甘蓝型油菜小孢子单倍体二倍化技术的研究

采用6种方法系统研究甘蓝型油菜（Brassica napus)品系（种）及杂种的小孢子再生苗单倍体染色体加倍技术。结果表明，单倍体苗接种含70－80mg/L秋水仙碱的培养基处理4－5d，植株染色体加倍率50％以上；单倍体小苗移栽前用1－2g/L秋水仙碱液浸泡处理3－6h，加倍率50％以上，由这些方法产生的加倍植株大多是可育花和不育花共生的嵌合体，每株产生的种子很少。分离的小孢子在含10－50mg/L秋水仙三的NLN培养基中处理48h后，接种无秋水仙碱NLN培养基诱导胚状体，再生植株加倍率80％以上，全株的花均能自交结籽，嵌合植株很少。     

甘蓝型油菜小孢子培养试管苗的保存和壮苗技术

以甘蓝型油菜小孢子培养再生植株为材料,研究多效唑在试管苗继代和移栽中的应用.试验发现多效唑能明显抑制油菜试管苗的株高.经0.325mg/l多效唑处理的试管苗壮苗作用最明显,后期移栽方便,成活率提高.在添加多效唑的斜面培养基中多次添加液体培养基可免除继代工作,并且将试管苗保存时间延长到144d以上.     

甘蓝型油菜小孢子离体培养条件改良

应用低含油量甘蓝型油菜品系1064与高含油量品系H105杂种F1花蕾进行小孢子培养,研究了两个种植地点的油菜小孢子产胚率的影响。对长度在0.4cm～0.6cm,0.6cm～0.8cm以及0.8cm以上的胚分别培养,并比较了秋水仙碱悬浮处理离体小孢子、浸根和滴芽3种染色体加倍方法的加倍效率。结果表明,种植在西宁的材料小孢子产胚率比南京高,为8.6枚/皿;0.6cm～0.8cm大的胚转接到B5固体培养基,其成苗率高达48.53%;3种加倍处理方法中以50mg/L秋水仙碱悬浮小孢子48h染色体加倍效率最高,达到46.23%。本研究构建了含有123个株系的DH群体,可用于油菜含油量性状的QTL分析。     

白芦笋游离小孢子培养初报

以白芦笋的4个基因型为试材,对游离小孢子培养及植株再生进行了初步探讨。试验结果表明,供体基因型对成功诱导愈伤组织发生起关键作用;花蕾长度为2.1～3.1mm时,大部分的小孢子处于单核晚期或双核期,最易培养出愈伤组织;游离小孢子培养于含有NAA2.0 mg/L、6-BA 1.0 mg/L液体培养基中,产生愈伤组织效果最好;游离小孢子来源的愈伤组织通过转瓶培养和植株再生诱导,能分化出无根绿芽。     

采用甘蓝型油菜离体小孢子染色体加倍来提高双单倍体植株的生产效率

该文比较了甘蓝型油菜小孢子产生植株染色体加倍的三种方法；秋水仙碱处理小孢子再生植株，秋水仙碱处理小孢子诱导的胚和秋水仙碱处理离体小孢子。处理整株，有５３％的处理植株结实，但植株生长迟缓，结实率下降。用秋水仙碱处理小孢子诱导胚，植株加倍率为３２％。秋水仙碱直接处理离体小孢子可使７０％的植株整体加倍，同时还刺激了培养小孢子的胚胎发生，从而提高植株再生率。     

一种基于水培技术的高效低成本油菜小孢子继代培养方法

在我国长江流域冬油菜区,油菜小孢子培养获得再生苗后需要经历漫长的越夏过程,目前的普遍做法是多次继代培养,该方法操作繁琐、技术要求高且易污染。为解决复杂低效的越夏问题,本研究建立了水培技术体系实现油菜小孢子苗越夏过程。试验结果表明,利用水培技术油菜小孢子幼苗存活率超过90%,小孢子苗直接移栽至大田存活率超过93%。此外,该技术节约90%以上的试剂费用和劳务费用,极大地简化了小孢子苗越夏操作过程。     

甘蓝型油菜DH植株创建及其倍性的流式鉴定

以甘蓝型油菜大粒品系和小粒品系的小孢子为试验材料,研究取样时期、花蕾大小、培养基类型及添加成分对小孢子产胚率的影响,利用流式细胞仪对小孢子再生植株及加倍植株进行了准确、快速的倍性分析。结果表明,始花期为最佳取蕾时期,花蕾大小在2.5~3.5mm为宜,培养基以液体培养基最好。培养基中加入0.1mg/L6-BA可以促进小孢子胚的发生,而活性炭对小孢子培养没有明显的促进作用。流式细胞仪倍性检测显示小孢子再生植株加倍后的双单倍体(doubled haploid,DH)占49%,还存在少量的三倍体(11.3%)、四倍体(1.1%)及嵌合体(27.3%)植株。本研究为油菜材料的快速纯合及其DH系群体的构建等提供了新的经验。     

黑绒观音莲顶芽培养和快速繁殖

以黑绒观音莲小球茎顶端切段为外植体，进行组织培养与快繁试验。结果显示，在MS培养基中加入较高浓度的6－BA对顶芽和丛生芽的诱导及继代增殖有利：生根培养基可用1／2MS＋6－BA0.3-0.5mg/L NAA0.8-1.0mg/L，生根率达100％。生根苗移栽到混合30％－40％珍珠岩的椰糠中，成活率达95％以上。采用自然变化温光条件下培养有利于瓶苗的生根和生长，提高瓶苗素质及移栽成活率。     

芦荟库拉索(Aloe vera L)再生体系的建立

对芦荟(AloeveraL.)组织培养和再生体系进行了研究,初步获得芦荟的初代和继代培养基为MS 6-BA2.5mg/L NAA0.2mg/L 蔗糖30mg/L,生根培养基成分为1/2MS IBA0.2mg/L NAA0.1mg/L 蔗糖30mg/L,愈伤组织培养采用粗壮的芦荟基部的白色部分,诱导愈伤组织的培养基为B5 6-BA2.0mg/L 2,4-D2.0mg/L 蔗糖30mg/L,采用Vc5.0mg/L抑制愈伤组织诱导过程中褐变的产生。诱导愈伤组织和外植体直接出芽2种方式并存。试管苗移栽后存活率为100%。采用潮霉素为抗性筛选标记,选择浓度为20￣30mg/L。     

甘蓝雄性不育系组培快繁技术研究

以甘蓝雄性不育系腋芽为材料研究其组培快繁技术,结果表明:适合腋芽增殖的培养基是MS 2mg/L6-BA 0.01 mg/L NAA,增殖系数可以达到5以上,且组培苗经一次继代就可脱分化;适合生根、壮苗培养基是MS 0.1 mg/l IBA,平均每株生根数是6.6条,平均根长6.91 cm.试管苗移栽成活率高达95%.组培苗经过试种,与大田实生母株相比性状一致.     

秋水仙碱对芸薹属三种单倍体染色体加倍效率

采用浸根、1g/L秋水仙碱滴生长点、含100mg/L的秋水仙碱培养基处理芸薹属三种单倍体无性系幼芽,诱导染色体加倍。根据处理后材料的田间表型、花粉育性和细胞学检测结果发现,各处理的染色体加倍效率存在显著性差异,其中培养基处理幼芽的加倍效率最高,达到50.75%;浸根和滴生长点的处理加倍效率分别为44.07%和17.54%。     

提高大麦游离小孢子培养反应的研究

提取液中添加 10mg/L秋水仙碱可提高大麦小孢子游离后的存活率 ;以含 10mg/L秋水仙碱的预处理液预处理小孢子 4 8h可以降低培养 72h后小孢子的死亡率 ;以小花共培养可以提高正常型多细胞结构形成率 ,因而明显提高胚状体的形成。     

2个葡萄品系外植体愈伤组织诱导和植株再生

进行了无核白、红地球2个葡萄品系外植体愈伤组织诱导和植株再生的研究。通过葡萄品系无核白、红地球叶片和叶柄外植体的愈伤组织的诱导、再分化,以器官发生途径实现植株再生。结果表明:(1)愈伤组织诱导以MS+BA5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖40g/L培养基最佳,诱导率为35%;同一葡萄品种的叶片与叶柄诱导愈伤组织的频率基本相同,而红地球外植体诱导愈伤组织的频率高于无核白;(2)不定芽的诱导再生以1/2MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+CH500mg/L+蔗糖30g/L培养基最佳,平均诱导率达35.4%;叶柄来源的愈伤组织诱导不定芽的频率高于叶片愈伤组织;(3)根系的诱导以1/2MS+KT0.5mg/L+IBA1.0mg/L+AC2g/L+蔗糖15g/L培养基最佳,无核白和红地球来源的不定芽诱导生根频率基本相同,都在80%以上。     

刺葡萄愈伤组织的分化、芽的增殖及生根培养

以刺葡萄愈伤组织为材料,在B5培养基上附加不同的激素种类及浓度配比,研究了刺葡萄芽的诱导、增殖和生根培养.结果表明,刺葡萄愈伤组织再生苗的分化率很低,仅在B5 0.5 mg/L ZT 0.1 mg/L NAA上有少量分化,分化率为13.3%;增殖培养以B5 BA1.0 mg/L NAA0.05 mg/L为佳,4周可增殖6.4倍;生根培养以B5 0.5 mg/L IBA 0.02mg/L NAA为好,4周平均生根3.4条,根粗达2.4 mm.     

可可体细胞胚胎发生及植株再生体系的构建

以可可（TheobromaCac0L.）的子叶为外植体,通过体胚发生途径,诱导再生可可植株。各培养阶段的优化培养基和培养条件为∶（1）愈伤组织诱导培养基（PCG）∶改良DKW+2,4-D3.0mgL+KT1.0mg几+TDZ 0.01mgL,在28+2）℃（以下培养温度均同）温度条件下,暗培养20d,诱导率为96.67%;（2）愈伤组织增殖培养基（SCG）∶改良DKW＋2,4-D 3.0mgA+KT1.0mg九,暗培养20d;（3）胚状体诱导培养基（ED）∶改良DKW+Sucrose30gL,暗培养60~150d,胚状体诱导产生并发育成熟,胚状体的诱导率为333%;（4）成熟胚诱导成苗∶①PEC培养基为∶改良DKW+Ghrose20gl+Sucrose10gL,光照为16h/d,培养60d;②采用RD培养基∶改良DKW+BA1.5mgl+AA0.5mgl,光照为16h/,培养3090d后,可得到完整的植株,再生植株的诱导率为 42%。     

用根癌土壤杆菌和发根土壤杆菌转化马铃薯的初步研究

根癌土杆菌菌株T_(37),C_(58)和B_6S_3单独或与C_(58) CIpGV 3850::110(?)neo(带有一嵌合基因NOS—NPT使植物产生卡那霉素抗性)接种马铃薯块茎盘。每块茎盘肿瘤数因细菌菌株、马铃薯基因型和所取块茎盘在块茎上的位置而变化。T_(37)诱导的品种Desiree的肿瘤分化了芽。大部分肿瘤的分化芽合成胭脂碱,表明是经pTiT—DNA转化的。用发根土壤杆菌菌株A_4诱导的毛状根切段培养后再生成株。再生植株具有明显的表型变异,并有agropinc合成,证明是经pRiT—DNA转化的。     

Breeding dominant genic male sterility restorer line of Brassica napus L.

To facilate breeding process of Brassica napus, a microspore culture and molecular marker-assisted screening combined system were proposed in this research. At early flowering stage, F₁ offspring of hybridized combination HY15A ​× ​HF06 was used as donor for microspore culture to analyze effects of colchicine concentration on embryogenic and diploid rates of microspore. Treatment with 50 ​mg/L colchicine resulted in embryogenic rate of 3.56 embryos/bud, which was substantially higher than control (0.78 embryos/bud). A total of 1,387 embryos and 862 single plants were obtained after induction culture. Ploidy detection was performed for the regenerated plants by flow cytometry. Diploid rates of microspores treated with 50 ​mg/L and 70 ​mg/L colchicine were 17.2% and 21.0% respectively, which was significantly higher than control (10.5%). Totally 108 single plants that doubled successfully were randomly selected and screened using molecular marker BE10. Approximately 54 of 108 plants generated a 305 bp amplification product, whereas the other 54 plants showed a 398 bp band, thereby satisfying 1:1 separation ratio (x²_0.05 ​= ​0.0093). These coincided with field identification results. Findings of this study indicated that homozygous breeding material could be obtained by microspore culture in a short time, thereby remarkably accelerate breeding.     

Plant regeneration from leaf tissues of four North Dakota genotypes of potato (Solanum tuberosum L.)

An efficient plant regeneration system was developed fromin vitro leaf tissues of four North Dakota potato genotypes. The best medium for genotype ND860-2 was Murashige and Skoog medium with 20.0 μM IAA and 11.4 μM zeatin riboside. Two to three weeks of initial dark treatments had a significant effect in reducing the time for shoot regeneration and increasing the number of regenerated shoots. Four antibiotics commonly used inAgrobacterium- mediated transformation were tested for their effects on shoot regeneration. Shoot induction was completely inhibited by kanamycin at 15 mg/L and hygromycin at 4 mg/L or higher, but not by carbenicillin (except at 1000 mg/L) and cefotaxime. Hygromycin significantly stimulated shoot induction at 1 mg/L.     

巴西橡胶树游离小孢子培养

以橡胶树品种海垦2号为材料,对橡胶树游离小孢子培养体系进行初步研究,为进一步建立其成熟培养体系提供基础。小孢子的提取采用直接研磨法和间接研磨法进行,结果发现以间接研磨法为佳,虽然工作量大,但污染率低、杂质少、培养效果好。对小孢子分别进行高温热击、Starvation Medium B溶液、对照预处理试验,发现用Starvation Medium B溶液预处理小孢子2 d有利于小孢子分化。不同的碳源比较发现麦芽糖培养效果较蔗糖好。对诱导培养基的组分、pH研究发现,以改良N6为基本培养基添加外源激素2,4-D 0.5 gm/L、KT 0.5 mg/L,pH 6.6时诱导效果好,小孢子分化率达8.33%。小孢子的分化以B途径为主,初步获得小孢子分化的细胞团和微愈伤。同时以橡胶树小孢子为受体进行电激转化试验,瞬时表达结果证明外源基因已导入部分小孢子基因组中。     

龙竹的组织培养

以龙竹的幼枝节段作为接种外植体,采用从腋芽-丛生芽-完整植株的繁殖途径进行繁殖。结果表明:在MS+BA 2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+PVP 250 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1培养基上培养10-20 d可诱导其腋芽萌发,新芽接种于MS附加BA 2 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+CW 100 mL·L-1+蔗糖30 g·L-1的培养基上培养20 d可诱导形成丛生芽,丛生芽在继代培养过程中每20-25d可增殖3-5倍。把丛生芽接种于1/2MS+NAA2mL·L-1+IAA2mL·L-1+蔗糖20 g·L-1培养基上培养4周后可诱导形成完整的根系,小植株移栽成活率可达98％。该体系的建立为龙竹的工厂化育苗奠定了坚实的基础。