猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株的分离与鉴定

为了解猪繁殖与呼吸道综合征在新疆的流行现状,以及病毒毒株的分子生物学特征,对疑似该病病料进行地方毒株的分离,并对其进行鉴定。采集新疆乌鲁木齐市七道湾某猪场疑似PRRS病死的猪只肺脏及淋巴结等组织病料,将其处理后接种到Marc-145细胞上,并盲传3代;对分离株进行毒力测定(TCID50),应用RT-PCR方法对出现CPE的细胞培养物进行分子检测。结果显示,分离到的新疆病毒株可发生细胞病变,在Marc-145细胞上的TCID50为10-5·mL-1。RT-PCR检测结果用琼脂糖凝胶电泳鉴定基因序列,将测序结果与GenBank已发表的PRRSV毒株基因序列进行对比分析。研究证明所分离到的病毒为PRRSV,命名为XJ-Q。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒宁夏地区地方株的分离与鉴定

[目的]弄清宁夏地区部分猪场出现“无名高热”病因及更加有效预防、控制此类疾病的发生.[方法]通过从宁夏某发病猪场采集产生典型病变的猪肺部组织,将病料处理后分别用Marc-145、PK-15、BHK-21等传代细胞系进行病毒的分离与鉴定.[结果]只有Marc-145细胞上有典型病变,连续传代3次后病变稳定,接毒48 ～72 h后病变率达70％左右.RT-PCR及双酶切的结果表明分离培养物为猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株.通过RNA提取、RT-PCR及酶切反应,实现了对分离培养物快速、确切鉴定.[结论]用MARC-145细胞成功分离到1株PRRSV,命名为ZH-w株.     

4株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离和鉴定

为了进一步分析本次猪暴发高发病率和高死亡率疫情的病因,本研究利用病毒分离与鉴定方法,将4份RT-PCR鉴定为单纯PRRSV阳性的组织病料,接种Marc-145细胞,经RT-PCR、IFA和电镜鉴定成功的分离到4株PRRSV,TCID50为10-6.5/0.1ml,命名为BJSY-1、BJPG、BJSD和BJBLZ株.本研究建立的方法为PRRS的诊断及防制提供了技术保障.     

新疆高致病性猪蓝耳病病毒分离与鉴定

从新疆发病仔猪的肺脏和淋巴结内体内分离到1株PRRSV病毒.该病毒能直接在Marc-145细胞上生长,继代培养72 h后产生细胞病变(CPE).经特异性荧光抗体和ELISA检测均为阳性,RT-PCR方法能扩增出该病毒的400 bp的特异性片段.从该病的流行病学、临床症状、病理学、病原的生物学特征来看,该分离株为猪繁殖与呼吸综合症病毒的变异株.这一结果提示PRRSV毒株变异是引起新疆地区猪场母猪、仔猪大量发病死亡的重要原因,必须引起各级兽医部门和猪场的高度重视.     

4株高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离与鉴定

2007年7月从江苏某些猪场采集的具有明显高热症状的病料组织中分离出4株病毒,经对病毒的TCID50测定、血清学试验、病毒基因鉴定,确认这4株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒.病毒基因序列分析发现:4株病毒的NSP2基因均存在2处共30个氨基酸缺失,缺失氨基酸分别位于481位、532～560位.氨基酸序列同源性分析可见:分离株与VR2332株、MLV株的同源性很低,在60.3%至68.6%之间;与国内疫苗株CH-1a的同源性为83.1%～83.7%;与国内分离的变异株JXAI株、HUN4株、HB-1(sh)/2002株同源性很高,为91.2%～98.5%;同时4株分离株之间的同源性很高,为99.3%～100.0%.系统发育树表明:分离的4个毒株与JXAI毒株和HUN4株有较近的亲缘关系,与其他株的亲缘关系较远.动物回归试验表明,4株病毒均可以引起仔猪明显的临床高热症状.     

猪繁殖与呼吸综合症病毒免疫抑制机制研究

研究阐明了PRRSV抑制宿主SLA-I这一问题,从分子和细胞水平解析了PRRSV利用自身蛋白来抑制宿主细胞SLA-I表达的机制,对于解答PRRSV复杂的免疫机制和免疫逃逸机制具有重要意义。     

一株猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病株的分离与鉴定

[目的]分离一株近期流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒并解析其基因变异情况.[方法]适当处理猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性临床样品,接种非洲绿猴胚胎肾细胞进行病毒分离,间接免疫荧光试验对所分离病毒进行鉴定;同时用RT-PCR技术扩增其全基因组,并进行序列测定与分析.[结果]分离培养物可引起非洲绿猴胚胎肾细胞出现稳定的细胞病变,间接免疫荧光试验显示有许多特异性荧光,分离培养物中存在猪繁殖与呼吸综合征病毒.病毒全基因组大小15 323个核苷酸,在非结构蛋白2基因有30个氨基酸缺失的典型标记;其与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株JXA1株、HUN4株和SD-CXA/2008株之间的核苷酸同源性较高,达到98.9％以上;该毒株与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒SD-CXA/2008株在同一分支上.[结论]分离出一株典型的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株的分离鉴定

从新疆阿克苏地区某规模化猪场发病仔猪体内分离到1株病毒,该病毒能在Marc-145细胞上增殖并产生特征性的细胞病变,而在Vero与BHK-21细胞上不出现细胞病变.病毒能被猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清特异性地中和,用RT-PCR反应能扩增出369 bp的特异性片段.将病毒接种30日龄血清阴性仔猪,可检测到血清中出现病毒特异性抗体,将分离株命名为XJPRRSV1/03株.     

猪繁殖与呼吸综合症免疫学研究

猪繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的高度传染性病毒病。笔者就呼吸综合症病毒的理化特性、生物学特征、基因组构成、病毒复制、免疫学特征以及疫苗等作一简述     

闵行地区PRRSV的分离鉴定及N基因序列分析

采集闵行地区规模猪场疑似PRRS阳性病料,在Marc-145细胞上进行病毒分离,采用RT-PCR扩增PRRSV高度保守的N基因并测序。结果表明,成功分离到6株PRRSV,为研究闵行地区PRRSV流行株分子变异和致病机理提供了良好的生物素材。     

Characterization of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Deletion Mutant

The genome of the isolate of porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV） from China, designated HPBEDV, was sequenced and analyzed. The size of the genome of HPBEDV was 15 334 nucleotides （nt）. Comparative analysis of HPBEDV with the genomic sequences of the domestic and other isolates （JXA 1, HUN4, CH-1 a, B J-4, VR2332, and LV） revealed that HPBEDV shared 98.4, 98.0, 89.0, 88.7, and 88.6% identity with the American strain JXA1, HUN4, CH- 1a, BJ-4, and VR2332, respectively, but only 54.7% identity with the European reference strain Lelystad virus. The NSP2 gene had 2 850 nt and encoded 950 amino acids （aa）, with two discontiguous deletions of 1 aa and 29 aa at positions 482 and 534-562, respectively, relative to VR-2332. Also, phylogenetic analysis with the published PRRSV genomic sequences indicated that the newly emerging isolate form a clade with the VR-2332 isolates. Therefore, HPBEDV was a novel strain with deletions in NSP2 gene.     

猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT-PCR检测方法的建立

根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp、430 bp和1 015 bp目的片段.以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR.CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性.以β-actin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%.同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒.结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测.     

Influence of Hypericum perforatum Extract on Piglet Infected with Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus

To study the influence of Hypericum perforatum extract （HPE） on piglets infected with porcine respiratory and reproductive syndrome virus （PRRSV）, enzyme-labeled immunosorbent assay （ELISA） and cytopathic effect （CPE） were used to determine in vitro whether HPE could induce swine pulmonary alveolar macrophages （PAMs） to secrete IFN-γ, and whether PRRSV titers in PAMs were affected by the levels of HPE-induced IFN-γ. HPE （200 mg·kg-1） was administrated by oral gavage to piglets infected with the PRRSV in vivo to observe whether HPE affected the viremia, lung viral titers, and weight gain of piglets infected with PRRSV. The results showed that HPE was capable of inducing PAMs to produce IFN-γ in a dose dependent manner and HPE pretreatment was capable of significantly reducing PRRSV viral titers in PAMs （P〈 0.01）. Administration of HPE to the PRRSV-infected animals significantly （P〈 0.05） reduced viremia over time as compared with the PRRSV-infected animals. But there was not significant decrease in lung viral titers at day 21 post-infection between the HPE- treated animals and the PRRSV-infected control piglets. There were no significant differences in weight gain over time among the HPE-treatment animals, the normal control, and the HPE control animals. The PRRSV-infected animals caused significant （P〈 0.01） growth retardation as compared with the HPE controls and the normal piglets. It suggested that HPE might be an effective novel therapeutic approach to diminish the PRRSV-induced disease in swine.     

复合RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟及猪流感等3种病毒方法的建立

为了快速准确地对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流感病毒(SIV)进行诊断与鉴别诊断,特进行试验。根据GenBank上已发表的PRRSV的ORF7基因序列、CSFV的C基因序列和SIV的M基因序列,设计合成了3对特异引物,开展RTPCR检测方法的研究。分别建立了PRRSV、CSFV和SIV的单项RT-PCR诊断方法,并最终建立了PRRSV、CSFV和SIV的复合RT-PCR诊断方法,可分别及同时扩增PRRSV 430 bp、CSFV 775 bp和SIV 225 bp的特异性片段。试验证明该方法适用于PRRSV、CSFV和SIV的诊断及鉴别诊断。