18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物体外抗肿瘤活性研究

本试验研究18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物6c、10c、11c对HeLa、SMMC-7721、SGC-7901细胞增殖的影响。利用MTT法检测18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物6c、10c、11c对HeLa、SMMC-7721、SGC-7901细胞的抑制率;利用Hoechst-33258细胞凋亡染色试剂盒检测细胞凋亡情况;用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;蛋白质免疫印迹法检测相关蛋白表达水平;通过检测Caspases-3的活性进一步说明用药组诱导细胞凋亡的情况。结果表明,18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物6c、10c、11c对HeLa、SMMC-7721、SGC-7901细胞增殖均有抑制作用及促凋亡作用,且呈浓度依赖性,经t检验均有统计学意义(P<0.05)。18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物6c、10c、11c可诱导HeLa、SMMC-7721、SGC-7901细胞凋亡。     

甘草提取物(GC-X)体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用的研究

为了探讨甘草提取物(GC-X)体外对HeLa细胞的促凋亡作用,试验采用MTT比色法观察了GC-X对HeLa细胞增殖的抑制情况,AO/EB双荧光染色法和透射电镜观察了细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪测定了各组细胞的凋亡率。结果表明:GC-X体外对HeLa细胞的生长、增殖的抑制作用具有剂量和时间依赖性,其48 h的IC50仅为11.24μg/m L;AO/EB双荧光染色和透射电镜观察可见,GC-X作用后He La细胞均出现典型的凋亡细胞形态;流式细胞仪检测GC-X对HeLa细胞的诱导凋亡作用呈现明显的浓度依赖性。说明GC-X可抑制HeLa细胞的增殖并具有诱导细胞凋亡的作用。     

华蟾毒精对胃腺癌细胞MGC-803作用的研究

研究华蟾毒精（cinobufagin,CBG）体外对人胃腺癌细胞MGC-803的抑制作用,并初步探讨其抗肿瘤的作用机制。MTT法测定CBG对胃腺癌MGC-803细胞的生长抑制情况;采用光镜观察CBG对人胃腺癌细胞MGC-803形态的影响;流式细胞术检测CBG对MGC-803细胞的抑制作用、细胞周期及细胞早期凋亡的影响。一定浓度范围内CBG对MGC-803细胞的增殖有剂量、时间依赖性抑制作用;光镜下可见细胞形态明显发生变化,细胞变圆,分泌颗粒增多,细胞折光性下降,大部分细胞脱壁;流式细胞仪检测MGC-803细胞,G1期细胞减少,大量细胞停滞在G2/M期,凋亡细胞增多。CBG对MGC-803细胞的抑制作用与诱导其细胞阻滞及凋亡密切相关。     

甘草查尔酮A衍生物对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响

为了探讨以甘草查尔酮A衍生物(4'-甲基-2,4-羟基查尔酮)对Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用和对细胞周期的影响,试验利用MTT、流式细胞术及蛋白免疫印迹法检测4'-甲基-2,4-羟基查尔酮对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用及机制。结果表明:与空白对照组比较,各剂量组(10,20,40μmol/L)的4'-甲基-2,4-羟基查尔酮能有效抑制Lewis肺癌细胞增殖(P0.05),并可显著诱导其细胞凋亡(P0.05),其作用呈时间浓度依赖性;4'-甲基-2,4-羟基查尔酮可使Lewis肺癌细胞的Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达增高,而使Bcl-2蛋白表达降低。说明4'-甲基-2,4-羟基查尔酮能有效抑制Lewis肺癌细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,其机制可能与其改变细胞凋亡的线粒体途径中的Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达水平有关。     

人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理

以不同质量浓度的人参皂苷Rh2与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖抑制作用,并通过流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理.结果显示:人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖存在押制作用,并呈剂量依赖性,人参皂苷Rh2与MSB-1细胞培养72 h后的半敷抑制质量浓度为0.65 mg/L;流式细胞术测定表明,人参皂苷Rh2可阻滞MSB-1细胞于S期;荧光检测和透射电镜观察表明,人参皂苷Rh2可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡.     

人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理初探

以不同浓度的人参总皂苷与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖抑制作用,并通过琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理。实验结果表明:人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖存在抑制作用,并呈剂量-时间依赖性,人参总皂苷与MSB-1细胞培养72 h后的半数抑制浓度为:340.41μg/mL,其95%可信限为:(340.41±33.7)μg/mL。流式细胞术测定表明,人参总皂苷抑制了MSB-1细胞DNA的合成。琼脂糖凝胶电泳分析、荧光检测和透射电镜观察表明,人参总皂苷可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡。     

JA1体外诱导HCC细胞凋亡的实验研究

采用噻唑蓝(MTT)还原法,测定了梯度浓度的某植物种子粗提物JA1对人肝癌细胞株HCC增殖作用的影响;同时采用流式细胞术、DNA凝胶电泳和透射电子显微镜技术,在体外观察了JA1对HCC细胞凋亡的诱导作用。结果显示,JA1可显著抑制肝癌细胞HCC的增殖,而且这种抑制有浓度依赖性和时间依赖性;流式细胞仪分析表明,经JA1作用后的肝癌细胞HCC检测标本中有明显的DNA低含量颗粒(“亚G1期”峰);凝胶电泳呈现出典型的DNA梯形条带;电镜下出现细胞凋亡典型的形态学改变。     

柞蚕蛹虫草抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡的作用

为鉴定柞蚕蛹虫草新的医用价值,将不同浓度的柞蚕蛹虫草水提物(AEoAPC)分别作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,于24、48、72 h后采用倒置相差显微镜和透射电子显微镜观察、四甲基偶唑蓝(MTT)比色及流式细胞术(FCM)检测细胞的增殖和凋亡情况。结果表明:细胞培养板中分别加入质量浓度为0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、5.0 g/L的AEoAPC,均能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现时间剂量依赖性,1.0 g/L AEoAPC处理24、48、72 h后,对SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为18.9%、46.4%、77.2%;经AEoAPC处理后大量癌细胞出现染色质边集和凝聚、核碎裂及凋亡小体;1.0 g/LAEoAPC处理24、48、72 h SMMC-7721细胞凋亡率分别为7.65%、11.04%、23.02%,细胞凋亡程度与AEoAPC作用时间呈正相关,有丝分裂第一间距期(G1)的细胞在AEoAPC作用72 h后分布明显增加。研究结果初步显示,AEoAPC对人肝癌SMMC-7721细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞凋亡影响

为研究顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞CHMp凋亡影响,本试验采用不同浓度的顺铂以不同作用时间处理细胞,用MTT法检测细胞活性,通过透射电镜观察CHMp细胞形态学变化,用流式细胞仪研究CHMp细胞凋亡和周期。结果显示,CHMp细胞生长受浓度和时间双重依赖,浓度越高,时间越长,抑制越明显,在电镜下观察细胞出现明显的凋亡形态,同时5μmol/L顺铂作用24 h后细胞阻滞于G1/S期,比例高达75.12%。结果表明,顺铂能抑制CHMp增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞G1/S期。     

柞蚕蛹虫草水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

研究柞蚕蛹虫草水提物（Aqueous extract from cordycep militaris of antheraea pemyi,AEoAPC）对人乳腺癌细胞MCF-7生长抑制与凋亡的作用.将不同浓度的AEoAPC分别作用于人乳腺癌细胞MCF-7 24、48、72 h后,应用倒置相差显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7的形态变化,噻唑蓝比色法测定细胞生长抑制效应,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率.结果表明：AEoAPC能显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度的依赖性;形态学观察发现,细胞形状不规则、变暗、皱缩;FCM检测结果显示,作用72 h后G0-G1期（DNA合成前期）的细胞分布有所增加,使细胞阻滞于G2期（DNA合成后期）和S期（DNA合成期）;0.8g/L AE0-APC在24、48、72 h凋亡率分别为8.65％、14.20％、26.30％,其凋亡程度与时间呈正相关.说明AEoAPC能明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,诱导其细胞凋亡.     

镰形棘豆乙醇提取物对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

采用细胞增殖试验(MTT法)、Annexin-V/PI双重染色法检测镰形棘豆提取物对体外培养的肝癌细胞增殖抑制及凋亡的影响。结果显示,镰形棘豆提取物可显著抑制人肝癌细胞的增殖活性,尤其当浓度为250μg/mL和500μg/mL时,对肝癌细胞Smmc-7721抑制率均超过了60%,并且高剂量组中处于凋亡早期癌细胞的比率显著高于对照组(P0.05)。结果表明,镰形棘豆提取物对癌细胞增殖有显著的抑制作用,其作用机制可能与其抑制癌细胞增殖活性和诱导癌细胞凋亡有关。     

米托蒽醌通过活性氧诱导大鼠肝癌RH35细胞凋亡的研究

试验旨在探讨米托蒽醌（mitoxantrone,MTN）对大鼠肝癌RH35细胞毒性及其作用机制。以MTT法检测MTN的细胞毒性,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生,Western blotting检测相关蛋白的表达。结果显示,MTN时间和剂量依赖性地抑制RH35细胞的生长;15 μmol/L MTN作用于细胞24、48 h后可使细胞皱缩、变圆,并出芽形成明显的凋亡小体,且其可时间依赖性地诱导凋亡细胞比率的增加及ROS的产生;ROS清除剂NAC可以极显著降低MTN诱导的RH35细胞的ROS的产生和凋亡率（P<0.01）;15 mmol/L NAC可以下调MTN诱导的caspase-3、Bax及CytC表达增加,上调MTN诱导的Bcl-2表达降低。结果提示,MTN通过增加细胞内ROS而诱导RH35细胞发生凋亡。     

JA1对肝癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

采用单管一步完成端粒重复序列扩增(TRAP)法检测肝癌细胞(HepG2)经某豆科植物种子粗提物(简称JA1)不同浓度作用前后和相同浓度、不同时间作用前后端粒酶活性的变化，并采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的改变。结果显示，JA1可显著抑制HepG2的端粒酶活性，而且这种抑制效果有浓度依赖性和时间依赖性。流式细胞仪分析表明，经JA1作用后的HepG2标本中有明显的DNA低含量颗粒(“亚G1期”峰)，表明JA1诱导了HepG2的凋亡，且凋亡率与JA1的浓度和作用时间呈正相关。     

氯前列醇钠对卵巢癌细胞SKOV3体外生长的影响

为观察氯前列醇钠(PG-Cl)对卵巢癌细胞(SKOV3)增殖和凋亡的影响,应用细胞计数法测量癌细胞生长曲线,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞体外增殖情况,吉姆萨染色法细胞观察形态学,Ho-echest-33342凋亡染色法检测加药后细胞凋亡情况。结果显示,PG-Cl对SKOV3细胞抑制率的大小与药物浓度和时间成正比,在高浓度药物作用下效果显著。而在150μg/mL PG-Cl作用12 h后细胞发生凋亡,荧光显示核质固缩呈圆形或椭圆形团块。结果表明,PG-Cl对SKOV3细胞体外生长有显著抑制作用,并诱导细胞发生凋亡。     

二甲基砷酸对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的毒性作用以及诱导细胞凋亡的机制

旨在用类金属毒性物质——砷对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的染毒试验，探索砷对绒山羊皮肤成纤维细胞毒性作用和其诱导细胞凋亡的机制，为后续研究砷对绒山羊皮肤细胞生长的影响提供理论依据。本研究随机选取1只7月龄各项机能正常，体重为25 kg左右的雄性辽宁新品系绒山羊，取其腹部皮肤，进行细胞培养。将二甲基砷酸药物配制成11个不同浓度组（0、0.1、0.2、0.4、0.8、1、5、10、25、50、100 mmol·L^-1），对细胞量为3×10⁴个·mL^-1皮肤细胞进行药物染毒24、48、72、96 h后，经MTT法进行3次重复试验，得到绒山羊皮肤成纤维细胞的增殖与抑制情况以及后续试验所选用的时间点和4个浓度组（对照、促进、临界、半抑制浓度（IC₅₀）），进一步借助免疫荧光检测观察细胞骨架形态变化；彗星试验检测细胞DNA损伤情况；流式细胞仪检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞质与细胞器的变化；测定细胞内荧光染料Mito-Tracker Green的染色强度分析线粒体跨膜电位（ΔΨm）以及观察分析溶酶体的数量情况。结果，24 h时不同浓度的OD值均能明显地反映出二甲基砷酸对绒山羊皮肤成纤维细胞的增殖和抑制趋势，而48、72、96 h时增殖作用逐渐减弱甚至消失，24 h时细胞增殖与抑制效果最佳，因此选取24 h时的对照组（未做任何处理）、促进浓度组（0.8 mmol·L^-1）、临界浓度组（1 mmol·L^-1）、IC₅₀浓度组（38.68 mmol·L^-1）进行后续的试验。24 h时，剂量范围0.1～1 mmol·L^-1的二甲基砷酸促进绒山羊皮肤成纤维细胞增殖，此阶段细胞骨架形态完整，细胞DNA未出现拖尾现象，凋亡率较小，线粒体数目增多，膜结构清晰，嵴致密，形态完整，膜电位升高，溶酶体数量增多；浓度大于1 mmol·L^-1的二甲基砷酸抑制绒山羊皮肤成纤维细胞生长，引起明显的细胞毒性（P<0.01），此时细胞骨架形态发生改变，DNA未出现拖尾现象，凋亡率显著上升，线粒体发生肿胀，形态不规则，嵴断裂溶解，膜电位降低，溶酶体数量减少。IC₅₀组细胞骨架形态差异很大，细胞DNA出现彗星尾，最多最明显（P<0.01），细胞凋亡数目明显增多，膜电位明显降低（P<0.01），溶酶体数量显著下降（P<0.01）。本研究探索了二甲基砷酸对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的毒性作用以及诱导细胞凋亡的机制，表明一定浓度的二甲基砷酸对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞具有毒性作用，并具有进一步诱导细胞凋亡作用。     

caspase-3、caspase-9在醋酸铅诱导NRK细胞凋亡中的作用

将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK分别用0、0.5、1.0、2.0μmol/L醋酸铅作用12h后,MTT法检测不同剂量的醋酸铅对其增殖的抑制率,Annexin V-FITC/PI双染法检测醋酸铅引起的NRK凋亡,罗丹明123检测线粒体膜电位的变化,Western blot检测caspase-3和caspase-9蛋白的表达,以及caspase广谱抑制剂和caspase-9的抑制剂(Z-VAD-FMK和Ac-LEHD-FMK)对醋酸铅诱导细胞凋亡的抑制作用。结果显示,与对照组相比,细胞存活率明显下降(P<0.05或P<0.01),醋酸铅明显抑制NRK细胞增殖,且呈一定剂量效应,IC50为(2.44±0.32)μmol/L;凋亡检测表明,随着醋酸铅浓度的升高,细胞凋亡现象越明显;明显减低线粒体膜电位;激活体caspase-3和caspase-9的表达水平呈剂量依赖性增加;caspase抑制剂能显著抑制醋酸铅诱导的细胞凋亡。结果表明,醋酸铅抑制NRK细胞增殖,可能通过激活caspase依赖性的线粒体信号通路而诱导NRK细胞凋亡。     

CdCl_2诱导家蚕细胞(BmN)凋亡的研究

为探讨重金属诱导家蚕细胞凋亡机制 ,用不同浓度的CdCl2 ,对家蚕细胞 (BmN)进行诱导 ,并采用Giemsa染色形态学方法 ,研究其细胞凋亡。结果表明 :由于重金属离子的胁迫作用 ,不同浓度下其细胞死亡率不同 ,36μmol/LCdCl2 作用 2 4h ,BmN细胞出现了细胞核周边化及凋亡小体的现象     

紫草素对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

为了研究紫草素对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,试验以SMMC-7721为研究对象,利用倒置显微镜观察细胞的形态变化,通过体外细胞毒性试验(MTT)比色法和流式细胞仪检测紫草素处理前后对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和诱导细胞凋亡的作用。结果表明:在紫草素作用下,SMMC-7721形态发生改变,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率为(19.00±1.31)%和(23.04±1.25)%。说明紫草素对肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的凋亡诱导作用,为抗肿瘤药物的研究提供了理论基础。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导血管内皮细胞凋亡及其凋亡相关因子的初步研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）是由镰刀菌属病原真菌产生的真菌毒素之一,在自然界广泛存在,可引起人畜中毒。为了解DON对血管内皮细胞的危害及其可能机制,本试验采用不同浓度的DON（0.25-10μg/mL）作用于猪髋动脉内皮细胞（PIEC）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）2种细胞24 h,倒置显微镜下观察其形态变化,MTT法测定细胞增殖的变化,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色方法测定细胞凋亡过程中Caspase-9和Bax表达的变化。结果显示,高浓度DON可明显改变细胞的形态;不同浓度的DON均可抑制细胞的增殖;TUNEL凋亡检测结果显示,不同浓度的DON对这2种细胞均有诱导凋亡的作用;对于PIEC细胞,在DON浓度为0.5μg/mL时,凋亡率达到最高（71.74%）;HUVEC细胞则在DON浓度为5μg/mL时,凋亡率达到最高（26.61%）,此后随浓度的升高,凋亡率下降,可能与凋亡细胞崩解脱离细胞片有关。根据试验结果初步推断,DON诱导PIEC凋亡可能与Caspases途径有关,Bax在其中起到了一定的凋亡促进作用;而在诱导HUVEC细胞凋亡的过程中未检测到Caspase-9和Bax的变化,故认为DON诱导HUVEC细胞凋亡与Caspases途径和促凋亡因子Bax均无关。     

土槿皮乙酸B增加活性氧水平诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和衰老的研究

本研究旨在研究土槿皮乙酸B(PAB)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和衰老与活性氧的关系。在相差显微镜下观察4 μmol/L PAB在36 h诱导细胞凋亡小体的出现;LDH方法显示PAB时间依赖性的增加凋亡比率;SA-β-半乳糖苷酶显示4 μmol/L PAB作用3 d后,去药再作用5 d,96%的细胞蓝染,细胞变大且扁平;流式细胞仪检测用DCFH-DA染色后4 μmol/L PAB 时间依赖性增加细胞内活性氧水平。所以4 μmol/L PAB通过增加细胞内活性氧水平促进细胞凋亡和衰老。