鲍鱼酶的制备和应用试验

从鲍鱼的消化器官中提取裂解酶 ,比较了胃、肠和消化腺中酶的活力 ,并用于海带、裙带菜和条斑紫菜的单细胞分离。结果表明 :三种器官中裂解酶的活力依次为消化腺 ＞肠 ＞胃 ,用以酶解上述三种藻类组织的单细胞 ,得率分别为 8.7× 10 ⁶i/g、7.2× 10 ⁶i/g、4 .6× 10 ⁶i/g。     

基于酶技术生产低黏度及超低黏度褐藻胶的工艺

为解决当前低黏度及超低黏度褐藻胶生产工艺中存在的不足,本实验以海带为原料,利用褐藻胶裂解酶降解制备低黏度及超低黏度褐藻胶,研究了分子量、p H、温度对黏度的影响,确定了碱消化的最佳条件,探究了酶解工艺中加酶量、酶解时间及原料的初始黏度对褐藻胶产品的影响。结果显示,通过控制加酶量(100~500 U/g),酶解30 min即可得到低黏度及超低黏度褐藻胶,其中加酶量为100~330 U/g时可得到低黏度褐藻胶,加酶量增加至330~500 U/g时,可得到超低黏度褐藻胶,且酶解法得到的褐藻胶样品分子量均一度高,工艺节水率高达10%~50%;同时研究发现酶解样品黏度与原料初始黏度相关性不大,只在较短时间内表现出相关性,该工艺具有较高的原料适用性。     

褐藻酸降解菌对海带配子体克隆的作用及其药物防治研究

通过回染实验，确认褐藻酸降解菌是海带配子体克隆病害的主要致病菌；观察了对其海带配子体克隆细胞侵染的现象，并研究了抗生素对海带配子体克隆细胞和褐藻酸降解菌的作用，发现0．5－100mg/L青霉素对配子体克隆细胞的生长有一定促进作用，实验范围内各浓度青霉素对褐藻酸降解菌均有较好的抑菌效果，且抑菌效果随浓度的提高而加强。其中100mg/L青霉素10d内可将褐藻酸降解菌浓度降低到初始浓度的1／20以下，可作为海带配子体克隆保存中有效的抑菌药物。     

海带对褐藻酸降解菌的抗性与其抗氧化能力的相关性分析

采用生物化学的方法测试 2个品系的海带 (Laminariajaponica)对褐藻酸降解菌抗性的差异性 ,并对其抗氧化能力进行研究 ,旨为海带烂病的防治提供生物学基础依据。结果表明 ,1)海带荣城 1号对褐藻酸降解菌的抗性远高于海带 90 1;2 )海带荣城 1号细胞内 2种抗氧化酶 -超氧化物歧化酶 (SOD)和过氧化物酶 (POD)的活性明显高于海带 90 1;而另一种抗氧化酶—过氧化氢酶 (CAT)的活性与海带 90 1相比没有明显的差别 ;3 )海带荣城 1号的脂溶性抗氧化能力同样明显高于海带 90 1。说明海带的抗氧化能力与其对褐藻酸降解菌的抗性有一定的相关性。     

枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质

构建了枯草芽孢杆菌CH_2菌株(Bacillus subtilis CH_2)壳聚糖酶基因的真核表达载体p PIC9K-CH2-Cns,在毕赤酵母GS115(Pichia pastoris)中进行重组表达,获得了有生物学活性的重组壳聚糖酶,对重组壳聚糖酶的酶学特性及酶解产物进行了分析。结果显示,重组壳聚糖酶的分子量为29 k D,粗酶的比酶活达到133.60 U/mg,纯化后重组蛋白的比酶活为338.08 U/mg;该酶的最适作用温度为50℃,最适pH为4.5,酶动力学常数Vmax=24.39(μmol/mg)·min~(-1),Km=5.48 mg/m L;Fe2+、K+等对其酶活力有一定的激活作用,其中Mn~(2+)能使酶活力提升2.4倍,Ag~+、Mg~(2+)、Hg~(2+)、EDTA、EGTA和SDS等存在时则对其酶活力有强烈抑制作用。利用重组壳聚糖酶酶解壳聚糖,酶解产物主要为聚合度2~10的壳寡糖,且分布均匀。以上结果表明,枯草芽孢杆菌CH_2菌株壳聚糖酶基因在毕赤酵母GS115中成功表达,获得了一种内切型的高酶活力重组壳聚糖酶,该重组酶具有反应条件温和、酶解产物均一等特点,可被应用于海洋甲壳质加工应用中。     

海洋细菌来源低温褐藻胶裂解酶的分泌表达和酶学性质研究

为了筛选稳定性较好的低温褐藻胶裂解酶,本研究进行了海洋细菌分离鉴定、酶的编码基因克隆与分析、酶分泌表达与纯化、不同因素对酶活力和稳定性的影响以及酶解产物分析实验。结果显示,用以褐藻胶为唯一碳源的平板,筛选出一株能分泌低温褐藻胶裂解酶的海洋细菌SJ-H-12,基于16S rDNA序列构建进化树,该菌株鉴定为Yangia sp. SJ-H-12。进而克隆酶的编码基因Alyya,ALYYA属于PL5家族褐藻胶裂解酶。将基因在食品级宿主解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)中进行分泌表达,重组ALYYA的活力达到34.2 U/mL,分子量约为39.0 kDa,具有较强的PolyM偏好性。ALYYA在25℃~35℃时表现出80%以上的活力,且在30℃时表现出最高活力;在pH为5.0~10.0的范围内稳定性较好,孵育后剩余超过60%的活力;0~2.0 mol/L的NaCl能明显激活ALYYA的活力。ALYYA降解褐藻胶的产物主要是二糖,另有少部分单糖和三糖,该酶是一种内切褐藻胶裂解酶。综上所述,本研究筛选到一株产低温褐藻胶裂解酶细菌,所产ALYYA是典型的低温褐藻胶裂解酶,具有优良的酶活力和稳定性。本研究为低温褐藻胶裂解酶的筛选和开发利用提供了参考数据。     

酶法由罗非鱼加工废弃物制取调味料的研究

为了解决大量的罗非鱼加工废弃物的出路,采用酶技术将罗非鱼加工废弃物进行酶解,制备营养型高档调味料。通过正交试验,确定了以菠萝酶和Flavourzyme混合水解,其最适条件为:固液比1∶1,自然pH,50℃下,菠萝酶(酶活力6·8万U·g-1)加入量为2250U·g-1,水解3h,再加入Flavourzyme(酶活力0·37万U·g-1),加入量为750U·g-1水解2h,水解度达到80%。将酶解液30%与淀粉6·5%,黄原胶0·2%、老抽酱油8%等辅料相调配,制成风味独特,高附加值的新型营养调味料。     

甲壳素对海带产量结构及品质的影响

在海带夹苗放养时,分别用150×10-6,200×10-6,250×10-6甲壳素浸苗2h,均可不同程度地提高海带的产量,增加藻体内甘露醇、褐藻酸、碘、可溶性糖、蛋白质、核酸等含量,并可提前收获10～15d.以200×10-6甲壳素处理2h效果最好。     

紫外诱变原生质体选育溶菌酶高产菌株的研究

以1株产海洋溶菌酶活性较高的菌株（S_12-86）为原始菌株,对其原生质体的制备、再生及紫外诱变育种进行了研究。实验所确定的原生质体的最佳制备条件为：菌株S-12—86培养18h,溶菌酶浓度为1．0mg／ml,在35℃下,酶解30min,原生质体形成率为97．6％,再生率为23．6％。同时实验所确定的原生质体诱变的适宜条件为：30w紫外灯下80cm照射120S。对大量再生突变株进行筛选,最终获得了1株遗传性能稳定的菌株R—J—i01,其产酶活力达到1808U／mg,比原始菌株（1290U／mg）提高了40％。     

羊栖菜Sargasum_fusiforme原生质体的分离和培养

本研究多次获得原生质体，明确了酶解原生质体的内在因素与外在条件，诸如酶溶剂的种类及浓度，酶及组成，酶解温度及ｐＨ，采种藻时间及取用部位。分离的原生质体经初步培养，发现少数２分裂，最好的有成６分裂的细胞团，但尚未成株。研究结果为扩大培养打下了良好的基础。此外，还报道了用海洋细菌酶解的试验及意义