RAPD及SRAP 2种标记对苦瓜‘如玉5号’杂交种纯度的鉴定

为获得理想的方法鉴定‘如玉5号’苦瓜杂交种子的纯度,以苦瓜杂交一代品种‘如玉5号’及其父母本为材料,利用RAPD(随机扩增多态性DNA)及SRAP(相关序列扩增多态性)2种技术进行其基因组总DNA指纹分析,以获得F1代杂交种与其亲本差异目的基因条带。经过对3种苦瓜新鲜幼嫩叶片总DNA提取,RAPD-PCR和SRAP-PCR扩增以及扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析,在供试的52条RAPD引物及144对SRAP引物中,共筛选出2对SRAP引物(Me2-Em9、Me3-Em8)能区分杂交种与其母本种子,1条RAPD引物(R10)能区分杂交种与其父本种子,通过SRAP(引物Me3-Em8)及RAPD(引物R10)2种分子标记技术对来自于河西走廊3地‘如玉5号’苦瓜种子进行检测,结合田间观察,结果表明,该方法成本低,操作简单,能很好地对‘如玉5号’苦瓜杂交种子的纯度鉴定。     

鉴定甜玉米品种真伪及种子纯度的RAPD引物筛选

采用CTAB法从6个甜玉米品种"正甜613"、"正甜38"、"粤甜3号"、"粤甜9号"、"粤甜13号"及"粤甜10号"的发芽胚轴提取DNA,用120个RAPD引物对其进行扩增比较分析,从中筛选到2个引物;SPS-A04和SPS-E20,在6个品种中扩增出相互不同的谱带,因此可用这两个引物构建DNA指纹图谱区分这些品种,或鉴定品种的真伪性。另外,对其中4个品种及其亲本进行了RAPD分析,筛选到3个引物,其中引物SPS-E15可同时用于"正甜613"、"正甜38"及"粤甜13号"3个品种的种子纯度检测,SPS-F06和SPS-F19则分别可用于"正甜38"和"粤甜10号"的种子纯度鉴定。     

RAPD技术鉴定番茄一代杂种粤星种子纯度的研究

应用RAPD标记技术对番茄杂种一代粤星种子纯度的鉴定进行研究的结果表明：在159个随机引物的RAPD反应中,有11个引物使亲本间具有多态性;分别用母本特异引物OPJ-11和父本特异引物OPF-09就可以对番茄一代杂种粤星种子纯度进行PAPD鉴定,检测结果与田间鉴定结果一致。     

黄瓜‘浙秀1号’种子纯度的SSR鉴定

种子纯度在种子生产中的重要性日益提升,分子标记技术因其具有高效、稳定、可靠等优点越来越多地被应用到种子纯度鉴定中。本研究利用SSR分子标记技术对黄瓜杂交品系‘浙秀1号’及其两亲本之间的多态性进行了引物筛选和种子纯度鉴定研究。结果表明,在699对供选SSR引物中,有3对引物分别在‘浙秀1号’杂交种和其双亲之间表现为稳定的共显性,杂交种带型为双亲的互补带型,适合于杂交种纯度鉴定。经田间试验验证,引物稳定性良好,且与田间鉴定结果非常接近,可用于‘浙秀1号’杂交种种子纯度的鉴定,显示出SSR标记技术在黄瓜杂交种子纯度的室内快速检测中有广泛应用前景。     

辣椒F1杂种遗传纯度的种子蛋白、同工酶与RAPD鉴定

采用SDS-PAGE电泳技术对辣椒F1杂种02-16及其亲本种子蛋白进行分析,杂种纯度为96.0%;苗期真叶POD同工酶电泳也可明显区分假杂种,纯度检测结果为96.7%.研究了Mg2 、dNTPs浓度对扩增结果的影响,建立起适合辣椒的RAPD-PCR体系;从91个引物中筛选出父母本有差异的引物3个,利用引物N5对F1纯度进行初步鉴定,检测结果为95.5%.3种方法检测与田间小区鉴定结果96.2%基本一致,表明这3种方法可作为辣椒F1杂种02-16纯度快速鉴定的有效手段.RAPD分析还揭示了辣椒栽培种内遗传多样性较低.     

甘蓝型CMS杂交油菜品种种子纯度的分子鉴定及其吻合率研究

本研究在大量引物筛选和重复验证的基础上对目前生产上大面积推广的CMS杂交油菜品种秦优7号、秦杂优1号及其对应亲本进行了RAPD标准图谱的构建,并规模化的对该两杂交种的生产商品用种种子纯度进行了检测。对所检样品所代表的种子群体进行了大田吻合率比对研究和群体纯度跟踪,结果显示两品种的室内检测结果和田间表现的单株育性吻合率皆在97%以上,这表明利用该技术进行杂交油菜种子纯度分析方法是可靠的,该方法在连续5年上百份样品、数万单株和20多万公斤的杂交油菜种子纯度分析应用实践中得到检验和证明。     

‘福春1号’大白菜一代杂种纯度的SRAP鉴定

‘福春1号’大白菜是福州市蔬菜科学研究所选育的晚抽薹春白菜新品种。为鉴定该品种的纯度,利用80对SRAP引物组合对‘福春1号’及其亲本混合池DNA模板进行扩增,筛选出杂交种具有亲本互补特征带的引物组合,并利用该组合对田间栽培的‘福春1号’大白菜幼苗进行纯度检测。本研究最终筛选出引物组合M2+E4,其对杂交种扩增产生亲本互补的特征带,可将亲本和杂交种有效区分。利用这对SRAP引物组合对102株‘福春1号’大白菜幼苗进行纯度检测,检测纯度为94.12%。SRAP标记鉴定结果与田间调查结果基本一致。SRAP分子标记技术可用于‘福春1号’大白菜的纯度鉴定。     

辣椒F1杂种遗传纯度的种子蛋白、同工酶与RAPD鉴定

采用SDS-PAGE电泳技术对辣椒F1杂种02—16及其亲本种子蛋白进行分析，杂种纯度为96．0％；苗期真叶POD同工酶电泳也可明显区分假杂种，纯度检测结果为96．7％。研究了Mg^2 、dNTPs浓度对扩增结果的影响，建立起适合辣椒的RAPD-PCR体系；从91个引物中筛选出父母本有差异的引物3个，利用引物N5对F1纯度进行初步鉴定，检测结果为95．5％。3种方法检测与田间小区鉴定结果96．2％基本一致，表明这3种方法可作为辣椒F1杂种02-16纯度快速鉴定的有效手段。RAPD分析还揭示了辣椒栽培种内遗传多样性较低。     

RAPD技术应用于超甜玉米种子鉴定

以粤甜3号等4个超甜玉米品种和2个亲本自交系为材料,建立了超甜玉米种子纯度和特异性鉴定的RAPD技术体系,筛选出6个多态性引物。利用OPQ14和OPQ15两个引物,可以对这6个材料进行有效的鉴别。     

‘湘农大棉1号’的SSR数字指纹图谱构建及纯度鉴定

为了快速而准确地鉴定杂交棉种子的纯度和真伪,根据亲本材料来源和被推荐使用的SSR核心引物,挑选了33对引物对‘湘农大棉1号’及其亲本进行多态性筛选。结果表明,其中8对SSR引物在父母本及其杂交种扩增出清晰、稳定的多态性性条带,且这些位点在F1中均表现为共显性标记。获得的共显性标记都能用于该杂交种的纯度鉴定,可以用来区别其中混杂的母本、父本及其他种子。将这8对引物在3个材料中扩增得到的01（二进制）数据转换成十进制数据,构建了‘湘农大棉1号’及其亲本的数字指纹图谱。采用多对引物构建的杂交棉数字指纹图谱,能为杂交种的真伪鉴定、纯度检测及亲本提纯等工作提供更加准确的技术指导。     

利用RAPD标记鉴定大白菜杂交种纯度的研究

应用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）标记鉴定大白菜杂种商品种子的纯度。用５０个随机引物检测了２个杂交种北京５７号和北京１０６号及其亲本,引物ＯＰＥ－２０在北京５７号杂交种中产生了有别于双亲的特殊标记,引物ＯＰＨ－０６及ＯＰＨ－０７在北京１０６杂交种中产生了有别于双亲的特殊标记,能清楚地区分杂交种及其双亲,并将这些引物应用在北京５７号和北京１０６号杂交种样品的纯度检测中。这个结果显示了ＲＡＰＤ标记在大白菜杂交种商品种子纯度检测上的实际用途。     

苦瓜品种亲缘关系的RAPD分析

利用RAPD技术对来自国内外的45份苦瓜栽培品种进行了亲缘关系分析。实验采用UPGMA方法进行聚类分析,并在此基础上建立分子系统树。实验结果将45个苦瓜品种分成滑身苦瓜和麻点苦瓜2大类,滑身苦瓜又可以分为来源于东南亚和来源于国内的2组,麻点苦瓜也可分为来源于中国香港和来源于中国内地的2组,说明苦瓜品种存在一定的地域性差异,另外亲缘关系上相近的品种也聚类到一起。     

苦瓜和菜豆种子的超干燥贮藏研究

本试验用氯化钙为干燥剂，将苦瓜种子合水量降至5.58％、4．09％、3．45％和2．71％，菜豆种子含水量降至7.44％、5．56％和4.55％。在室温下密闭贮存各批种子，6个月后检测种子生活力和活力，结果表明：低含水量的苦瓜种子生活力和活力保持较高水平，超干处理能够提高苦瓜种子的耐藏性：各批菜豆种子中，含水量为7．44％的种子生活力和活力最高，含水量低于5．56％的种子生活力和活力下降，因此，菜豆种子不宜进行超干燥贮存，但适度干燥有利于延长菜豆种子的贮藏寿命。     

用RAPD方法鉴定杂交辣椒种子纯度

本文用ＲＡＰＤ（随机扩增多态性ＤＮＡ）方法对辣椒种子的父本、母本及杂种一代进行分析研究,筛选出适合辣椒杂种一代种子纯度鉴定的随机引物Ｓ５,并对并进了种子纯度的初步鉴定。ＲＡＰＤ结果和田间鉴定的相比,在误差允许范围内,进一步证明了ＲＡＰＤ方法在蔬菜种子纯度鉴定中应用的可行性。     

利用DNA池技术提高基于InDel标记的种子纯度鉴定效率

为提高基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测通量,降低检测成本,本研究模拟10种DNA Pooling进行PCR、Pyrosequencing及等位基因频率分析。通过TTest分析不同Pooling间等位基因频率的差异性,确定3 Pooling为种子纯度检测最适Pooling数;建立3 Pooling-InDel-Pyrosequencing标准曲线,其R2达0.999 1;根据该标准曲线,检测黄瓜杂交品种"园中王"30粒杂交种种子纯度,结果为96.67%。本研究丰富了基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测技术体系。     

棉花品种基因纯度和特异性的SSR标记分析

为从分子水平上鉴定棉花品种的纯度和真实性,采用扩增带型清晰,多态性较高的SSR引物对51个常规棉品种进行了基因纯度鉴定、遗传聚类分析和品种特异性鉴定。基因纯度鉴定结果显示,69%的品种基因纯度较好,基因纯度在90%以上;12%的品种基因纯度较差,基因纯度在80%以下。聚类分析结果表明,所有品种分为2个大类和4个亚类,这反映出品种间的遗传基础较窄。品种特异性鉴定中,以遗传距离阈值T=0.01为划分标准,83%的品种具有特异性。这说明利用SSR标记可以有效鉴定棉花品种的基因纯度和特异性。     

Purity control of F1-hybrid tomato cultivars by RAPD markers

Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) markers were applied in purity control of hybrid seed production of tomato (Lycopersicon esculentum Mill.). DNA from three commercial F₁-hybrid cultivars and their parental lines was subjected to RAPD screening with 50 primers. Two of four primers which detected polymorphism between the parents tested, generated paternal-specific RAPDs, enabling a clear distinction to be made between hybrids and their maternal parents. In addition, combination of the polymorphic DNA products generated by these primers exhibited hybrid-specific patterns, enabling each cultivar to be identified. This result indicates the practical usefulness of RAPD markers in hybrid-tomato-seed purity-control tests and cultivar identification. The approach is advantageous in its rapidity and simplicity, particularly as an alternative for those cultivars for which lengthy and costly phenotypic tests are currently used.     

低糖苦瓜蜜饯的研制

为适应人们对低糖蜜饯食品的需要,对低糖苦瓜蜜饯的加工进行了研究,并通过正交试验确定了苦瓜蜜制液的最佳配方。通过对低糖苦瓜蜜饯进行抽真空包装,有利于解决该制品长期不易储存的问题。本制品酸甜可口,苦味适中,有良好的开发前景。     

RAPD技术快速鉴定辣椒杂种纯度的研究

利用RAPD技术，通过对60个随机引物的筛选，获得能区分粤椒4号及其亲本的引物OPS—01、并得到单株验证。     

不同含水量苦瓜种子的贮藏研究

苦瓜种子初始含水量为8.81%,用氯化钙为干燥剂将种子含水量降至5.85%、4.09%、3.45%和2.71%。室温下密闭贮藏各批种子,以开放贮藏的种子作为对照,每隔3个月取出检测生活力和活力,包括发芽试验、膜透性试验、挥发性醛含量的测定和抗老化试验。1a的监测结果显示：苦瓜种子开放贮藏时生活力和活力下降最快,经过脱水干燥的种子耐藏性增强,随着种子含水量的降低,生活力和活力增强,2.71%含水量的苦瓜种子贮藏效果最好。