四种克伦特罗ELISA试剂盒比对试验

近年来,非法使用克伦特罗的现象已大为改观,但仍有极少数故意或在不知情的情况下使用克伦特罗的情况。为严厉打击非法使用克伦特罗的行为,我们已将尿样的克伦特罗阳性水平调整至10ng／ml。如此低的检出限,对所用的ELISA试剂盒提出了较高的要求。为评价克伦特罗ELISA试剂盒检测质量,特开展本次比对试验。本次试验选用了四种不同品牌的试剂盒进行试验,分别是某进口品牌A、国产品牌B、C、D。试验方案在参考国内一些专家学者的文献后进行了适当修改。     

国内外克伦特罗ELISA检测试剂盒评价

根据B/B0-50%抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加检验、实际样品检验等方面的比较结果对两种克伦特罗ELISA检测试剂盒(A: 中国兽医药品监察所研制, B: 德国 r-Biopharm公司研制)进行评价。结果表明,试剂盒A的50%抑制浓度低于1.0 ng/mL; 检测范围在0.10~3.0 ng/mL之间;标准溶液浓度梯度中包括1.0 ng/mL这一限定值;板内变异系数小于13.7%,板间变异系数小于8.8%;样品回收率在70%~110%之间;实际样品检验和试剂盒B检样的阳性符合率为95.5%。试验证明,试剂盒A与试剂盒B的水平相当。     

3种ELISA试剂盒检测盐酸克伦特罗效果评价

用3种盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒对10份未知猪尿液样品及5份标准浓度猪尿液样品进行检测,以比较试剂盒的检测效果。结果表明,试剂盒A在盐酸克伦特罗浓度为0ng／mL-10ng／mL的范围内其检测结果较准确,当浓度大于10ng／mL时其检测结果偏小;试剂盒B对盐酸克伦特罗的检测结果较标准样品浓度有时偏高,有时偏低,结果不够准确;试剂盒C的检测结果与标准样品的实际浓度相近,结果较准确。稳定性方面,试剂盒B的稳定性差,而试剂盒A及试剂盒C的稳定性较好。总的来说,试剂盒C在检测结果的准确性和稳定性上均较好,是3种试剂盒中效果最为理想的盐酸克伦特罗检测试剂盒。     

ELISE测定猪尿、猪肝中克伦特罗残留的研究

ELISA(酶联免疫吸附法)测定猪尿、猪肝中违禁药物克伦特罗残留量影响实验结果表明,德国拜发与北京望尔生产的两种ELISA试剂盒具有操作简单、时间短、成本低、敏感度高等特点。在室温20-22℃条件下,试验制备过程中必须做到控温度、控转速、控流速及洗板过程中应注意事项,这样可大大提高在实际操作过程中检测的准确性。     

ELISA测定畜产品中克伦特罗残留量影响因子试验

采用ELISA(酶联免疫吸附法)测定畜产品中违禁药物克伦特罗残留量影响因子,试验结果表明,德国拜发与北京望尔生产的两种ELISA试剂盒具有操作简单、时间短、成本低、敏感度高等特点。在室温20～22℃条件下,试验制备过程中必须做到控温度、控转速、控流速及洗板过程中须注意一些事项,这样可大大提高在实际操作过程中检测的准确性。     

采用ELISA试剂盒和金标试纸快速检测克伦特罗对比实验

加入ＷＴＯ以后 ,动物源性食品安全已经成为目前畜产品的主要问题。作为国家严禁使用的添加剂———盐酸克伦特罗的非法使用极易造成集体中毒 ,严重者将危及生命。各级政府投入大量的人力、物力和财力 ,正在进行产地日常检测与突击抽检相结合、定点屠宰场宰前专项检测等方法对可能进入市场的克伦特罗危害肉进行围追堵截 ,确保人民群众的餐桌安全。根据农牧发(２００１)３８号文的规定 ,酶联ＥＬＩＳＡ方法为常规快速筛选检测猪尿中克伦特罗的方法。由于普遍存在对环境、操作技能等要求高 ,检测周期长 (一般需２小时左右 ) ,价格相对昂贵 (小…     

国产盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒与进口同类型产品的性能对比

本文挑选了国内某公司和德国Biopharm公司的cL（盐酸克伦特罗）快速检测试剂盒进行实验对比,测试国内外试剂盒在性能上的差别。实验证明,采用间接竞争ELISA方法的盐酸克伦特罗国产试剂盒在猪尿液盐酸克伦特罗检测方面已经达到进口同类型产品水平,测定结果准确,方法稳定,可以作为进口试剂盒的替代品。     

四种副结核病ELISA试剂盒的比对试验及结果分析

目前副结核病已较广泛的采用ELISA进行检测,为保证实验室检测结果的可靠性,对四种市售的副结核病ELISA试剂盒进行了测试比对试验。结果表明,只有一种试剂盒在测试项目中获得满意结果,其它三种试剂盒都存在一定的问题。     

同位素内标GC/MS法测定猪尿和猪肝中克伦特罗

建立了同位素内标法定量测定猪尿和猪肝中克伦特罗的方法。猪尿和猪肝用乙酸乙酯、盐酸溶液提取，再经SCX固相萃取柱净化、N，O-双三甲基硅基-三氟乙酰胺（BSTFA）衍生化，定容后用气相色谱-质谱（GC／MS）测定，并以D9一克伦特罗为内标定量。猪尿和猪肝中克伦特罗的检出限分别为0．3ng／mL和0．3ng／g，克伦特罗的测定在5．0～400ng／mL范围内具有良好的线性关系，猪尿和猪肝中的平均回收率分别为100．3％和97．2％，批内变异系数分别为2．1％～4．8％，3．4％～6．4％，批间变异系数分别为2．5％～5．1％，2．7％～6．0％。通过与外标法比较，该方法定量准确可靠，更加适宜用作猪尿和猪肝中克伦特罗的定量测定。     

猪尿液中盐酸克伦特罗残留的ELISA法和GC-MS法检测

克伦特罗(Clenbuterol，CL)，是一种人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂。其药理作用为松弛支气管平滑肌、增加肺活量、降低气道阻力、增强支气管纤毛运动和促进痰液排出，临床上常用于防治哮喘、肺气肿等呼吸系统疾病。但当其应用剂量达治疗量的5～10倍时，CL可增强肌肉发育，降低脂肪沉积，因此又称为“瘦肉精”，常被作为饲料添加剂非法用于肉用动物的生产之中。更为重要的是，由于CL在动物体内吸收快，分布广，脂溶性高，具有残留性积累和半衰期长等药理特性。人在食用残留CL肉品后引起的中毒事件不断发生。因此，各国政府都禁止CL作为饲料添加剂用于肉用动物的生产中，我国政府也规定严禁在饲料中添加CL。同时制订了CL的最高残留限量标准。为了建立快速、敏感、特异、快速的CL免疫检测方法，本研究应用ELISA法和GC-MS法对照检测饲喂盐酸克伦特罗育肥猪的尿液样品，以确证盐酸克伦特罗快速检测ELISA试剂盒的精确性和稳定性。     

胶体金法与ELISA法检测盐酸克伦特罗的比较试验研究

[目的]本试验通过研究胶体金法与ELISA法在检测猪尿中盐酸克伦特罗的应用，得出两种方法在目前盐酸克伦特罗快速检测中结合使用的可能，从而在保证检测灵敏度和特异性的前提下，大大提高检测速度，并以此为基础建立一个不同于以前的监管模式。[方法]采用胶体金法和酶联免疫法(ELISA)进行比较。[结果]快速检测试纸条的灵敏度为5ng／nd，共检测442份猪尿样品，ELISA阳性7份，阳性率1．6％，胶体金阳性9例，阳性率2％；假阳性率为O．5％，符合率为99．5％；并可应用在宰后猪尿、猪肝检测中。【结论】胶体金法检测盐酸克伦特罗，具有操作简便、观察直观、快速、省时，其特异性、敏感性均达到ELISA水平；可作为饲养场、生猪中转站、屠宰场、菜市场筛查盐酸克伦特罗的重要手段，具有重要意义。     

ELISA法检测畜产品中克伦特罗残留

克伦特罗单克隆抗体ELISA试剂盒的应用,打破了动物源食品中β受体激动药残留的检测仅限于拥有先进仪器的检测单位能够检测的现状,使得基层单位、生产企业现场快速检测克伦特罗残留成为可能,扩大了我国兽药残留的检测范围和检测数量,使得国家兽药残留监控计划得到更好的实施。克     

应用ELISA检测商品肉猪尿样中盐酸克伦特罗残留

为了摸清我省某市屠宰猪中盐酸克伦特罗残留情况,确保百姓吃上“放心肉”,于2005年3月份对某市定点屠宰场的8批待屠宰肉猪随机采集尿样检测.现将检测情况报告如下。     

胶体金法与ELISA法检测盐酸克伦特罗的比较试验研究

盐酸克伦特罗(clenbuterol,CL)俗名“瘦肉精”,是一种α-肾上腺素受体激动剂。20世纪80年代被应用到养猪生产中,用来提高瘦肉率,近年来畜产品中盐酸克伦特罗的残留对人类健康造成的危害和对生态食物链所造成的破坏已经引起高度的重视。人如果食用含有过量盐酸克伦特罗的肉品,就会出现心跳加快．血压升高,心悸,头痛,恶心,呕吐,手颤等症状,严重者出现抽搐,晕厥,对患有高血压、心脏病、甲亢、前列腺肥大的患者危害更大。农业部、国家质检总局等部门发文严令禁止在动物生产中使用盐酸克伦特罗。但是国内有些地区还在非法使用盐酸克伦特罗,并发生多起中毒事件。     

ELISA测定猪尿液中β-受体激动剂残留的准确性评价

本研究建立克伦特罗间接竞争ELISA检测方法,对检测条件进行了优化确定,并利用猪尿液进行添加回收试验。结果显示:ELISA反应CLE-OVA包被抗原和CLE单抗的最适浓度分别为1:40 000和1:20 000,间接竞争ELISA的线性范围为0.016 l^8.520 0 ng/mL。该方法对克伦特罗、溴氯特罗、马布特罗和溴布特罗均有交叉反应。对冷冻储存半年以上的猪尿进行ELISA测定时,发现检测限可达58.848 3 ng/mL,药物添加回收率为85.19%~5 173.25%,变异系数为4.78%~96.79%;而经过MCX固相萃取柱净化处理后,检测限为0.076 ng/mL,添加回收率在101.21%~119.10%之间,变异系数为6.05%~18.38%。结果表明,SPE净化处理后,可有效去除尿液中的色素、蛋白等基质,提高了该法的灵敏度和准确性。     

猪尿中盐酸克伦特罗ELISA方法检测及注意点

“瘦肉精”学名盐酸克仑特罗,近年来,有个别药厂或养殖场受经济利益的驱使,在饲料中添加盐酸克伦特罗等β-肾上腺素能激动剂,使肉猪的瘦肉率大大提高,导致猪肉食品中盐酸克伦特罗等β-肾上腺素能激动剂残留严重超标,消费者食用了这种猪肉会出现严重的毒副作用。至今已发生多起“瘦肉精”集体中毒事件,因此对出栏前生猪“瘦肉精”的检测和监控是我们确保食用肉产品安全的重要保证。下面介绍一下我们实验室中最常用的一种检测方法：ELISA方法。     

盐酸克伦特罗单抗快速检测试剂盒的研制

以竞争性酶免疫分析原理为基础 ,应用特异性克伦特罗 (Clenbuterol,CL )单克隆抗体研制成功了β-肾上腺素受体激动剂克伦特罗的快速检测 EL ISA试剂盒 (CL- Kit)。 CL- Kit线性检测范围为 0 .5～ 12 8μg/ L,各标准品的吸光值变异系数为 2 .3%～ 3.6 %。标准曲线呈典型的 S型 ,相关系数 R2 =0 .996 ,符合 4参数 L ogit曲线拟合。检测结果表明 :CL 单抗对 CL 的半数抑制量 IC50 为 7.94 μg/ L,对沙丁胺醇 (Sb)的 IC50 为 10 0 0 μg/ L,肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的 IC50 均≥ 6 4 0 0 μg/ L;CL- Kit与 Sb的交叉反应性为 0 .79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 .12 % ,与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。试剂盒测定回收率在 91%～ 10 5 % ,批内变异系数小于 2 0 % ,批间变异系数小于 10 %。试剂盒在保存期内稳定     

盐酸克伦特罗ELISA法检测质量控制

克伦特罗(Clenbuterol)是一种β-受体激动剂,常用其盐酸盐,即盐酸克伦特罗,化学名为α-〔(叔丁胺基)甲基〕-4-氨基-3,5-二氯苯甲醇盐酸盐。20世纪80年代初,因发现其可明显促进动物生长,并能提高瘦肉率,而被称为“瘦肉精”。后因其可以残留在动物的体内,引起人的不良反应如心跳及心律不正常、引发心脏病而被禁用。但仍有部分养殖户不顾农业部的规定,为了使猪肉少长肥膘,多长瘦肉,在饲料中掺入瘦肉精,严重危害食品安全和人民群众身体健康。目前,克伦特罗的检测方法有GC-MS法、HPLC法、ELISA法、快速试纸条法等多种检验方法。在GB/T5009…     

应用酶联免疫吸附法(ELISA)结合胶体金试纸法快速筛选猪尿中的盐酸克伦特罗残留

猪尿中盐酸克伦特罗（Clenbuterol．简称CL）的残留检测，目前的检测方法．主要有高效液相色谱法（HPLC）．气相色谱-质谱法（GC/MS）．毛细管区带电泳法（CE）和酶联免疫吸附法（ELISA）等。其中GC／MS法是农业部规定的动物组织中CL确证检测方法（NY/T468-2001）．ELISA法是农业部规定的猪尿中CL筛选检测方法。GC/MS法具有灵敏、准确、特异的优点，但存在仪器贵重、操作烦琐、费用昂贵、耗费时间等问题．限制其在基层日常工作中的应用。     

ELISA法测定克伦特罗残留的技术要点

克伦特罗的检测方法很多．但ELISA法由于灵敏度高、简便快速、易普及等优点．广泛用于批量样品的定性和半定量检测。然而．用ELISA法测定克伦特罗残留．若在试剂盒选用、阳性判定阈值设定、样品前处理、试剂盒操作过程等方面不注意，均有可能引起测定失败。本文基于数万个尿液、饲料和组织等样品的实测情况总结了ELISA法测定克伦特罗残留应注意的技术要点．