用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个     

用大片吸虫（Fasciola gigantica，Fg）成虫的28－kDa半胱肽水解酶进行反刍动物体内片吸虫病的免疫诊断（摘要）

用大片吸虫（Ｆａｓｃｉｏｌａｇｉｇａｎｔｉｃａ，Ｆｇ）成虫的２８－ｋＤａ半胱肽水解酶进行反刍动物体内片吸虫病的免疫诊断（摘要）Ｆａｇｂｅｍｉ，Ｂ．Ｏ．＆Ｇｕｏｂａｄｉａ，Ｅ．Ｅ．本文介绍一种以Ｆｇ成虫的２８ｋＤａ半胱肽水解酶作为片吸虫的特异性抗原，建...     

牦牛肝片吸虫分泌排泄抗原的生化特性和免疫印迹分析

肝片吸虫的分泌排泄抗原（ＥＳ抗原）在诊断及诱导机体产生抗体方面具有重要作用。本文对寄生于牦牛的肝片吸虫ＥＳ抗原的蛋白质组成及其生化特性进行了分析。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳显示ＥＳ抗原共有９条带，主要由１２－２６ＫＤ的小分子量蛋白质组成；糖蛋白及脂蛋白染色后发现ＥＳ抗原中糖蛋白极少，而含有较多的脂蛋白；等电聚焦电泳结果显示ＥＳ抗原有２２条带，几乎全部是酸性蛋白，ｐＩ主要集中在４．２５～５．２５范围内；双向电泳共检出３０个多肽，主要分布在ｐＩ４．５～７．０之间；免疫印迹分析结果表明：ＥＳ抗原中分子量为１６．２ＫＤ～１８．６ＫＤ的蛋白质是主要的抗原成分，其中１７．２ＫＤ多肽具有最强的免疫原性。     

肝片吸虫分泌排泄抗原及主要多肽对动物模型的免疫保护

体外培养肝片中吸虫成虫，制备收集其分泌排泄抗原（ＥＳ抗原）。通过制备性ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离纯化分泌排泄抗原中免疫印迹信号最强的两种多肽－１８．６ＫＤ和１７．２ＫＤ多肽。用分泌排泄抗原和两种多肽分别对动物模型进行免疫保护性试验。大鼠和家兔经抗原免疫后，口服攻击新鲜活性肝片吸虫囊蚴，攻击感染的第６０天解剖动物，统计活虫数并计算减虫率。试验结果显示：肝片吸虫的ＥＳ抗原和１８．６ＫＤ及１７．２     

用亲和层析法提取大片吸虫谷胱甘肽转移酶的研究

为了探明大片吸虫谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）的多肽组分和酶活力,以供今后进行ＧＳＴ的免疫原性和各种蠕虫ＧＳＴ的交叉免疫原性的研究,本试验首次用亲和层析法对大片吸虫ＧＳＴ进行提取,用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析了大片吸虫ＧＳＴ的多肽组分,用１－氯－２,４－二硝基苯（ＣＤＮＢ）为底物测定了ＧＳＴ酶活力。电泳染色结果表明,大片吸虫ＧＳＴ至少有２条带,其分子量为２９．９～２４．５ＫＤ,其中主带２条,分别为２８．３、２６．２ＫＤ。酶活力测定结果表明,提取的ＧＳＴ可获得１０．４４μｍｏｌ／Ｌ／ｍｉｎ／ｍｇ以上的酶比活性。     

旋毛虫肌幼虫可溶性抗原、排泄分泌抗原的电泳分析

本文报道了应用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌动虫排泄分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１～８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇ｓ蓝染脂、醋酸ａ－萘酯／坚固蓝染酪酶同工酶，结果肌幼虫ＥＳ抗原分别显示１６，２６、７及０条带；肌幼虫可溶性抗原分别显示２１、３８、４及１１条带。二维电泳后用考马斯亮蓝Ｇ－２５０染色多肤斑点，结果ＥＳ抗原显示多肽斑点６１个；肌幼虫可溶抗原显示１２２个多肽斑点。     

ELIB诊断黄平东毕血吸虫病的研究

本研究应用酶联免疫印渍技术（ＥＬＩＢ）分析了东毕血吸虫成虫部分纯化抗原中具有免疫活性的蛋白质组分，其中分子量为３５、８０、９２和９４ｋＤ的蛋白质具有较灵敏的反应原性，可做为东毕血吸虫病的诊断抗原。本试验应用此种抗原探索了诊断黄牛东毕血吸虫病的方法，取得了满意结果。     

片形吸虫病的免疫诊断概况

片形吸虫病是牛羊等反刍动物的最重要寄主虫病之一,常引起严重的经济损失。近年来,片形吸虫病的研究主要集中在免疫及免疫诊断等问题上,目前,学者已研究了片形吸虫的成虫粗制抗原,ＥＳ抗原等的提纯,并将其用于片形吸虫病的诊断之中,另外,随着免疫学和生物学的不断发展,片形吸虫病的免疫诊断技术的敏感性和特异性也有所提高,现研制出了许多特异性的免疫诊断技术,如ＥＬＩＳＡ,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ,ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡＴＦ     

多头纤虫抗原特性的研究——多头绦虫节片抗原及原头节ES抗原的S…

为了探明多头绦虫成虫节片抗原及多头蚴原头节排泄分泌抗原的多肽组分，以供今后在免疫诊断与预防脑多头蚴病的应用，本试验应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ首次分析了多头绦虫成虫节片抗主多头蚴原头节ＥＳ抗原的多肽组分。应用１２．５％凝胶的连续系统，垂直板型电泳，考马斯亮头Ｒ－２５０染色的结果表明，成虫节片抗原共有１６条多肽带，其分子量范围２９￣１５４ＫＤ，其中主带４条，分别为７３，８８，１２８，１３４ＫＤ，原头节ＥＳ抗     

鸭源和鸡源减蛋综合征病毒（EDSV）酶切图谱的分析

选用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ和ＢｇｌⅠ进行鸭源减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒（ＪＥ１株）和鸡源ＥＤＳ病毒（ＮＥ４株）的酶切图谱分析，发现鸭源ＥＤＳ病毒的这些酶切片段分别为９，４，４，６条，而鸡源ＥＤＳ病毒（ＮＥ４株）则为１０，４，４，５条，两者的酶切图形和片段大小有些不同，说明ＥＤＳ病毒宿主不同，即使血清型相同，基因型也有差异。     

棘球蚴囊液抗原A和B在酶联免疫吸附试验中的应用比较

用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵边续沉淀法从绵羊棘球囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原     

异源抗原在建立ELISA检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用

本文报告采用ｖｅｒｏ细胞增殖的ＩＢＤＶ抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗体。该法快速、敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过３０份血清样品ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的对数值（ｌｏｇＥＴ）与血清Ｐ／Ｎ值（待检血清ＯＤ值与阴性血清ＯＤ值之比）的线性回归分析，得直线方程ｙ＝３．０５８９＋０．０７３９ｘ（ｒ＝０．９１７４），从而血清样品的ＥＴ可通过血清单一稀释度的Ｐ／Ｎ值来计算。用不同来源抗原作ＥＬＩＳＡ表明，从ｖｅｒｏ细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞增殖的抗原可提高检测血清ＯＤ值近２０％，表现出异源抗原具有更高的特异性     

五种旋毛虫抗原对猪的免疫保护作用研究

本实验研究了旋毛虫肌幼虫可溶性粗抗原、排泄分泌抗原（ＥＳ）、表面抗原（ＳＡ）及成虫ＥＳ、ＳＡ５种抗原对猪的免疫保护作用。结果５种抗原对猪均具有一定程度的免疫原性，可诱导猪体产生对攻击感染的抵抗力（减虫率），其中肌幼虫粗抗原为５５．２０％；肌幼虫ＥＳ为４２．５６％，肌幼虫ＳＡ为７２．２１％；成虫ＥＳ为３２．９２％；成虫ＳＡ为４２．１７％。免疫５种抗原后用肌幼虫“Ｂ”抗原、新生幼虫可溶性抗原及成虫可溶性抗原进行ＥＬＩＳＡ检测，均可测出血清抗体应答反应，其中以相应抗原测出的抗体应答较强烈。免疫５种抗原后猪外周血液中Ｂ淋巴细胞减少，Ｔｈ及Ｔｓ增加，Ｔｈ／Ｔｓ比值降低，呈暂时的细胞免疫抑制现象。     

细粒棘球绦虫排泄分泌抗原的研究：六钩蚴排泄分泌抗原的反应原性

本实验应用体外培养方法制备细粒棘球绦虫六钩蚴排泄分泌（ＥＳ）抗原，应用酶联兔疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）首次对六钩蚴ＥＳ抗原的反庆原性进行了初步分析。以５μｇ／ｍｌ包被反应板分别与已知阳性，阴性血清；人工感染血清；免疫血清；疫区屠宰绵羊血清；肝片吸虫，细颈囊尾蚴以及边虫感染的绵羊添反应，结果表明六钩蚴ＥＳ抗原具有较好的反庆原性。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００层析以抗原有一定的纯化作用。纯化六钩蚴ＥＳ抗原可     

诊断B组轮状病毒的三种酶联免疫方法的建立

用从当地分离鉴定的山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３毒株，在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒，制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）及生物素－亲和素系统酶联免疫吸附试验（ＢＡＢ－ＥＬＩＳＡ）。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明，其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法（ＣＩＥ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）作了对比研究，     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。     

Ab─ELISA和Ag─ELISA诊断骆驼伊氏锥虫感染的比较

采用四种方法：即①单克隆抗体检测抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＵＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（３４％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出９０头阳性（４９％）。其中ＢＣＥ未能检出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头（７５％）。所有阳性头数中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出９３％，Ａｂ－ＥＬＩＳＡ９５％。根据５５头的结果，阳性与阴性之间Ａｇ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异极显著（Ｐ＜０．０００１），Ａｂ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异不显著。因此，用Ａｇ－ＥＬＩＳＡ或结合ＢＣＥ诊断伊氏锥虫感染比用ＡＢ－ＥＬＩＳＡ更理想。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

日本血吸虫谷胱甘肽S—转移酶小鼠免疫试验

用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化中国大陆株日本血吸虫成虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）。把纯化的ＧＳＴ结合福氏佐剂免疫了二批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，获得了２９．５８～３２．７１％的减虫率和５２．９４～６８．１３％，粪便减卵率，ＥＬＩＳＡ试验表明免疫小鼠产生了体液免疫应答，免疫印迹试验（Ｗｅｓｔｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）显示日本血吸虫水溶性成虫抗原和ＧＳＴ抗原的２８、２８ｋＤ蛋白被免疫小鼠血清所识别。     

日本血吸虫谷胱甘肽S－转移酶小鼠免疫试验

用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化中国大陆株日本血吸虫成虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）。把纯化的ＧＳＴ结合福氏性剂免疫了二批达ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，获得了２９．５８～３２．７１％的减虫率和５２．９４～６８．１３％的粪便减卵率。ＥＬＩＳＡ试验表明免疫小鼠产生了体液免疫应答，免疫印迹试验（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ）显示日本血吸虫水溶性成虫抗原和ＧＳＴ抗原的２６、２８ｋＤ蛋白被免疫小鼠血清所识别。