高度同源,属于镰刀菌属。     

河南省花生果腐病病原菌的分离及鉴定

花生果腐病又称烂果病,是河南省乃至全国花生主产区日趋严重的重要病害。为明确河南省花生果腐病的病原菌,采用组织分离法对2019和2020年采自河南省各花生产区的92份花生果腐病样进行了菌株分离。结合形态学和分子生物学鉴定方法并依据柯赫氏法则进行验证,确定了引起河南省花生果腐病的病原菌包括镰刀菌属尖孢镰刀菌（Fusarium. oxysporum）、腐皮镰刀菌（F. solani）、层出镰刀菌（F. proliferatum）和厚垣镰刀菌（F. chlamydosporum）、曲霉属黑曲霉菌（Aspergillus niger）和黄曲霉菌（A. flavus）、可可毛色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）、齐整小核菌（Sclerotium rolfsii）以及侵管新赤壳菌（Neocosmospora vasinfecta）共计5属9种,其中以镰刀菌属的尖孢和腐皮镰刀菌为优势种。本研究进一步确定了花生果腐病是由多种病原菌复合侵染所致,研究结果可为花生果腐病的有效防治提供重要依据。     

马铃薯接骨木镰刀菌的分子检测

接骨木镰刀菌是马铃薯干腐病的主要致病菌,给黑龙江省马铃薯造成了一定的经济损失。采用马铃薯干腐病引物LDJ1对马铃薯干腐病、马铃薯晚疫病、马铃薯早疫病、马铃薯黑痣病的致病菌的ITS序列进行测定,只有马铃薯干腐病菌扩增出560 bp特异性片段。再分别对接骨木镰刀菌、燕麦镰刀菌和茄病镰孢变种的ITS序列进行BLAST比对分析,针对接骨木镰刀菌设计了特异引物L2,扩增特异性产物为278 bp,该引物所建立的PCR检测体系可检测DNA含量在50 pg/μL以上的目的基因。     

连作花生根腐病镰刀菌分离与对峙培养

本文利用形态学、ITS分子法和对峙培养法研究花生根腐病病原真菌镰刀菌(Fusarium spp)的种类及黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)T1010对其的生防作用。结果表明,对一株花生根腐病病株重点分离、纯化出3种镰刀菌,尖镰刀菌(Fusarium oxysporum)(F1)、茄腐皮镰刀菌(F.solani)(F2、F4)、木贼镰刀菌(F.equiseti)(F6),4株镰刀菌菌株和黄绿木霉T1010单独培养符合"S"生长曲线,T1010生长速度快,4d菌丝长满培养皿,镰刀菌菌株F1、F2、F4、F6生长缓慢,10d后均未长满皿;对峙培养T1010生长符合"S"生长曲线,与单独培养差异不显著,T1010竞争作用抑制镰刀菌生长,F1、F2、F4、F6生长与单独培养差异显著,黄绿木霉T1010通过竞争作用、抑菌作用抑制镰刀菌生长效果显著。     

黄河流域棉花种子携带真菌检测

 采用离体平皿测定法,分别对黄河流域8个不同抗病性的常规棉花品种,进行种子内部和外部带菌检测,根据分离纯化的真菌核糖体ITS（Internal transcribed spacer）序列进行分类鉴定。结果表明,棉花种子外部携带了10种真菌,内部寄藏了7种,优势菌群是木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）和滕仓赤霉菌（Gibberella intermedia）。部分品种的种子外部检测到了黄萎病菌（Verticillium dahliae）,但并未发现枯萎病菌（Fusarium oxysporum）。另外在种子内部均没有检测到棉花枯黄萎病菌。     

河南省玉米穗粒腐病病原串珠镰刀菌鉴定

河南省玉米穗粒腐病一般发病率为10%～30%,串珠镰刀菌是优势病原菌。从河南郑州感病的玉米穗轴和穗粒上分别分离出两个镰刀菌菌株。运用培养性状和形态特征综合分析的方法进行种类鉴定,并提取基因组DNA,对其内转录间隔区(ITS)序列进行PCR扩增和序列测定。结果鉴定出1个种为串珠镰刀菌。两个菌株rDNA间区ITS2可变区属I型,均能产伏马菌素。     

吉林省玉米穗腐病病原真菌中镰刀菌毒素的研究

先前的研究表明，在吉林省田间玉米穗腐病病原真菌中镰刀菌类占80％。本实验采用薄层层析法和气—质联用法对分离自穗腐病的9株镰刀菌进行了脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和串珠镰刀菌素的定性检测。结果在4株禾谷镰刀菌和一株木贼镰刀菌玉米培养物中检测到脱氧雪腐镰刀菌烯醇；在3株禾谷镰刀菌玉米培养物中检测到了玉米赤霉烯酮；在所有被检菌株中均未测到串珠镰刀菌素。     

新疆甜菜根腐病病原种群鉴定

从新疆各主要甜菜产区采集669个甜菜根腐病样,共分离出735个分离物,其中真菌分离物715个,细菌分离物20个,说明真菌是主要的病原种群。真菌中镰刀菌501个,占分离物总数的68.2%;丝核菌113个,占15.4%;腐霉菌81个,占分离物总数11.0%。经鉴定,有6种镰刀菌,即尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、串珠镰刀菌(F.moniliforme)、茄病镰刀菌(F.solani)、木贼镰刀菌(F.equiseti)、砖红镰刀菌(F.lateritium)、禾谷镰刀菌(F.graminearum);3种腐霉菌,即瓜果腐霉(Pythiumaphanidermatum)、简囊腐霉(P.monospermum)和P.spp;丝核菌主要为立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani),AG-2和AG-4融合群,分别占丝核菌总数的50.4%和35.4%。用上述代表菌进行致病性测定,均可引起甜菜根部腐烂、维管束变色等典型根腐症状。     

Fungal community structure analysis of peanut pod rot in soil in Hebei Province,China

In recent years, peanut yield and quality are more seriously affected by pod rot disease in China. However, managing this disease has proven challenging due to the wide host range of its pathogens. In this study, four soil samples were collected from fields with pod rot disease in Hebei Province, and 454 pyrosequencing was used to analyze the fungal communities structure within them. All 38 490 ITS high-quality sequences were grouped into 1203 operational taxonomic units, the fungal community diversity of four soil samples was evaluated and compared using Shannon index and Simpson index. The results showed that members of Ascomycota were dominant, followed by Basidiomycota. According to the BLAST results at the species level, Guehomyces had the highest abundance, accounting for about 7.27%, followed by Alternaria, Fusarium, and Davidiella. The relative abundance of Fusarium oxysporum isolated from rotting peanuts in soil with peanut rot was higher than that in the control, indicating that Fusarium oxysporum might be one of the main pathogenic fungus of peanut rot in this area. This study delved into the broader fungal community associated with peanut pod rot, providing a theoretical foundation for preventing and treating this disease in agriculture.     

不同花生品种对花生果腐病的抗性鉴定

采用自然病圃鉴定法，对76个花生品种（系）进行了花生果腐病抗性评价，以期为抗病育种及田间病害防 治提供理论依据和抗性材料。结果表明，不同花生品种间对花生果腐病的抗性存在着显著差异，供试76份花生品 种（系）中未发现对果腐病免疫的品种，获得高抗品种2个，抗病品种7个，中抗品种12个，感病品种21个，高感品种 33个。聚类分析结果表明，分支I中的9个品种（尤其是花育9115）抗性较好，可进一步加以利用。花生对果腐病的 抗感性与荚果鲜重之间不存在显著相关。     

防治花生腐霉果腐病的化学药剂筛选

花生果腐病是一种重要的土传病害,一旦发生会造成荚果腐烂落果,重病田可致绝收。群结腐霉菌(Py thium myriotylum)是引起花生果腐病最主要的病原菌。为寻找防治花生果腐病的有效药剂,本研究对6种化学药剂进行室内筛选,实验结果表明,96.8%的咯菌腈对引起花生果腐病的群结腐霉有较好的抑菌效果,EC50为3.16×10-5 mg/L,较低浓度的药剂就可以达到很好的抑制效果。盆栽接种后,用6种杀菌剂进行灌根,待荚果成熟后对病害发病情况进行调查统计,结果表明96.8%咯菌腈是防治花生果腐病最有应用潜力的药剂品种。     

Management of peanut pod rot I: Disease dynamics and sampling

Peanut fields are monitored for pod rot, which is typically caused by Pythium spp. and Rhizoctonia solani, in order to determine need, and the type and timing of fungicide applications. Pod rot can lead to damaged peanut kernels and when damage exceeds 2.49%, substantial price reductions occur. Nine fields or tests were sampled weekly for pod rot during the 2009 through 2012 growing seasons. The sampling was conducted on fields treated uniformly with fungicides for pod rot or within large research plots with various fungicide treatments. Pythium myriotylum was the most frequently identified pathogen species, although Rhizoctonia spp. were also recovered from diseased pods at all sites. Pod rot incidence was related to percent damaged kernels at harvest in 3 of 5 sites. Collection of 304 samples (sample unit = 46 cm of row) in a field was required to estimate 1% pod rot accurately (CV = 20%). There was a linear relationship between average % pod rot in a field, and the percentage of sampling units (absence/presence) with pod rot at low disease incidences. Scouting for pod rot of peanuts to make in-season fungicide applications will be hampered by high sample number, destructive sampling of plants, frequent sampling (due to rapid increase of disease), and the poor relationship between disease during the season and kernel damage at harvest. Making one preventative application at 60–70 days after planting may be a better practice than timing the initial fungicide application based on sampling for disease.     

特谱唑在花生上应用的技术与效果研究

研究表明,用特谱唑拦种能抑制花生种子的萌发,推迟出苗;喷施特谱唑对花生较为安全,每公倾用特谱唑３７５ｇ喷施２次或７５０ｇ喷施１次对花生褐斑病及黑斑病有良好的防治效果,对叶腐病、白绢病等也有较好的兼治作用,并能有效控制花生徒长,明显提高花生的结果数,饱果率及荚果产量。     

蓖麻种芽腐烂病害的病原鉴定

为明确引起蓖麻种芽腐烂病害的病原菌种类,本研究采用常规组织分离法分离获得病原菌,根据柯赫氏法则对病原菌进行致病性测定,并结合形态学特征观察和分子生物学技术确定病原菌分类。结果表明,从蓖麻种芽病样组织中分离得到RFR1-4菌株为致病菌。形态学鉴定该菌为茄腐镰孢菌(Fusarium solani)。对致病菌株进行ITS、β-tubulin和TEF-1α基因分析,结果显示与Fusarium-ID数据库中的茄腐镰孢复合种(F. solani species complex)有100%的相似性。因此结合形态学鉴定结果,确定引起蓖麻种芽腐烂病害的病原菌为茄腐镰孢复合种。该病原鉴定对蓖麻种芽腐烂病害的防控有重要的指导作用。     

东北玉米苗枯病病原镰孢菌rDNA ITS鉴定

从东北地区采集引起玉米苗枯病的镰孢菌种群的菌株,选取12株形态及培养性状不同的菌株,采用rDNA ITS序列分析技术对供试菌株进行种类鉴定。结果表明,引起玉米苗枯病的主要致病镰孢菌有7个种,分别是拟轮生镰孢菌(Fusarium verticilliodes)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)、半裸镰孢菌(Fusarium semitectum)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、亚粘团镰孢菌(Fusarium subgiutinans)、层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)及尚未确定种类的F11菌株。F11菌株与Genbank中的镰孢菌株FVS3(DQ885388)的同源性达到99.8%,该菌株与其他测试菌株ITS序列差异显著,可能是一个新的种类。     

花后膜下滴灌对花生生长及产量的影响

以大花生花育22号和花育25号及小花生品种花育20号和花育27号为材料,研究花针期膜下滴灌处理对不同花生品种植株生长发育、产量及产量构成因素的影响。结果表明,膜下滴灌处理对不同品种农艺性状的影响虽存在年际和品种间差异,但总体而言对花生农艺性状无显著影响。3年花针期膜下滴灌处理均显著增加花育25号和花育20号的单株结果数,增加其双仁果率,对其产量提高具有显著效应。除2013年花育22号外,3年试验结果均表明,花针期膜下滴灌对花生均具有增产效果,但对花生收获指数的影响无明显规律。