高盐低pH值法提取玉米基因组DNA的研究

优化建立了基于玉米叶片的高盐低pH值法提取玉米基因组DNA,经琼脂糖电泳检测表明,提取的DNA主带清晰、无降解现象、质量好,满足基于SSR标记的5色荧光电泳检测系统。此方法比目前提取植物基因组DNA常用的CTAB法和SDS法具有成本低、步骤简单、不使用酚、氯仿、异戊醇等有毒有机试剂的优点,是提取玉米基因组DNA的一种较好的方法。     

不同方法提取棉花DNA的比较

主要通过选用国丰棉12为材料,对不同方法提取出的DNA进行扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明:改良SDS法和改良CTAB法分别优于原SDS法和CTAB法,原SDS法和CTAB法分别优于氯仿一异戊醇法,由改进方法提取的棉花基因组DNA质量较高,能满足SSR等后续分子生物学研究的需要.     

不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较

从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA.     

蓖麻DNA的提取及SRAP反应体系的建立

为建立蓖麻快速有效的DNA提取方法和SRAP标记的技术体系,本研究采用SDS法和CTAB法对蓖麻不同叶片（新鲜嫩叶、老叶和陈旧的嫩叶、老叶）的基因组DNA进行提取,并以DNA模板用量、Mg2+浓度、引物浓度和Taq酶用量4个因素的不同水平配制了10个反应体系对蓖麻SRAP反应体系进行优化。结果表明,SDS法和CTAB法均可获得较高质量的DNA,多数样品的A260/A280值介于1.7～1.9之间,但以CTAB法更为省工省时,不同叶片DNA的提取效果,以嫩叶效果最佳;设计的10个反应体系中,以反应体系A（总体积为15µL,40ng DNA模板,1.5mmol/L Mg2+浓度,0.2mmol/L dNTPs,0.3µmol/L引物浓度和1Unit Taq酶）最为经济适用,将该体系用于蓖麻的SRAP扩增能获得稳定、清晰的多态性条带。本实验为蓖麻的遗传多样性研究及目标性状的分析定位提供了技术支撑。     

一种改良的大豆DNA提取方法

大豆组织中含有较多的蛋白质、糖类、酚类和脂类物质,要从中提取高质量的DNA比较困难。针对这一情况提出一种改良UREA大豆DNA提取方法(m UREA),该方法用异丙醇沉淀DNA,并配制washing buffer洗涤DNA沉淀。并以大豆叶片和种子为材料,将m UREA法与CTAB法和SDS法进行对比。结果表明,以大豆叶片为材料时,m UREA法提取的DNA产率最高,质量最好;以大豆种子为材料时,m UREA法提取的DNA产率略低于SDS法,但纯度最高。综合来看,m UREA法是一种高效的大豆基因组DNA提取法,从大豆种子和叶片中提取的DNA浓度和纯度都较高,能满足后续各种分子生物学的要求。     

玉米DUS测试标准品种的SSR分子指纹图谱的构建

研究了39个玉米DUS测试标准品种的SSR分子指纹图谱的构建方法。结果显示:①用改良CTAB法得到的玉米DNA的A260/A280为1.82,A260/A230为2.02,其条带清晰,降解少,质量明显优于SDS法;②从所用的国内外63对核心引物中筛选出PIC值高、条带清晰、稳定性好的20对玉米SSR核心引物;③用8%聚丙烯酰胺电泳在20对引物扩增产物中检测出了171个位点,PIC值为0.855 4,远远高于3%琼脂糖电泳,更适合DUS测试;④建立了DUS标准品种SSR分子指纹图谱,为DNA检测方法在玉米新品种DUS测试中的运用奠定了基础。     

适用于多重荧光SSR检测的玉米基因组DNA提取方法

通过比较植物DNA提取试剂盒法、SDS法、磁珠法和质粒DNA小提试剂盒法提取玉米叶片全基因组DNA的质量,确定最适用于多重荧光SSR检测的方法。结果表明,4种方法获得全基因组DNA的ODA260/ODA280平均值分别为1.92、2.16、2.22和2.00;DNA浓度平均值分别为19.16、2 050.58、69.12、53.56 ng/μL。比较发现,SDS法和植物DNA提取试剂盒法因为提取DNA杂质多和提取成本高,均不适用于多重SSR-PCR大量样本的检测;质粒DNA小提试剂盒法和磁珠法提取的全基因组DNA都适用于多重SSR-PCR检测,分别适合人工操作和机械自动化提取。     

剑麻DNA高效提取及RAPD反应体系优化

针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点．对其基因组DNA提取方法进行研究。比较了SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果分析表明：CTAB法提取效果较佳,A260/A280为1．8左右,A260/A230大于2．0,电泳检测基因组DNA纯度和完整性较好。后基于基因组DNA水平,对RAPD反应体系中镁离子浓度、dNTP浓度和退火温度三个重要的影响因子进行优化,得出在25μl反应液中,Mg^2＋浓度为2．0mmol·L^-1,酶为1．0U,引物为0．1μmol·L^-1,dNTP为0．2mmol·L^-1．37℃退火温度扩增40个循环效果较佳。     

不同方法对甜菜不同组织中总DNA的提取效果

以甜菜的幼嫩叶片、幼嫩花序、萌动种子及糖分积累期块根为提取材料,分别采用高盐低p H法、改良十二烷基硫酸钠(SDS)法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法及碱裂解法4种不同方法进行总DNA提取,对比不同提取方法及提取部位对提取效果的影响。结果表明,CTAB法适宜于叶片的DNA提取;SDS法适于对花的提取,而且对根和种子的提取效果也优于其它3种方法 ;碱裂解法具有简便快速的优点,但得率低,杂质去除不彻底,有可能影响后续试验,适用于对产量与质量要求不高时的快速提取;高盐低p H法提取的DNA浓度及得率均较低,且产物纯度不高,不建议作为首选方法。甜菜4种组织中,叶片最适合作为提取材料,花次之;根和种子的提取难度较大,建议提取时增加纯化与浓缩步骤。     

油梨果肉DNA提取方法的比较

为了获取高质量的油梨果肉DNA,以油梨果肉为试材,比较改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法对油梨果肉DNA的提取效果。结果表明：上述3种方法均可从油梨果肉中提取DNA,但改良SDS法与改良CTAB法所获得的DNA浓度都在600 μg/mL以上,纯度(OD260nm/OD280nm)均在1.8左右,纯度高且完整性较好,可用于未来分子标记分析。     

Separation of DNA for molecular markers analysis from leaves of the Vitis vinifera

In the present study, three DNA extraction procedures were examined to determine which might yield DNA from Grape leaves suitable for molecular analysis for RAPD, SSR. AFLP and etc analysis. The three methods examined were: the miniprep procedure and the modified CTAB for difficult species and protocol CTAB. Only the modified CTAB method consistently yielded DNA suitable for Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification, regardless of plant growing conditions or leaf age. The quality and quantity of extracted genomic DNA gained from these methods are deliberated by means UV biophotometer, electrophoresis in 1.2% agarose gel and PCR. In this regard, application chosen for young and mature leaves, the most value of qualified DNA, is extracted from fully expanded leave when PVP was added to the extraction buffer. This same procedure also yielded PCR-amplifiable DNA from various other perennial, woody species and from other fruit species such as apple (Malus domestica), cherry (Prunus avium), peach (Prunuspersica), plum (Prunus domestica). DNA yield from this procedure is high (up to 1 mg g(-1) of leaf tissue). DNA is completely digestible with restriction endonucleases and amplifiable in the Polymerase Chain Reaction (PCR).     

玉米叶片DNA快速提取方法改进研究

分子生物学研究需要大量的DNA样品,DNA的快速提取是提高研究效率的关键。研究比较多种植物DNA的提取方法,对部分实验步骤做了修改,建立了适于玉米叶片DNA微量快速提取的新方法。该方法不仅操作步骤简单、速度快、省时间,而且可以确保提取的玉米基因组DNA有足够的浓度和纯度。利用此方法,在一般实验室条件下每人每天可以提取150～200个DNA样品,一个DNA样品可供50～60次PCR反应使用,DNA 质量可以确保一般的PCR扩增,适用于玉米遗传多样性、分子标记辅助选择、引物筛选和分子标记定位等多种研究目的。     

快速大量提取甜菜DNA的新方法

以甜菜幼嫩叶片为材料,通过冷冻真空干燥将材料变成干粉,利用CTAB法对DNA提取程序进行了研究,建立了一种简单、快速的甜菜DNA提取程序,既节省时间,又可获得高质量的DNA,可以满足SSR及SRAP扩增的需要。     

玉米叶片基因组快速提取方法研究

SSR(Simple Sequence Repeat)分子标记技术已经成为玉米常规育种某些性状辅助选择的重要手段,需要对大量个体样本进行标记分析。高效、快速提取植物组织基因组DNA是关键的技术环节。本研究以高油玉米回交世代群体25～30d单株幼叶为材料,建立以EDTA、CTAB、KCl为主要试剂,结合组织研磨棒液氮研磨为主要步骤的基因组DNA快速提取方法,并探讨了将提取的DNA应用于SSR分子标记辅助选择的可行性。     

小麦TILLING突变体检测中基因组DNA提取方法的优化

为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。     

剑麻核酸的高效提取及应用

针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点,对其总RNA和基因组DNA提取进行研究。比较了改良SDS法、改良CTAB法提取总RNA和SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果表明：改良CTAB法提取总RNA效果较佳,所得RNA OD260／OD280高于1．8,OD260／OD230大于2．0,而CTAB法提取基因组DNA纯度和完整性较好。基于RNA和DNA水平,分别对剑麻的苯丙氨酸解氨酶基因（PAL）RT—PCR和RAPD反应体系进行优化,均得到理想条带。此方法提取剑麻的核酸可运用于后续分子生物学研究,为其它材料核酸的分离提供参考依据。     

改良CTAB法提取野牡丹科7种植物DNA

以野牡丹科植物幼叶为材料，对影响野牡丹科植物DNA提取质量的主要因子进行研究，以期建立适宜野牡丹科植物DNA提取的优化反应体系。结果表明，当提取液中CTAB浓度为4%，沉淀时加入0.6倍体积预冷异丙醇、1/2倍体积5 mol/L NaCl、2倍体积无水乙醇时，所提取的DNA纯度较高，电泳条带清晰。且在此条件下，能提出野牡丹科7种植物的DNA。     

适用于SSR分子标记的玉米单粒种子DNA快速提取新方法

研究了玉米单粒种子DNA的提取新方法,利用该方法提取DNA,液氮、研磨、离心、沉淀、SDS、CTAB及氯仿都不用,一个工作人员提取100粒种子(1个检测样品)DNA只需30min左右,一天可以提取1600粒种子(16个检测样品)的DNA,并且提取的DNA分子量大,不降解,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。     

甜菜基因组DNA三种提取方法的对比研究

采用CTAB法、SDS法、蛋白酶K法分别提取甜菜基因组DNA,并对得到的DNA进行含量测定、PCR扩增效果鉴定、限制性内切酶酶切。比较3种方法的提取效果,结果表明:CTAB法提取的DNA产量最高,蛋白质和多糖含量低,PCR结果和酶切结果均比较好;SDS法提取的DNA产量也较高,PCR结果不如CTAB法效果好;蛋白酶K法提取的DNA产量最低,且含有较多的RNA,PCR扩增无结果。所以,CTAB法是适合于甜菜基因组DNA提取的最佳方法。