牛胚胎体外生产质量控制

牛胚胎体外生产质量控制就是在常规实验的基础上 ,避免额外因素对胚胎体外生产造成影响。本文从实验记录、卵母细胞、精液、培养条件、胚胎质量等方面分析讨论了牛胚胎体外生产中的质量控制     

牛胚胎工厂化生产的质量控制措施

牛的胚胎工厂化生产是通过对牛施行活体采卵,获取卵母细胞,在实验室内对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,使受精卵在体外发育培养至囊胚阶段。对胚胎的质量检查,目前只能凭其形态进行评估分级,而对胚胎的内在质量却不易判断,在胚胎出厂前无法严把质量关,因此,在胚胎生产过程中实行严格的全程质量控制显得尤为重要。1建立严格的技术管理体系1.1制定严格的规章制度和操作规程严格的技术管理是质量控制分析的基础,必须制定切实可行的供体牛饲养管理制度、卫生防疫制度、实验室规章制度、各类人员岗位责任制度、技术档案资料管理制度及胚胎工厂…     

牛胚胎质量的鉴定和移植效果的分析

牛胚胎质量的鉴定和移植效果的分析黑龙江省安达市畜牧局牛胚胎移植课题组（１５１４００）李国江，徐万库，杨维国，魏梅松牛胚胎移植成功率的高低，除取决于技术熟练程度和受体牛的内在因素外，鉴别选用优良的胚胎是一个很关键的环节。特别在微观下，鉴别鲜胚或冻胚的质...     

牛胚胎的体外生产技术

应用体外受精技术,可以有效地利用淘汰的高产奶牛和屠宰的青年母牛卵巢中的未成熟卵,大量,廉价地实验室生产胚胎,这对加速我国高产奶牛群和良种肉牛群的繁殖,是一项行之有效的胚胎工程技术,借鉴国外实验室生产牛胚胎的经验和根据我们实验室的实践,本文比较详细地叙述了体外受精牛胚胎（试管牛）的生产过程,包括卵母细胞的获得,培养,精子获能,体外受精以及受精后的胚胎培养,超低温冷冻保存与解冻后的胚胎移植等。     

提高供体牛生产胚胎数研究概况

提高供体牛生产胚胎数研究概况黄志坚（福建农业大学动物科学系,３５０００２）胚胎移植需要大量的可用胚胎。现就有关提高供体牛生产胚胎效率的最新研究作一简介：１．用快速乳孕酮测定法（ＲａＰｉｄＭｉｌｋＰｒｏｇｅｓ－ｔｅｒｏｎｅＡｓｓａａ,ＰＭＰＡ）作为选择...     

试管牛胚胎的实验室生产过程

应用体外受精技术，可以有效地利用淘汰的高产奶牛和屠宰的青年母肉牛卵巢中的未成熟卵，大量、廉价地实验室生产胚胎。这对加速繁殖我国高产奶牛群和良种肉牛群，是一项行之有效的胚胎工程技术。根据国外实验室生产牛胚胎和我们实验室的实践，比较详细地叙述了体外受精牛胚胎（试管牛）的生产过程，包括卵母细胞的获得、培养，精子获能、体外受精以及受精后的胚胎培养、超低温冷冻保存与解冻后的胚胎移植     

体外生产的牛胚胎超微结构的研究

利用两种常规体外培养系统研究了体外培养及不同培养条件对牛体外受精胚胎早期发育各时期超微结构的影响。结果显示：体外发育的牛胚胎在发育的各个时期（从原核期到囊胚）胞质中均含有丰富的脂滴，胚胎中特别是在桑椹胚及囊胚阶段可见到一些异常细胞。两系统下发育的胚胎中脂滴形态不同，从桑椹胚阶段开始，胚胎线粒体的发育在M199-BOEC-FCS培养系统中明显滞后于其在SOFaa-BSA培养系统中的对照。     

提高牛胚胎体外生产效率的研究进展

作者从采卵率、卵母细胞成熟率、受精率、胚胎发育率、胚胎冷冻解冻后生存率等方面综述了提高牛胚胎体外生产效率的研究进展。     

牛胚胎采集技巧

胚胎采集技术在胚胎移植的一系列复杂过程中占有重要位置,正确掌握和运用胚胎采集技术,是顺利获得胚胎、保证胚移成功的关键和基础。笔者从1985年开始从事牛胚胎移植工作,先后3次接受美国专家技术培训,进行胚胎采集模拟练习60多头次,参加正式胚移试验5次,在65头供体牛上进行的超排、采胚,采卵率(采卵数/黄体数)平均为78.6％。个人最好成绩是在10头供体牛上采得卵115枚,头均11.5枚,其中可用胚72枚,头均7.2枚,移植成活牛犊13头。现将胚胎采集的方法及技     

我国牛胚胎工程技术研究与应用进展

本文就牛胚胎工程技术的研究成果,实际应用现状及研究新进展等方面进行了综合论述,并就这一高新技术产业化建设中的问题与对策发表了自己的看法。     

牛胚胎移植技术的研究与应用

本文总结了牛胚胎移植技术在国内外的研究与发展概况,同时从供、受体母牛的选择与饲养管理、供体的超排、发情鉴定与配种、受体的同期发情与发情鉴定、胚胎的收集与质量鉴定、胚胎的移植等方面对牛胚胎移植技术的具体操作过程作了较详尽地论述,最后阐述了牛胚胎移植存在的问题与发展前景。     

影响牛胚胎移植效果的因素分析

近年来,胚胎移植技术在我国发展迅速,并在生产中得到了一定的应用,但由于费用比较高,且移植成功率受到很多因素影响,使其推广受到了很大限制。本文就牛胚胎移植过程中影响其移植成功率的几个方面因素,包括供体和受体牛的选择、供体和受体牛的同期发情程度、胚胎质量、移植者的技术操作水平、受体牛的饲养管理以及移植季节等作一综述。     

牛早期胚胎体外发育条件的研究

本试验研究了精卵共育时间和培养液等因素对牛早期胚胎体外发育的影响。精卵共育6～12h能显著提高受精卵的囊胚发育率,受精卵的囊胚发育率为23．2％～25．3％,共育时间为24h时,囊胚发育率降低,但精卵共育6h时卵裂率较低;TCM199、mBECMaa、mSOFaa均能支持体外受精卵的发育,其囊胚发育率分别为18％、30．7％和29．2％。试验结果表明：精卵于BM受精液中共育9h后,将其置于添加5％OCS的mBECMaa或mSOFaa中培养,能得到较高的体外生产胚胎的囊胚发育率。     

牛早期胚胎发育影响因子研究进展

早期胚胎的死亡给畜牧业的发展带来了巨大的经济损失,本文分析了影响牛早期胚胎发育的诸多因素,阐述了黄体功能对早期胚胎发育的影响,指出生长因子和细胞因子可能是非人为因素中早期影响胚胎发育的最重要的因素。     

体外成熟对牛卵母细胞孤雌激活后发育潜力的影响

本试验在卵母细胞体外成熟的研究基础上,研究了培养用水、卵泡液和成熟时间对卵母细胞体外成熟及孤雌激活后发育潜力的影响.结果表明(1)将卵母细胞分别于蒸馏水和Milli-Q超纯水配制的成熟培养液中培养22～24 h, 孤雌激活后, 卵裂率无显著差异(P>0.05); 但孤雌卵在超纯水配制的胚胎培养液中培养,囊胚发育率为22.3%, 明显高于在蒸馏水配制的培养液中的囊胚发育率14.1%(P<0.05).(2)在成熟培养液中添加10%、20%卵泡液,成熟卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率(32.3%, 30.9%)明显高于添加5%和0%卵泡液组的囊胚发育率(21.8%, 22.7%,P<0.05).卵母细胞在添加20%卵泡液的培养液中成熟培养,孤雌激活后囊胚孵化率明显低于添加0、5%、10%卵泡液组的囊胚孵化率(P<0.05).(3)成熟28 h或30 h的卵母细胞孤雌激活后,其囊胚发育率(30.5%或29.4%)明显高于成熟24 h或26 h组的囊胚发育率(20.5%或22.1%,P<0.05).     

常规PCR和巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别体系的建立和优化

试验利用牛Y染色体重复序列作为雄性特异性引物,_以肿蔼坏死因子(TNFα)为内标引物建立多重PCR和多重巢式PCR体系,进行牛早期胚胎性别鉴定.共设计4对引物-Y染色体重复序列外引物和内引物,其扩增片段大小分别为534 bp和480bp,肿瘤坏死因子外引物和内引物,扩增片段大小分别为357 bp和272 bp.结果表明,4对引物均有很高的特异性和稳定性;多重PCR体系灵敏度为50 pg(约8个细胞),多重巢式PCR体系灵敏度为10 pg(约2个细胞),故多重巢式PCR体系更适合于牛胚胎性别鉴定.     

生物频谱对牛胚胎体外生产效率的影响

本试验利用可调式周林生物频谱发生器对牛卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养过程实施辐射 ,以提高牛胚胎体外生产效率。频谱发生器与培养材料的距离为 5cm ,辐射强度根据辐射温度加以调节。实验结果表明 ,辐射温度控制在 39℃时 ,入孵卵母细胞的卵裂率 ( 63% )与对照组 ( 61 % )无显著差异(P >0 0 5) ,而囊胚发育率 ( 39% )显著高于对照组 ( 1 9% ) (P <0 0 5) ;当辐射温度达到 4 0℃时 ,实验组的卵裂率仅为 1 4 % ,囊胚率为 0。体外受精生产的囊胚用EFS4 0液进行玻璃化冷冻保存 ,解冻后发现 ,整个生产过程经生物频谱辐射胚胎的体外发育率 ( 86% )显著高于对照组 ( 65% )。     

牛胚胎玻璃化冷冻技术的发展和应用概况

胚胎冷冻保存是动物胚胎工程的重要组成部分,它是胚胎移植技术在生产中推广应用的重要基础。和现在通用的常规冷冻法相比,玻璃化冷冻具有用时短,所需设备少和操作简单等优点,成为目前国内外胚胎冷冻保存领域发展新方向。本文就牛胚胎玻璃化冷冻的概念、方法和国内外发展状况做一简要综述。     

添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎体外发育的影响

为了提高牛体外胚胎囊胚发育率,添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎进行体外培养。分别采集发情周期D0、D2、D4和D7山羊血清（发情当天为D0）,灭活除菌备用。结果表明不同发情时期羊血清对孤紫激活胚胎孵裂率影响差异不显著,囊胚发育率分别为29.5%、32.4%、33.9%和41.3%,D7血清能显著提高囊胚发育率（P＜0.05）,且扩张和孵化胚出现较早。添加D0血清体外受精胚胎卵裂率较高,但对囊胚发育率影响差异不显著。说明孤紫激活和体外受精胚胎发育有差异,D7血清对胚胎后期发育有利。受精胚无血清培养3d后添加D7血清,囊胚发育率为42.9%,是较为理想的培养方法。