地衣芽孢杆菌分离株DSY002—2011对养殖水体氨氮与亚硝酸盐降解特性研究

对湖州地区养殖水体中分离得到的地衣芽孢杆菌DSY0002—2011进行氨氮、亚硝酸盐降解特性研究。结果表明,菌株DSY0002—2011在温度28℃、盐度0．85％、pH值7．0、氨氮初始浓度为100mg／L时,24h内的氨氮降解率达到35．5％,对亚硝酸盐无降解效果。菌株DSY002—201l菌株具有较好的氨氮降解能力,在水产养殖上具有针对性较强的潜在应用价值。     

地衣芽孢杆菌的生长及对养殖水体中残饵的降解特性

从自然养殖池塘中筛选获得了1株能有效抑制水产养殖常见致病菌的功能菌株DSY002-2011,经鉴定为地衣芽孢杆菌。通过人工模拟养殖水体中残饵浓度,研究地衣芽孢杆菌对饲料中蛋白质、淀粉的降解特性。结果表明,分离株DSY002-2011在水温28℃、pH值7的1%饲料培养液中培养24 h后,对饲料蛋白质、淀粉的降解率分别达到58.8%、62.9%,说明在养殖水体中添加地衣芽孢杆菌对水体残余饵料的降解是非常有效的。地衣芽孢杆菌降解蛋白质、淀粉的合适条件为pH值6~7、盐度0~1.0%。     

养殖水体耐盐高效降亚硝酸盐氮和氨氮芽孢杆菌的筛选与鉴定

亚硝酸盐氮和氨氮是养殖水体恶化的主要成分。从对虾养殖水体中,分离筛选出2株分别对亚硝酸盐氮和氨氮具有较高降解能力的耐盐芽孢杆菌菌株T905和T301。在模拟淡水和海水条件下,当亚硝酸盐氮和氨氮初始浓度分别为44 mg/L和20 mg/L时,3 d后菌株T905对亚硝酸盐氮降解率分别达到72.10%和92.10%,T301对氨氮降解率分别达到55.18%和52.00%。根据形态学特征和生理生化试验结果,鉴定2株菌为枯草芽孢杆菌。     

酿酒酵母JM14对养殖水体中亚硝酸盐去除效果研究

为了降低养殖水体中的硝态氮,以1株具有氨氮去除能力的酿酒酵母JM14菌株为材料,通过单因素试验,分别研究了初始亚硝酸盐浓度、p H值、培养温度和接种量对其亚硝酸盐去除能力的影响。结果表明:该菌株对亚硝酸盐的去除率在培养96 h时达到最高值,为68.3%;当初始亚硝酸盐浓度为1~10 mg/L时,菌株对亚硝酸盐去除率均保持在59%以上;当亚硝酸盐浓度达到20和30 mg/L时,亚硝酸盐去除率显著降低;菌株去除亚硝酸盐的最适初始p H值范围为6~10,最适培养温度为25~30℃,最佳接种量为≥2%。综合来看,酿酒酵母JM14具有去除水体中氨氮和亚硝酸盐的能力,对环境安全,在水产养殖中具有较广阔的应用前景。     

巨大芽孢杆菌对养殖水体氨氮降解特性研究

对从养殖水体中分离筛选到的一株巨大芽孢杆菌X2的氨氮降解特性进行了研究,表明该菌株的生长与氨氮降解是同步进行的,其降解氨氮的最适温度和pH值分别为30℃和7.0;当氨氮初始浓度在50mg.L-1以下时,X2菌株在24h内的氨氮降解率均可达95%以上;且该菌株可以多种糖为唯一碳源生长,并均具有较高的氨氮降解率。     

1株氨态氮降解菌JN-2的分离、筛选和分子鉴定

研究降解污水中氨氮污染物的微生物资源和分子系统特征。从大型养殖场的活性污泥中分离到1株能降解氨氮的菌株JN-2。利用筛选培养基分离得到氨氮降解菌,对菌株进行生理生化试验和16SrDNA基因测序,并构建系统发育树。结果表明JN-2菌株在28℃和pH 7条件下,24h内可以将初始质量浓度为200mg·L-1的NH4+-N降解75.6%。对构建的菌株系统发育树进行分析,发现菌株JN-2与苍白杆菌属的同源性达100%,因此推断JN-2菌属于苍白杆菌,菌株的16SrDNA序列在GenBank的登录号为JX535021。游离菌株对养殖污水的氨氮处理效率为30.1%,固定化小球对养殖污水的氨氮处理效率为62.8%。     

枯草芽孢杆菌WH-5的分离鉴定及净水研究

从湖南长沙淡水养殖场取得水样和底泥,通过富集分离得到一株高效降解有机物的芽孢杆菌,通过形态学、生理生化特征及16sRNA测序,结果表明该菌株是枯草芽孢杆菌。在实验室条件下,枯草芽孢杆菌WH-5对COD、氨氮、亚硝酸盐、硫化物的去除率分别是:88.01%、80.89%、61.72%、47.19%。在鱼塘的应用试验中,对COD、氨氮、亚硝酸盐、硫化物的去除率分别是:51.16%、75.54%、78.21%、71.42%,枯草芽孢杆菌WH-5能够有效的改善淡水养殖水体的水质。     

高效净水芽孢杆菌制剂的研究与应用

<正>项目简介本项目从池塘底泥中分离具有降解氨氮和亚硝酸氮作用的芽孢杆菌,研究了所分离的枯草芽孢杆菌BFY027对动物和环境的安全性、对水体氨氮和亚硝酸氮的降解能力和对水体水质的调节作用,研究了该菌株的培养(生产)特性。项目从菌株的筛选入手,重点解决在净水芽孢杆菌生产使用过程中效果不稳定的难题。BFY027制剂使用后,养殖水体中氨氮和亚硝酸盐氮含量显著下降,具有较好的调节水质的作用和防病效果。     

沼泽红假单胞菌R-3去除水体中氨氮的特性研究

为了降低养殖水体中的氨氮,以1株具有氨氮去除效果的沼泽红假单胞菌R-3菌株为材料,通过单因素试验,分别研究了初始氨氮浓度、温度、pH值和光照强度对其降解氨氮能力的影响。结果表明:当水体初始氨氮浓度在80 mg/L以下时,菌株R-3降解氨氮的效果较好,降解率均大于70%;该菌株在温度为25~30℃,水体的p H值为6~9,光照强度为1 000~5 000 Lux的环境条件下对水体中的氨氮具有较好地降解效果,对氨氮的降解率最高可达85.7%。沼泽红假单胞菌R-3具有高效去除水体中氨氮的能力,且适应环境的能力相对较强,在实际生产中具有较大的潜在应用价值。     

采用原生质体融合技术选育提高氨氮降解效能的光合细菌

将高效降解氨氮的假丝酵母菌Candida sp.与高效降解亚硝酸盐氮的耐盐红螺菌Rhodospeudomonas capsulate进行原生质体融合,探讨原生质体制备及融合的条件,并对融合子进行了筛选。结果表明,原生质体制备的优化条件如下：耐盐红螺菌,溶菌酶量为1.5 mg/mL,EDTA浓度为0.1 g/L,作用时间为45min;假丝酵母菌,蜗牛酶量为0.5 mg/mL,巯基乙醇的质量分数为0.1%,EDTA浓度为1 g/L,作用时间为30 min。两种原生质体在聚乙二醇（PEG-6000）和Ca2＋的诱导下发生融合,在添加制霉菌素和链霉素的选择培养基上进行初筛,以生长稳定性及对氨氮、亚硝酸盐氮的降解效能等为指标进行复筛,获得了具有较好降解效能的融合子R1菌株。该菌株对亚硝酸盐氮的降解效能与耐盐红螺菌相同,达到90%以上;对氨氮的降解效能为63%,较耐盐红螺菌提高54%。     

对虾养殖海区芽孢杆菌筛选及其水质净化研究

从胶南、红岛、仰口不同的对虾养殖区域,采集凡纳滨对虾养殖水体中的水样、底泥以及对虾肠道和粪便样品,从中分离筛选芽胞杆菌菌群,获得8株不同的芽胞杆菌菌株.通过形态学特征、生理生化特性结果分析和16S rDNA分析鉴定,确定其中的JNSY1菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus).安全性测试发现该蜡样芽孢杆菌JNSY1菌株对养殖的凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)无毒害作用.水质净化实验结果表明,10 d后该JNSY1菌株对养殖水体中氨氮的降解率达到65.5%,对亚硝酸盐的降解率达到68.3%,表明该菌株对养殖水体有明显的净化作用,可以研发作为微生态制剂.     

微生物菌株对鲈鱼养殖尾水的净化处理

从养殖鲈鱼尾水中分离纯化得到5株菌株,16S rRNA测序鉴定分离的菌株为硝化细菌、枯草芽孢杆菌、光合细菌、乳酸菌、酵母菌。利用5种菌以及5种菌的混合物对鲈鱼尾水进行处理,用分光光度法测定氨氮、硫化物和亚硝酸盐的含量,结果显示,5株菌株(同上述顺序)以及5株菌混合液(EM菌)的氨氮去除率达到97.1%、20.0%、16.9%、79.0%、45.1%、66.1%;硫化物的去除率达到14.3%、0.00%、40.0%、0.00%、33.3%、50.0%;亚硝酸盐的去除率达到96.0%、67.5%、17.5%、96.7%、93.1%、98.4%。因此,筛选出的5株菌及5株菌的混合菌液能够降低鲈鱼养殖尾水中的氨氮、硫化物和亚硝酸盐含量,对鲈鱼尾水的净化具有应用的价值。     

基于PCR-DGGE技术辅助筛选氨氮降解菌株

将PCR-变性梯度凝胶电泳(DGGE)与传统梯度浓度富集手段相结合,从不同氨氮浓度养殖污水中筛选高活性氨氮降解菌株。结果表明,经过不同氨氮浓度的驯化,初筛得到22株菌株,分别测定其氨氮降解能力,最终得到3株氨氮降解能力较强的菌株,分别命名为ZZC-3、ZZC-4和ZZC-14。经16S r DNA鉴定后,分别为戈登氏菌属、反硝化菌属和红球菌属细菌。PCR-DGGE结果表明,反硝化杆菌属的微生物在富集液中的含量最高,因此选择ZZC-4为目标菌株。经过污水降解效果验证,添加ZZC-4菌株的处理在144 h后水中氨氮和化学需氧量降解率分别达到90.8%和94.7%,显示该菌株具有良好的应用开发前景。     

臭氧底改康对养殖水环境的修复改良作用研究

研究臭氧底改康对养殖水环境的修复改良作用,结果表明:浙江省淡水水产研究所鱼药厂生产的臭氧底改康可有效降低养殖池水体氨氮含量,实验室条件下降解率可达12.0%,外塘试验条件下试验组较对照组氨氮含量降低20%;臭氧底改康在实验室条件下对亚硝酸盐的降解率可达26.52%,外塘试验条件下试验组较对照组亚硝酸盐含量降低23.53%。     

光合细菌与纳豆菌的混合培养及混合处理养殖水的研究

采用正交试验优化纳豆菌和光合细菌混合培养时的接种量及菌剂的装液量,使光合细菌活菌数在最短的时间内达到最大值。结果显示:光合细菌接种量20%、纳豆菌接种量2%、每250 mL三角瓶菌剂装液量60%培养效果最好。同时研究了光合细菌与纳豆菌混合菌剂对养殖水的亚硝酸盐氮以及氨氮的降解能力,发现2种菌的最佳混合比例为1∶1(v∶v),混合菌菌剂添加量与亚硝酸盐的降解作用成正相关;由于纳豆菌能将培养基中的有机氮转化为氨氮,混合菌剂对养殖水氨氮的降解效果随着添加量的增加而减弱。     

一株产生氨氮和亚硝酸盐氮菌的筛选鉴定及特性研究

从4个草鱼池塘中分离和定性筛选获得29株能够产生氨氮和亚硝酸盐氮的菌株。通过对编号为C95的菌株进行菌落形态学观察和16S rDNA序列分析,表明该菌株为革兰氏阴性杆状菌,与寡养单胞菌属(Stenotrophomonas sp.)的同源性达98%。采用单因素多水平试验对菌株的产氨氮和产亚硝酸盐氮特性进行研究发现:(1)氮源、碳源、温度和摇床转速都能显著影响菌株的生长及产生氨氮和亚硝酸盐氮的含量,但pH(5～9)对其无显著影响(P>0.05);(2)该菌株生长及产生氨氮和亚硝酸盐氮最适宜的培养基以及培养条件为:LB、pH 5～9、25℃、150 r.min-1。由C95作为指示菌株筛选得到SC01、SC07两株(2/33)去除氨氮和亚硝酸盐氮效果较好的菌株。因此,C95可作为筛选具有降氨氮和亚硝酸盐氮功能的有益菌的指示菌株。     

养殖水体氨氮降解菌的分离和初步鉴定

为研究微生物降解和转化水体中的氨氮,进行了养殖水体氨氯降解菌的分离和初步鉴定试验.结果表明,以(NH4)2SO4为唯一氮源的选择性培养基,通过平板稀释分离,从养殖池塘中筛选出对氨氮具有高降解活力的菌株X1.当氨氮初始浓度为50mg/L时,未活化的和活化的X1菌在48h和24h内的氨氮降解率分别为98.4%和97.7%.经形态鉴定以及生理生化试验,初步确定X1菌为巨大芽孢杆菌(Bacil-lus megaterium).     

一株异养硝化-好氧反硝化菌的分离鉴定及其对养殖废水中氮的去除特性

为了获得养殖废水中高效脱氮的菌株，采用富集培养分离的方法，从猪粪水自然曝气池污水中筛得一株具有较好脱氮功能的异养硝化-好氧反硝化菌株ZF2-3，经形态学和生理生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、系统发育树构建和特征性扩增片段分析，鉴定其为Bacillus subtilis。在分别以硫酸铵和硝酸钠为唯一氮源的人工废水培养基中，菌株ZF2-3对氨氮和硝态氮的去除率分别为85.7%和87.2%，且不积累中间产物。优化条件后发现，菌株ZF2-3脱除氨氮最适碳源是蔗糖，最适碳氮比为15。将菌株ZF2-3应用于养殖废水脱氮，发现无论在氨氮浓度相对较低的水产养殖废水还是氨氮浓度较高的猪粪废水中，菌株ZF2-3均有较好的处理效果，使水体氨氮、总氮浓度分别降低37.7%、67.4%和34.6%、30.4%，且无中间产物累积。研究表明，菌株ZF2-3对养殖废水脱氮具有良好的应用潜力。     

对虾养殖高效降解氨氮微生态菌的筛选与鉴定

氨氮污染严重影响对虾健康养殖,为了筛选适用于对虾养殖高效降解氨氮微生态菌,从实验室前期分离的25株菌株中,通过氨氮降解检测筛选得到氨氮降解效果较强的4株菌株FS007、FS008、FS017、FS025,其中FS017菌株为最佳氨氮降解菌株,对其培养24 h后进行形态学鉴定:菌落呈白色,表面湿润,边缘光滑呈圆形,中间凸起,有黏液;细胞革兰氏染色呈阳性,杆状,聚合在一起呈短链状或念珠状排列,芽孢椭圆形,中生。生理生化试验:酪素、葡萄糖、明胶、木糖、甘露醇、阿拉伯糖、淀粉、柠檬酸、硝酸盐还原、甲基红试验、过氧化氢酶、VP反应、需氧性、NaCl(2%～12%)等都表现为阳性,而产气、果糖、丙酸盐H_2S等表现为阴性。通过16S rDNA分子鉴定,确定该菌为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis。     

鸡粪中氨氮降解菌的分离鉴定及除氨适宜条件研究

【目的】氨气是畜禽养殖业中最常见、危害最大的有害气体之一。为了获得用于治理畜禽粪便氨气污染的微生物,从发酵3 d的鸡粪中分离筛选高效氨氮降解菌,研究其对鸡粪的除氨效果。【方法】以硫酸铵为唯一氮源,对鸡粪中具有氨氮降解能力的微生物进行连续10代的富集培养,将获得的富集培养液按10^-1梯度稀释后进行分离纯化。分离得到的单菌落接种至富集培养基中,培养24h后,测定培养基中剩余的氨氮含量,比较各菌株之间的氨氮降解率,筛选出具有高效氨氮降解能力的菌株。通过形态观察、分子生物学以及生物化学的方法进行菌株鉴定。研究不同温度（20℃、25℃、30℃、35℃、40℃）和pH（3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0）对菌株生长的影响,探索不同碳源（淀粉、甘露醇、柠檬酸钠、葡萄糖、乙酸钠、碳酸氢钠）、C/N（5、10、20、40）以及初始氨氮浓度（100、300、600、1 200mg·L^-1）对菌株氨氮降解性能的影响。最后将得到的目标菌株制成菌悬液,按10%的接种量接种到鸡粪中,同时以等量无菌生理盐水作为对照组,分别培养24 h、48 h、72 h和96 h,测定鸡粪的氨气散发量以及不同形态氮素的变化情况,评价目标菌株对鸡粪的除氨效果。【结果】通过富集培养,从鸡粪中共分离出15株能够降解氨氮的菌株,进一步筛选得到1株氨氮高效降解菌LSA,经鉴定为克柔假丝酵母（Candida krusei）,与Candida krusei isolate EM12（JF274497.1）的相似性达到99%,GenBank中的登录号为KT025851。该菌株的对数生长期为6-12h,可在pH 3-7,20-40℃条件下生长,能够分别利用葡萄糖、乙酸钠、淀粉、柠檬酸钠、甘露醇作为碳源,不能利用无机碳,当培养基的C/N为20时氨氮去除效果最佳。随着培养基中初始氨氮浓度的升高,菌株LSA对氨氮的降解率呈现下降趋势;与之相反,氨氮降解速率则随着初始浓度的升高呈现升高趋势。当氨氮初始浓度为327.20mg·L^-1时,60h内菌株LSA对氨氮的去除率达到71.88%,菌体含量为OD₆₀₀ 2.45;当氨氮初始浓度为1 105.26mg·L^-1时,96h内菌株LSA对氨氮的去除率达到57.44%,菌体含量达到OD₆₀₀ 2.96。将其接种到鸡粪中可以显著降低鸡粪中氨氮的含量,最高可降低22.30%;减少粪中氨气的挥发量,最高可降低15.92%;增加粪便总氮含量;降低粪便氨氮占总氮的比重。【结论】克柔假丝酵母（Candida krusei）LSA菌株具有高效氨氮降解能力和较强的环境适应性,可有效减少鸡粪中的氨氮含量,降低氨气的挥发量。