巯基乙醇在家蝇幼虫血淋巴中适宜添加量研究

[目的]为家蝇幼虫血淋巴抗菌活性物质的分离、纯化提供依据。[方法]以大肠杆菌为指示菌,利用琼脂糖孔穴扩散法研究巯基乙醇对家蝇幼虫血淋巴抑菌活性的影响,确定巯基乙醇作为抗氧化剂在家蝇幼虫血淋巴中的适宜添加量。[结果]巯基乙醇能抑制大肠杆菌的生长,抑菌效果随其浓度的增加更为明显。当巯基乙醇体积浓度≤10-6时,其对大肠杆菌无抑菌效果,说明巯基乙醇的最大非抑菌体积浓度为10-6。体积浓度为10-6的巯基乙醇可有效保护浓度小于或等于1∶5的家蝇幼虫血淋巴悬液不被氧化,且其对大肠杆菌的抑菌效果不受影响。[结论]巯基乙醇在家蝇幼虫血淋巴中的适宜加入量应根据试验中具体情况确定。     

家蝇幼虫血淋巴对鸡免疫功能的影响

将100只1日龄雏鸡随机分为4组,用家蝇幼虫血淋巴按不同剂量给鸡灌服,用药一定时间后,对21,35,50日龄鸡分别随机抽取8只进行称重、颈静脉采血和剖杀,取脾脏、法氏囊进行称量,测定血淋巴对鸡体重及免疫器官的影响,并利用E一花环形成试验、鸡新城疫血凝抑制(ND-HI)试验检测血淋巴对鸡的细胞免疫、体液免疫功能的影响．结果表明：血淋巴对鸡体重、脾脏、法氏囊重各组间差异均不显著．E-花环试验中21,35日龄各组间差异显著,50日龄各组间差异极显著;ND-HI试验中21,35日龄各组间差异不显著,50日龄各组间差异极显著．说明家蝇幼虫血淋巴在增强鸡的细胞免疫与体液免疫功能方面具有明显的促进作用．     

家蝇幼虫提取物的抗菌活性

利用抑菌圈测量法研究家蝇幼虫提取物的抗菌活性,并且利用蛋白酶K水解和毛细管电泳对提取物中抗菌成分进行初步鉴定.结果表明,家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑制作用更强,诱导组的抗菌活性优于未诱导组;毛细管电泳显示志贺氏菌诱导的家蝇幼虫有56个新的主峰.因此,诱导组的高抗菌活性主要是由于昆虫体内诱导产生的肽类,组成性的蛋白性质的酶类,如溶菌酶对其抗菌活性有一些次要的贡献.     

不同提取方法对家蝇幼虫体外抗炎活性的影响

为比较水提法、碱提法、盐提法及醇提法对家蝇幼虫体外抗炎活性的影响,以脂多糖诱导的巨噬细胞为 研究对象,结合不同方法所获产物的产率、蛋白含量等,探明4 种方法所获提取物对细胞形态及TNF 琢、MCP-1 分泌 的影响。结果表明,碱提法所获产物的产率最高,其次是水提法、盐提法和醇提法;水提法所获产物的蛋白含量最高, 其次是盐提法、碱提法和醇提法;水提法所获产物的体外抗炎活性最优,其次是醇提法、盐提法和碱提法。     

温度对家蝇幼虫生长发育的影响

研究了温度对家蝇幼虫生长发育的影响。结果表明:在15～35℃条件下,温度越高,家蝇幼虫发育历期越短,且达到最大体重和最长体长所需的时间越短;最适于家蝇幼虫生长发育的恒温为30℃,温度幅度为35～30℃,温度周期为30℃24 h/d+15℃0 h/d。     

无色杆菌毒蛋白对菜粉蝶幼虫血淋巴酯酶同工酶的影响

对取食过无色杆菌毒蛋白的菜粉蝶幼虫血淋巴进行酯酶同工酶聚丙烯酰胺电泳分析,与对照相比,酯酶酶谱发生变化,对照吸光度为处理组的２￣１０倍。     

家蝇幼虫血细胞的透射电镜观察

[目的]观察家蝇3龄幼虫血细胞的类型和超微结构。[方法]取孵化后第3天家蝇幼虫血淋巴,采用透射电镜观察家蝇3龄幼虫血细胞的形态和超微结构。[结果]家蝇3龄幼虫血细胞分为原血胞、浆血胞、珠血胞、粒血胞和类绛血胞5种类型,细胞核均匀透亮,核膜清楚,常染色质多,粒血胞内含吞噬体。[结论]透射电镜观察可将家蝇幼虫血细胞分为5种类型。     

不同批量诱导方法对家蝇幼虫生长发育影响的实验与分析

通过冷刺激、热刺激、冷热刺激、超声刺激及紫外照射刺激等批量诱导方法对家蝇幼虫存活率、生长期、化蛹及羽化等发育影响的比较实验,发现冷刺激、热刺激对家蝇幼虫的生长发育影响较大,冷热刺激、超声刺激和紫外照射刺激对幼虫的生长发育影响相对较小。     

黄粉虫幼虫免疫血淋巴最佳制样条件的确定

采用正交设计Ｌ２７（３＾１３）的方法对大肠杆菌诱导黄粉幼虫的免疫血淋巴最佳制样条件进行了研究,结果表明：以每虫１０＾５菌量诱导较小的虫体后７２ｈ取样后得到的样品活性最高。     

九香虫血淋巴的抗菌活性初步研究

为进一步更加科学地开发利用九香虫抑菌物质,采用直接离心法、匀浆法和浸提法3种方式提取九香虫血淋巴,并分别检测每一种提取法所得上清液、下层液体和沉淀物质的抑菌活性,并进行比较分析.结果表明,血淋巴原血对10种试验菌的抑菌圈直径均大于0.7 cm,对革兰氏阳性菌的抑菌活性(MIC=16)强于革兰氏阴性菌(MIC=8).说明...     

链球菌诱导后家蝇幼虫提取物的抗菌活性研究

[目的]为枯草杆菌诱导后的家蝇幼虫提取物在饲料中的应用提供依据。[方法]采用抑菌圈测量法测定链球菌诱导后家蝇幼虫提取物的抗菌活性,分析其对温度、酸碱和离子强度稳定性的影响。[结果]链球菌诱导的家蝇幼虫提取物对细菌的抑菌圈直径为6.55~11.01 mm。诱导组中家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其对革兰氏阳性菌的抑制作用较强。而未诱导组提取物对细菌的抑菌圈直径为6.01~8.01 mm,诱导组的抗菌活性高于未诱导组。抗菌肽样品具有较好的温度稳定性。当pH值为4~10时,抗菌肽样品的抗菌活性均较高,以pH值为8时最高。抗菌肽样品的抗菌活性随离子强度的升高而下降。[结论]抗菌肽的抑菌活性受环境离子强度的影响,与其作用机理有关。     

大肠杆菌感染对家蝇幼虫ACP、POD活性的影响

观察家蝇(Musca domestica)三龄幼虫针刺感染大肠杆菌(Escherichia coli)后4、8、12、16 h血清和血细胞中酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)活性的变化。结果表明,大肠杆菌感染后各时间组家蝇三龄幼虫血清和血细胞中ACP活性显著高于对照组(P﹤0.01)。其中血清和血细胞中ACP活性分别在感染8 h、4 h达高峰,然后逐渐下降;大肠杆菌感染后各时间组家蝇三龄幼虫血清和血细胞中POD活性显著高于对照组(P﹤0.01)。其中血清和血细胞中POD活性分别在感染12 h、8 h达高峰,然后逐渐下降。大肠杆菌感染后家蝇三龄幼虫血清和血细胞中ACP、POD活性均增强,提示这两种酶在防御微生物感染过程中发挥了重要作用。     

感染大肠杆菌后家蝇幼虫浆血胞和粒血胞的变化

为家蝇血细胞的功能、细胞免疫机制等的进一步研究提供基础依据,应用倒置显微镜结合姬氏染色观察家蝇3龄幼虫感染大肠杆菌后4h、8h、16h、24h血细胞总数及粒血胞和浆血胞的数量及形态变化。结果表明:家蝇3龄幼虫浆血胞和粒血胞是家蝇幼虫免疫反应的主要免疫细胞,感染后4h血淋巴细胞总数、浆血胞和粒血胞数增高,感染后8h达高峰,之后开始下降;感染后各组浆血胞和粒血胞聚集成堆,出现细胞变形、空泡和核内颗粒浓集。对照组家蝇幼虫浆血胞有细胞分裂,感染后各组可见粒血胞、浆血胞分裂,家蝇幼虫血细胞的自身分裂可能是其重要来源。     

大肠杆菌感染后家蝇幼虫血细胞中ACP和POD活性的变化

[目的]了解酸性磷酸酶（ACP）和过氧化物酶（POD）在家蝇（Musca domestica）幼虫血细胞中的定位以及大肠杆菌（Escherichia coli）对血细胞中ACP、POD活性的影响。[方法]采用酶细胞化学技术测定感染前后家蝇幼虫血细胞中ACP、POD活性,用显微摄影及定量图像法进行观察。[结果]感染后浆血胞和粒血胞中ACP、POD的活性均较正常组极显著增加（P〈0.01）。感染前后原血胞、珠血胞、类绛血胞中均未见ACP、POD的阳性反应物。[结论]感染后浆血胞和粒血胞中ACP、POD的活性增强,提示浆血胞和粒血胞是家蝇幼虫参与免疫反应的主要细胞类型,而原血胞、珠血胞及类绛血胞不参与细胞免疫反应。     

家蝇幼虫生态处理对猪粪和鸡粪中微生物数量的影响

[目的]研究家蝇幼虫生态处理后猪粪、鸡粪中微生物(细菌、真菌、放线菌)数量的变化情况。[方法]猪粪、鸡粪经家蝇幼虫生态处理后,采用稀释平板计数法对样品中细菌、真菌及放线菌数量进行分析,设立未经幼虫处理的猪粪、鸡粪为对照。[结果]正常对照组猪粪在恒温、恒湿条件下放置3~5 d后,细菌、真菌及放线菌的数量达到最高峰,分别为1 378×109、3 352.0×106和3 48.81×107cfu/g。经家蝇幼虫处理后,猪粪中的各类菌数量增加幅度均较小,第5天相应的各类菌落数为158.40×109、185.0×106和4.6×107cfu/g,总体上呈较为平稳态势。正常对照组的鸡粪前5 d 3种微生物数量增加亦明显,而家蝇幼虫处理组变化均不大。[结论]家蝇幼虫处理猪粪、鸡粪后,能显著降低粪便中细菌、真菌、放线菌的数量。     

蜕皮前后家蚕幼虫血淋巴的蛋白质组学分析

 【目的】对家蚕幼虫血淋巴在蜕皮前后的蛋白质变化进行研究,发现参与蜕皮过程的蛋白质,为深入研究家蚕幼虫的蜕皮过程提供新的思路,也为研究其它昆虫的蜕皮过程提供启示。【方法】应用以双向电泳（2-DE）进行蛋白质分离、以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）进行蛋白质鉴定的蛋白质组学方法对家蚕幼虫血淋巴在蜕皮前后的蛋白质变化进行研究。【结果】经过蜕皮过程后,家蚕幼虫血淋巴中蛋白质的数量、种类和部分蛋白质的表达量发生了明显的变化：4眠蚕血淋巴中有10个明显的特异蛋白点,5龄起蚕血淋巴中2个明显的特异蛋白点,还有2个蛋白点的表达量发生了明显的上调或下调。经过质谱鉴定,以上14个蛋白点中 有9个具有可信结果,其中4种蛋白被过去的试验证明与蜕皮过程有关,其它5种蛋白质是新发现的与蜕皮过程有关的蛋白质。【结论】化学感应蛋白9、储存蛋白2、抗胰蛋白酶原、酚氧化酶原亚基1和亲环蛋白A、KIF27类蛋白、天蚕素原、副肌球蛋白、神经原钙结合蛋白以及另外5种未被鉴定的蛋白质可能参与了家蚕幼虫的蜕皮过程。     

烟夜蛾血淋巴凝集素活性的研究

利用血凝法检测烟夜蛾Helicoverpa assulta血淋巴对红细胞的凝集活性和不同发育期凝集素水平,同时选取13种糖进行凝集素糖抑制反应,以明确该凝集素与烟夜蛾发育的关系和糖结合特性.研究结果表明,在烟夜蛾的不同发育期均检测有凝集素,但各龄幼虫及不同日龄蛹的凝集活性存在明显差异,雌蛹凝集素水平高于同日龄的雄蛹,表明凝集素与发育期、虫龄及蜕皮过程有关,且与性别相关.烟夜蛾蛹血淋巴凝集素活性与近缘种棉铃虫H.armigera的相类似,均被D-半乳糖、L-鼠李糖、麦芽糖、乳糖明显抑制;D-葡萄糖、D-果糖、L-岩藻糖和蔗糖等也有抑制作用,但抑制程度不同;L-阿拉伯糖与棉铃虫凝集素的专一性结合更强;N-乙酰葡萄糖胺和L-山梨糖只对棉铃虫凝集素有抑制作用,而对烟夜蛾凝集素无抑制作用,说明这2个近缘种的凝集素不完全相同.     

陈艾抑菌活性的初步研究

[目的]研究各种浓度的陈艾提取液和陈艾熏烟对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、青霉3种微生物的抑制作用,为其综合开发利用开辟新的途径。[方法]采用滤纸片扩散法测定各种浓度的陈艾提取液和陈艾熏烟对3种微生物的抑制作用。[结果]陈艾提取液和熏烟对3种微生物都有较明显的抑制作用,抑制效果大小依次为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、青霉,陈艾水提液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和青霉菌的最小抑菌浓度分别为0.033 3,0.028 6,0.040 0 g/ml。[结论]试验证实了陈艾的抑菌作用,对细菌的抑制效果强于霉菌。     

家蝇幼虫离体血细胞感染大肠杆菌后的形态变化

[目的]观察大肠杆菌感染对离体家蝇3龄幼虫血细胞形态的影响,了解参与家蝇幼虫细胞免疫反应的细胞类型。[方法]对家蝇3龄幼虫血细胞进行体外培养,并于培养后2、4、6、8 h对血细胞形态进行观察;离体家蝇3龄幼虫血细胞中加入大肠杆菌菌液,观察感染后不同时间血细胞形态的变化。[结果]家蝇三龄幼虫血细胞培养2 h后可区分血细胞的5种类型,培养6 h后血细胞部分贴壁;感染大肠杆菌后浆血胞发生空泡、细胞变形等变化,粒血胞周围见大量细菌聚集,未见原血胞、珠血胞、类绛血胞形态的变化。[结论]浆血胞和粒血胞是家蝇幼虫细胞免疫反应的主要参与者,而原血胞、珠血胞及类绛血胞不参与细胞免疫反应。     

猪苓提取液体外抑菌活性研究

采用80%乙醇超声提取猪苓,然后将提取物配制成不同浓度梯度的样品溶液,最后用K-B纸片扩散法研究不同浓度的提取液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等的抑菌效果。实验结果表明,猪苓提取液对3种试验菌种均有一定的抑制作用,且抑菌作用随着浓度的增加而增强。通过比较抑菌圈的大小可知,猪苓提取液对枯草芽孢杆菌的抑菌效果最强,其次是金黄色葡萄球菌,大肠杆菌的抑菌效果最弱。