苹果属皱叶型植株实生后代倍性鉴定研究

利用染色体计数方法和流式细胞仪对皱叶型植株的13株实生后代进行了倍性鉴定.结果表明:实生后代苗中出现皱叶和光叶2种类型,2种鉴定方法获得的结果一致.实生后代中出现二倍体、三倍体和四倍体.其中8株光叶型全部为三倍体,5株皱叶类型中1株二倍体,3株三倍体和1株四倍体.这为丰富苹果无融合生殖砧木的育种理论,获得新的无融合生殖砧木提供有益的借鉴.     

三倍体葡萄种质创新及倍性快速鉴定

 以二倍体葡萄品种玫瑰香、红地球、摩尔多瓦、无核奥迪亚及四倍体葡萄品种巨峰为亲本进行杂交授粉,对杂种进行胚培养,成株率最高可达30.6%。对杂种后代用流式细胞仪初选,确定30个杂交后代为三倍体植株。组合不同,获得三倍体植株的比例不同,目前获得的225个胚培养的葡萄杂种后代全部栽入大田。     

日本富士苹果的后代品种

富士虽具有产量高、风味好、耐贮优的特点,但仍存在着色难和个别有梗裂的缺点.为利用其优点,改变其缺点,各研究单位均以富士为亲本进行育种,培育出很多富士的后代,现将已发表的简述如下.     

应用气孔性状对苹果与梨的倍性判别分析

以苹果和梨的二倍体和多倍体为试材,比较了气孔保卫细胞叶绿体数目,气孔密度,气孔长和气孔宽四个性状与倍性的关系,分析各个性状用于倍性鉴定的可靠性,并采用两类性状同时进行判别分析,建立判别分析方程。结果表明,叶绿体数目和气孔长鉴定倍性的可靠性较高,其中,苹果气孔误判率最低,为６．６７％;梨气孔保卫细胞叶绿体数目误判率最低,为１２．５％。     

利用苹果花粉粒形态进行倍性鉴定

以苹果１０个二倍体和５个三倍体品种为试材,对不同倍性品种产生的花粉粒形状和大小进行了比较。结果表明：（１）倍性间不同形状花粉粒分布明显不同,二倍体品种三角形花粉粒数目多,而三倍体品种三角形花粉粒数目少;三倍体品种圆形及方形花粉粒数目均大幅增多;计算三角形花粉粒数目与圆形花粉粒及方形花粉粒数目之和的比值发现,倍性品种间差异较大,该比值１．２可作为鉴定倍性的临界值。（２）三倍体同一形状花粉粒大小比较分散,二倍体则相对集中,三角形花粉粒中等大小花粉粒数目与大花粉粒及小花粉粒数目之和的比值在倍性间存在明显差异,该比值２．５０可作为判别二倍体与三倍体的临界值。利用这两个指标对诱变植株产生的花粉粒形状和大小进行了比较,对孢原组织细胞的倍性水平进行了估计。     

应用气孔性状对苹果与梨的倍性判别分析

以苹果和梨的二倍体和多倍体为试材,比较了气孔保卫细胞叶绿体数目、气孔密度、气孔长和气孔宽四个性状与倍性的关系,分析各个性状用于倍性鉴定的可靠性,并采用两类性状同时进行判别分析,建立判别分析方程。结果表明,叶绿体数目和气孔长鉴定倍性的可靠性较高,其中,苹果气孔长误判率最低,为６．６７ ％ ;梨气孔保卫细胞叶绿体数目误判率最低,为１２．５ ％ 。如以这两个性状进行判别分析,苹果判别方程鉴定倍性的可靠性与以气孔长鉴定倍性的可靠性相似,梨的判别方程可大大提高鉴定的可靠性     

以柑橘多胚性二倍体母本倍性杂交培育三倍体

2009-2012年,以柑橘8个多胚性二倍体品种为母本与近年始花的5个异源四倍体体细胞杂种和1个同源四倍体分别杂交,培育三倍体新种质。连续4年共配置15个杂交组合,授粉4 442朵花,坐果1 484个,平均坐果率33.4%;用于幼胚挽救的果实1 075个,共培养幼嫩种子12 578颗,经生芽、生根诱导获得再生植株2 832个;以流式细胞仪对所有再生植株倍性检测,15个组合共获得三倍体401个,四倍体121个;移栽成活三倍体349个,四倍体98个。对W. 默科特 × NH组合89个株系的三倍体的SSR分子鉴定表明,所有三倍体后代均为双亲的有性杂种。     

芽变红地球葡萄的倍性结构鉴定

芽变红地球葡萄是新近发现的自然变异新种质。为搞清其倍性结构,以芽变红地球、红地球为试材,根据组织发生层学说推断材料的倍性结构。测定保卫细胞大小和统计叶绿体数目的试验表明,芽变红地球保卫细胞长略大于红地球,宽略小于红地球;保卫细胞中的叶绿体粒数,芽变红地球为11.35个,红地球为10.63个,均没有显著差异,从而推断芽变红地球的L1层为二倍体。测定花粉粒大小的试验结果表明,芽变红地球花粉粒长度为35.46μm,宽度为22.95μm,红地球的花粉粒长度为33.03μm,宽度为18.04μm,存在显著差异,表明芽变红地球的LⅡ层为四倍体。根尖染色体数目观察结果表明,芽变红地球的染色体数目为2n=4x=76,红地球的为2n=2x=38,表明芽变红地球的LⅢ为四倍体。另外,通过对梢端切片观察,芽变红地球的LⅠ层的细胞与红地球的没有明显差异,而LⅡ、LⅢ则显著大于红地球。由此证明,芽变红地球的倍性结构为2-4-4型,为周缘嵌合体。     

三倍体葡萄柚实生后代多倍体的发掘与SSR遗传鉴定

【目的】从三倍体葡萄柚自然授粉的实生后代中发掘多倍体,希望获得一批多倍体新种质,并为探索三倍体遗传规律奠定基础。【方法】秋季采摘三倍体葡萄柚成熟果实,剥取种子,MT+1 mg·L-1GA3培养基播种,待种子萌发后,用流式细胞仪快速检测其倍性,并采用SSR(simple sequence repeat)分子标记鉴定其不同倍性后代植株的来源。【结果】获得了二倍体、三倍体、四倍体、五倍体、六倍体和疑似非整倍体等不同倍性的再生植株各172、52、7、1、1、18株。用13对多态性SSR引物鉴定其来源,结果表明,由二倍体可能三倍体母本所产生的1X配子与周边其他二倍体品种的花粉授粉而来,也可能由三倍体母本产生的重组型2X配子的无融合生殖而来;三倍体大部分由珠心细胞发育而来;四倍体为杂交起源的四倍体;五倍体和六倍体与母本(三倍体葡萄柚)的带型完全相同。【结论】上述活体材料的发掘为柑橘多倍体育种奠定了种质基础。     

苹果花药培养植株倍性及其纯合基因型的鉴定

用倍性分析仪对3株苹果花药培养植株进行了倍性鉴定, 并用AS2PCR分子标记分析其是否为纯合体。流式细胞法测定其倍性分别为二倍体、三倍体和四倍体; AS2PCR分析证明它们为纯合基因型。可认为花药培养植株的多倍化现象可能是在组织培养条件下, 由起源于单倍体的细胞发生自然加倍所形成的结果。     

苹果苗木机械化起苗技术研究进展

苹果苗木的根系质量直接影响苗木栽植建园后的生长发育,机械化起苗能有效保证苗木根系完整、规格一致,近年来成为实现苗木高标准生产的重要措施.对机械化起苗技术与装备研究进行整理总结,包括应用三维数字建模技术与仿真技术对起苗机关键部件进行结构设计与优化,借鉴细观力学分析土壤结构破坏原理,总结联合起苗机国内外发展情况,通过田间起...     

基于SRAP的三倍体无子西瓜品种指纹分析和杂种纯度鉴定

为了解三倍体无子西瓜品种SRAP(Sequence-Related Amplified Polymorphism)扩增特点及其在三倍体西瓜杂种纯度鉴定中的适应性,利用SRAP引物组合对当前生产上推广的9个三倍体无子西瓜品种进行了指纹分析和杂种纯度鉴定研究。结果表明,1)30对引物组合中筛选出多态性引物组合24对,共产生109条多态性带,平均每对引物组合产生多态性带4.5条,单个组合的多态性比率在12.5%～80%。2)结合多对SRAP引物组合,可以鉴别不同品种。3)在黑蜜5号及其父母本的指纹分析中,发现有1对引物组合(ME4/EM3)在黑蜜5号杂交种上扩增出了特异的条带,可以区分母本和杂交种,试验证明该引物组合能够用于黑蜜5号的杂种纯度鉴定。     

苹果芽变选种鉴定及应用研究

芽变选种具有育种周期短、育种进程快的特点,是种质资源创新的重要途径。从形态学、解剖学、同工酶、孢粉学、染色体观察、生理生化特性及分子标记等方面对芽变鉴定的常规方法进行了综述,认为叶片栅栏组织比例、气孔密度、孢粉形态等是芽变品种鉴定的重要指标,同工酶技术及分子标记技术是芽变品种鉴定的重要手段。进一步对芽变发生的遗传类别及分子机理进行了初步探讨,对芽变选种的应用前景进行了展望。     

苹果叶片离体培养中秋水仙素加倍效应的研究

用不同浓度的秋水仙素溶液处理苹果的栽培品种嘎拉试管苗的离体叶片,发现以０．５％的秋水仙素溶液处理４ｄ效果最佳,诱变频率达５６．１％。诱变后获得的四倍体植株在形态学和细胞学上均发生了明显变异。与对照株比较,变异株茎矮、粗壮、节间短、叶片厚、叶色浓绿;叶背面的气孔体积增大,单位面积气孔数目减少、茸毛数量增加;染色体数目加倍,２ｎ＝４ｘ＝６８（对照２ｎ＝２ｘ＝３４）,细胞核核仁数目增加。梢端组织学切片证明,变异株中同质突变体的频率达７３％。     

新红星苹果花芽蛋白质提取及双向电泳的改良方法

以新红星苹果花芽为材料,探索适合蛋白质的提取方法及其双向电泳的条件。采用物理和化学2种方法充分裂解植物组织细胞,并用低温操作加入PVP等去除植物大量的酚类物质,最后离心去除不溶性杂质的苹果蛋白质组双向电泳(2-DE)样品制备方法,第1向为ISO-DALT等电聚焦,第2向为垂直平板SDS-PAGE。通过对样品制备、双向电泳参数的选择及染色等方面进行优化,电泳图谱可分辨出蛋白质斑点数在519个以上,蛋白质相对分子质量约为14.0～97.0ku,主要分布为14.0～67.0ku;等电点约为3.5～9.0,主要分布在4.0～7.0。     

小白菜小孢子培养再生植株的倍性与基因组DNA甲基化的关系

对小白菜品种进行游离小孢子培养,得到9株再生植株,其中2株为单倍体,7株为二倍体,二倍体自然加倍率为77.7 %。为 避免材料间差异,取单倍体和二倍体再生植株各2株,提取单株DNA,分别构建单倍体和二倍体DNA混合池。利用甲基化敏感性限制性 内切酶-PCR法,结合SRAP分子标记技术,对2个DNA混合池进行筛选,共筛选768对引物,只有在未酶切的单倍体和二倍体DNA池中SRAP 引物扩增无差异,而酶切后有差异的条带,才认为是单倍体和二倍体甲基化差异。试验共获得8对含有多态性的引物,试验结果证明 小白菜小孢子培养获得的再生植株的倍性与基因组DNA甲基化有关。     

云南泸西苹果病虫害调查与病原及害虫鉴定

云南红河州泸西县为云南重要的苹果新产区,调查鉴定泸西县苹果病虫害的发生情况,对泸西县的苹果病虫害防控,苹果产业发展具有重要意义。本研究系统调查和鉴定了云南红河州泸西县向阳乡习峨村、三塘乡、向阳乡沙马村等3个苹果产区的病虫害。通过室内病原显微观察,对真菌病原进行形态鉴定,应用RT-PCR检测技术与测序鉴定病毒,害虫形态鉴定。最终结果表明:云南泸西苹果病虫害共8种,其中真菌病害3种,有斑点落叶病、枝干轮纹病、褐斑病;病毒病害2种,有苹果茎沟病毒病、苹果花叶病毒病;虫害3种,蚜虫、蓟马和金纹细蛾3种虫害。其中斑点落叶病和褐斑病为主要病害,病毒病害其次,虫害发生率较小。其次通过调查与鉴定,否定了危险性病害苹果炭疽叶枯病在云南泸西的存在。     

树脂法吸附分离苹果汁中多酚物质的研究

通过树脂的筛选、吸附和解吸条件的优化等对树脂法分离提取苹果汁中多酚物质进行了研究。结果表明,XDA-5树脂为吸附分离苹果汁中多酚物质的优良材料,其吸附最适温度为40℃,适宜的洗脱剂为80%乙醇溶液。在此基础上结合苹果浓缩汁加工工艺提出了一条分离提取苹果多酚的新途径。根据该方法制备的苹果多酚提取物中总酚含量可达到96.72%。该方法既能提高苹果浓缩汁的品质和稳定性,又实现了资源的充分利用。     

云南苹果产区苹果茎沟病毒(ASGV)的发现及其分子变异

【目的】为了查明云南省苹果产区的苹果茎沟病毒病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的侵染情况和不同来源分离物间的分子变异情况,【方法】以云南昭通、丽江、昆明、曲靖等地采集的325份苹果病毒样品为试材,采用RT-PCR技术对其是否携带ASGV进行检测,运用DNAMAN6.0、MEGA5.0对实验获得的6个分离物和GenBank上已登录的34个分离物进行序列比对分析。【结果】ASGV在云南各大苹果产区的发病率高达48%。序列比对结果显示,这些分离物的核苷酸序列相似性为87.3%～93.8%,氨基酸序列相似性为90.7%～98.7%。系统发育树显示,云南的6个分离物聚为一簇,而陕西省苹果分离物YL06与云南省分离物ZT1、TJX1亲缘关系比较近,聚为一支;ASGV苹果分离物要明显区别于ASGV梨分离物和CTLV柑橘分离物。【结论】云南省苹果产区苹果树的ASGV带毒率高达48%,推测可能是一种发生率比较普遍的病毒病,这是云南省发现的首次报道。系统发育树显示:本研究获得的6个苹果分离物明显区别于其他寄主分离物,并且与其他地区的分离物具有一定差异,推测在我国,ASGV的分子变异与寄主/地域来源存在着一定的相关性。     

平邑甜茶后代双胚苗的倍性鉴定及核型分析

为了确定平邑甜茶双胚苗的倍性特征和核型特点,采用压片和流式细胞仪观测的方法对平邑甜茶后代中双胚苗进行染色体倍性观察和核型分析。结果表明:4株供试材料均为三倍体,2n=3x=51,染色体为小型,染色体长度比差异不大;核型组成由中部着丝点染色体(m)和亚中部着丝点染色体(sm)组成;株系8-1、8-2、12-1和12-2的核型公式分别为2n=3x=45m+6sm,2n=3x=48m+3sm,2n=3x=27m+24sm,2n=3x=33m+18sm;染色体相对长度和着丝点指数的变异范围分别为1.21%～2.68%和34.19%～42.37%,1.44%～2.63%和35.59%～44.08%,1.36%～3.02%和32.85%～42.18%,1.43%～2.87%和34.23%～44.02%;核型分别属于1B、1A、2B和1B类型,表现为株系之间的核型不完全相同。本研究为丰富无融合生殖型砧木的育种理论,获得新的苹果无融合生殖型砧木提供有益的借鉴。