Proof and thin layer chromatographic separation of phenolic antioxidants

Summary For the stabilisation of fats and oils, especially those of animal origin and the products with high fat content different antioxydants are lately used, from which the most common are the phenolic ones. With regard to their low admissible amount (0.01–0.05%) it is necessary not only for their determination but also for their proof to use suitable and sensitive methods. We have developed the method for the proof of phenolic antioxydants in fats and oils by means of thin layer chromatographic separation on silica gel and polyamide powder. For the separation of gallic acid and its esters the best result was achieved with solvent system containing 20–35% acetic acid in chloroform. At this concentration of acetic acid the differences in R_f values for the homologic sequence are largest. With the suitable arrangement it is possible with this procedure to proof also NDGA, BHA and BHT.Good results were achieved also with the separation of phenolic antioxydants on thin layers with polyamide powder. For the separation of gallic acid and its esters a solvent system containing carbon tetrachlorid and ethanol (7 : 3) was most suitable. Best separation of esters of gallic acid from NDGA and BHA was achieved with a solvent system containing methanol-aceton-water (6 : 1 : 3). For the detection of phenolic antioxydants their nitrosation with succes was used. This detection is very sensitive and suitable for the identification of these substances after their thin layer chromatographic separation.

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Zusammenfassung Zur Stabilisierung von Fetten und Ölen besonders tierischen Ursprungs und von Produkten, die an solchen Fetten reich sind, verwendet man in letzter Zeit in zunehmenden Maße verschiedene Oxydations-Inhibitoren, die größtenteils phenolischer Natur sind. Da die zulässigen Konzentrationen dieser Stoffe niedrig sind (0.01–0.05%), müssen zu ihrer Bestimmung, aber auch zu ihrem Nachweis, geeignete und empfindliche Methoden angewendet werden.Zum Nachweis phenolischer Oxydations-Inhibitoren in Fetten und Ölen wendeten wir einerseits die chromatographische Trennung auf dünner Silikagel-Schicht an, andererseits die Trennung auf einer dünnen Schicht Polyamidpulver. Zur Trennung von Gallussäure und Gallussäure-Ester bewährte sich Chloroform in verschiedenen Verhältnissen mit Essigsäure (am besten in Konzentration von 20–35%). Bei dieser Konzentration der Essigsäure sind die Unterschiede in den Rf-Werten in der homologen Reihe am größten. Durch geeignete Anordnung der Systeme sind auf diese Weise außer den Gallaten auch NDGA, BHA und BHT abzutrennen bzw. nachzuweisen.Gute Ergebnisse wurden auch bei der Trennung dieser Stoffe auf dünnen Polyamid-Schichten erzielt. Zur Trennung der Gallussäure-Ester wurde ein Gemisch von Tetrachlormethan und Äthanol im Verhältnis 7 : 3 verwendet. Zur Trennung der Gallate von NDGH und BHA wählten wir ein Gemisch von Methanol, Aceton und Wasser im Verhältnis 6 : 1 : 3. Zum Nachweis dieser Stoffe bewährte sich deren Nitrosierung. Dieser Nachweis ist hochempfindlich und eignet sich zur Identifikation dieser Stoffe nach deren chromatographischer Abtrennung auf dünner Schicht.

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Résumé A la stabilisation des graisses et des huile surtout d'origine animale, et des produits à haute teneur en ces graisses, on emploie actuellement largement différents antioxydants dont la plupart est de nature phénolique. Vu les concentrations admissibles assez basses de ces substances (0.01–0.05%) il est nécessaire d'appliquer pour leur détermination et même pour les repister, une méthode convenable et sensible.A la démonstration des antioxydants phénoliques dans les graisses et les huiles nous avons appliqué tantôt la séparation chromatographique sur une couche mince de silicagel, tantôt la séparation sur une couche mince de poudre polyamidé. A la séparation de l'acide gallique et des esters d'acide gal., le chloroforme en proportions différentes avec l'acide acétique (la meilleure concentration de 20–35%) nous affirma son épreuve. A cette concentration d'acide acétique il y a des différences plus grandes des valeurs Rf dans la série homologique. Par un arrangement convenable des systèmes il est possible de séparer de cette façon outre des gallates resp. démontrer même NDGA, BHA et BHT.De bon résultats furent atteints aussi pour la séparation de ces substances sur des couches minces de polyamide. Pour la séparation des esters d'acide gallique le mélange de tétrachlore carbonique et d'éthanol en proportion 7 : 3 fut employé. A la séparation des gallates de NDGH et BHA ce fut le mélange de méthanol et d'acétone et d'eau en proportions 6 : 1 : 3. Pour la détection de ces substances la nitrosation qui nous donna la meilleure preuve. Cette détection est très sensible et appropriée à l'identification de ces substances après leur séparation chromatographique sur une couche mince.

     

Thin layer-chromatographic separation of fat soluble and water soluble food dyes

Summary The use of fat soluble and water soluble food dyes in food technology requires reliable proofs and precise identification of these substances in foodstuffs. This problematic has been studied more detailed in our Institute. During these studies some suitable procedures for thin layer chromatographic separation of these substances have been developed.For the separation of fat soluble food dyes the chromatography on thin layers of aluminium oxide and the chromatography on thin layers of starch with reversed phases were used. In the first case good separation was achieved with a solvent system containing petroleum ether and carbon tetrachlorid and their mixtures. In the second case the starch plates were impregnated with paraffin or vegetable oil, and as mobile phases a solvent system containing methanol-water-acetic adic (16 : 3 : 1) and others solvent mixtures currently used in paper chromatography were used.Water soluble food dyes were separated on thin layers of polyamide powder, which was used also for their quantitative isolation from foodstuffs. The best results were achieved with basic solvent system, for example, with a mixture containing ammonia-methanol water (5 : 15 : 80).The developed analytical procedures are suitable for the proof and the separation of fat soluble and water soluble food dyes in all foodstuffs.

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Zusammenfassung Die Verwendung von wasser- und fettlöslichen Lebensmittelfarben erfordert verläßlichen Nachweis und genaue Identifikation dieser Stoffe in den Lebensmitteln. Wir haben diese Problematik in unserem Institut eingehend studiert und einige Verfahren der chromatographischen Trennung dieser Stoffe mittels DC erarbeitet.Zur Trennung der fettlöslichen Farbstoffe verwendeten wir einerseits DC-Platten mit Aluminiumoxid, andererseits führten wir die Trennung dieser Stoffe auf einer dünnen Stärkeschicht mit umgekehrter Phase durch. Im ersten Falle wurde eine gute Trennung mit Laufmitteln erreicht, die Petroläther und Tetrachlormethan und deren Gemische enthalten. Im zweiten Falle wurde als stationäre Phase Paraffinöl, als mobile Phase eine Gemisch von Methanol, Wasser und Essigsäure im Verhältnis 16 : 3 : 1 und andere Gemische in gleichen Verhältnissen verwendet, die sich bei der Papier-Verteilungschromatographie bewährt haben.Wasserlösliche Farbstoffe wurden auf einer dünnen Schicht von Polyamidpulver getrennt, das auch zu deren quantitativer Isolation aus den Lebensmitteln verwendet wurde. Die besten Ergebnisse wurden mit alkalischen Laufmitteln erzielt, z.B. mit dem Gemisch von Ammoniak, Methanol und Wasser im Verhältnis 5 : 15 : 80.Die erarbeiteten analytischen Verfahren für Nachweis und Trennung fett- und wasserlöslicher Lebensmittelfarben bewährten sich für alle Lebensmitteltypen.

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Résumé L'utilisation des colorants alimentaires solubles dans l'eau et dans la graisse exige des preuves sûres et l'identification exacte de ces substances dans les aliments. Nous avons étudié ces problèmes en détail à notre institut et élaboré quelques procédés de séparation chromatographique de ces substances par chromatographie sur couche mince.A la séparation des colorants solubles dans la graisse, nous avons utilisé d'une part des couches versées sur l'alumine, d'autre part la séparation de ces substances sur une couche mince de fécule à phase inverse. Au premier cas une bonne séparation fut atteinte aux systèmes comprenant l'éther de pétrole et le tétrachlore carbonique, ou leurs mélanges. A l'autre cas on applique, comme une phase ancrée, de l'huile paraffinique, comme une phase mobile, du mélange de méthanol, d'eau et d'acide acétique en proportion 16 : 3 : 1 et d'autres en mêmes proportions qui avaient fait leurs preuves à la chromatographie de séparation sur le papier.Les colorants solubles dans l'eau furent séparés sur une couche mince de poudre polyamidé qui avait été de même appliqué à leur isolement quantitatif de l'aliment. Les meilleurs résultats furent atteints avec les systèmes alcalins p.e. avec le mélange de méthanol, d'ammoniac et d'eau en proportions 5 : 15 : 80.Les procédés analytiques élaborés pour des preuves et les séparations des colorants solubles dans la graisse et dans l'eau prouvèrent leur attestation avec tous les types de matières alimentaires.

     

Application de la CCM à l'étude des huiles volatiles

Résumé Nous avons employé la méthode de chromatographie sur couche mince pour l'identification et la séparation des composants de quelques huiles essentielles bien connues comme Sandalwood, Patchouly et Vetiver huiles. Après avoir mis au point les meilleures conditions de séparation: (qualité, composition et préparation de l'adsorbant, composition de l'agent de développement, temps, température), on a choisi l'agent le plus approprié pour le développement des composants contenant de différents groupes fonctionnels.L'identification des principaux composants des huiles, faute d'agents de référence propres, a été exécutée d'une part en fonction des valeurs Rf de la littérature, d'autre part par l'élution et par chromatographie en phase gazeuse des composants séparés par chromatographie en couche mince.On a élaboré le spectrogramme des composants principaux de l'huile Patchouly pure et de ceux séparés par CCM, en employant un spectrophotomètre de type UR-20, pour déterminer la composition qualitative et quantitative de l'huile. La mise au point des procédés combinés employés pour la détermination de la composition qualitative et quantitative des huiles essentielles fera l'objet de notre prochain programme de travaux.

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Summary We employed the method of thin-layer chromatography for the separation and identification of some well-known essential oils as Sandalwood, Patchouly and Vetiver oils. After having cleared up the factors securing satisfactory separation (quality, composition and preparation of the adsorbent, composition of the developing agent, time and temperature), the most suitable reagent for the developing of the components containing different functional groups has been chosen.For want of pure reference agents, we identified the main oil components partly on the basis of the Rf values of the literature, partly by the elution and by gas-chromatography of the components separated by thin-layer chromatography.We registered the spectrogram of the main components separated by thin-layer chromatography and of those of pure patchouly oil, employing a spectrophotometer of Type UR-20, in order to determine the quality and quantity of the components of the oils. Detailed elaboration of the combined methods serving for the qualitative and quantitative determination of the composition of essential oils will be the program of our further research work.

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Zusammenfassung Die Methode der Dünnschichtchromatographie wurde für die Trennung und Identifizierung der Komponenten einiger wohlbekannter ätherischer Öle sowie Sandelholz-, Patchouly- und Vetiver-Öle verwendet. Nach Aufklärung der die entsprechende Trennung sichernden Umstände (Qualität und Zusammensetzung, sowie Vorbereitung des Adsorbens, Zusammensetzung des Anfärbereagenz, Zeit, Temperatur) wurde für die Entwicklung der die verschiedenen funktionellen Gruppen enthaltenden Komponenten das geeigneteste Reagenz gewählt.Die Identifizierung der Hauptkomponenten der Öle wurde, mangels Referenzsubstanzen, teils auf Grund literarischer Rf-Werte, teils durch die Eluierung und durch Gaschromatographie der mittels Dünnschichtchromatographie getrennten Komponenten durchgeführt.Wir haben auf dem UR-20 Typ Spektrophotometer das Spektrogram des reinen Patchouly- Öles und der durch Dünnschichtchromatographie getrennten Hauptkomponenten des Öles, zwecks qualitativer und quantitativer Aufklärung der ölbindenden Komponenten, aufgenommen. Das Programm unserer weiteren Arbeit bildet die ausführliche Ausarbeitung der für die Bestimmung der quantitativen und qualitativen Zusammensetzung der ätherischen Öle dienenden kombinierten Methoden.

     

La CCM dans l'etude des isomeres de position et geometriques des acides gras mono- et polyinsatures

Résumé On a employé la chromatographie en couche mince de gel de silice G imprégné de nitrate d'argent et celle imprégné de nitrate d'argent ammoniacal pour séparer les isomères géométriques des acides avec dix-huit atomes de carbone, respectivement mono- et polyinsaturés.L'emploi de la chromatographie en couche mince, comme technique de séparation, en coordination avec la chromatographie en phase gazeuse, la spectrophotométrie U.V. et I.R. nous a permis l'identification des différents isomères.Avec cette méthode on a pu aussi déterminer les isomères géométriques et de position de certains acids polyinsaturés conjugués, c'est à dire le 9, 11- et le 10, 12- octadécadiénoïques.Les méthodes que nous avons décrites peuvent être aussi appliquées pour révéler les isomères géométriques et de position des lipides alimentaires.

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Summary Thin layer chromatography on Silica Gel G and silver nitrate, and silver nitrate and ammonium hydroxide was used in the separation of geometrical isomers of C₁₈ fatty acids mono- and polyunsaturated, respectively.The use of thin layer chromatography, as a preparative technique, in coordination with gas chromatography, infrared and ultraviolet spectrophotometry allowed the identification of each isomer.By this method geometrical and positional isomers of some conjugated polyunsaturated acids like 9,11- and 10,12-octadecadienoic, were also determined.The method described can be applied to the study of geometrical and positional isomers in food lipids.

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Zusammenfassung Die DC auf AgNO₃-Kieselgel G und [Ag(NH₃)₂] NO₃-Kieselgel G wurde für die Trennung der geometrischen Isomeren der mono — und polyungesättigten C₁₈ — Fettsäuren verwendet.Die Anwendung der Dünnschicht-Chromatographie, als Vorbereitungstechnik, hat zusammen mit der Gaschromatographie und mit der I.R. — und U.V. — Spektrophotometrie die Identifizierung von verschiedenen Isomeren erlaubt.Die Stellungs- und die geometrischen Isomere von einigen konjugierten poly-ungesättigten Fettsäuren (wie 9,11- und 10,12-C₁₈-di-ungesättigten Fettsäuren) sind durch diese Methode bestimmt worden.Die beschriebenen Methoden können zur Erkennung der geometrischen und Stellungs-Isomere, die in den Fetten der Nährstoffe enthalten sind, angewandt werden.

     

La chromatographie sur couche mince: Principes et possibilités

Résumé Après un bref rappel des avantages de la chromatographie de surface sur la chromatographie sur colonne, on compare les avantages et les inconvénients respectifs de la chromatographie sur couche mince et de la chromatographie sur papier. Les méthodes générales de la chromatographie sur couche mince (CCM) sont présentées (préparation des couches, types de couches, dépot des échantillons à analyser, CCM analytique, CCM préparative, moyens de développement des chromatogrammes). Les principes généraux des divers types de chromatographie (adsorption, partage direct, partage inversé, relargage, exclusion-diffusion, échange d'ions, spécifique) qui peuvent être mis en oeuvre sont rappelés et des exemples concrets sont donnés dans chaque cas. Les problèmes de l'électrophorése et de la chromato-electrophorése sur couche mince sont également évoqués. Bien que cette méthode analytique soit le plus simple et le puissant moyen de séparation des corps en mélange, il est nécessaire de rappeler que bien des erreurs de conception sont à la base de son manque de développement dans certains domaines (chromatographie des substances hydrosolubles par exemple). A titre d'exemple on rappelle que la première chromatographie de relargage et la première chromato-electrophorése basse tension n'ont été réalisées que tout récemment.

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Summary After a brief summary of the advantages of surface chromatography compared to column chromatography, the respective advantages and inconveniences of thin-layer and paper chromatography are compared. The general methods of thin-layer chromatography are presented (preparation of the layers, types of layers, deposition of the samples to be analyzed, analytical TLC, preparative TLC, methods for developing the chromatograms). The general principles of the various types of chromatography (adsorption, direct partition, reverse partition, salting out, exclusion-diffusion, ion-exchange, specific chromatography) that may be used are reminded of, and concrete examples given in each case. The problems of electrophoresis and thin layer chromato-electrophoresis are also treated. Though this analytical method be the simplest and most powerful means for the isolation of components in mixtures, it is necessary to remind that quite a number of errors in the conception are responsible for its lack of development in certain fields (water soluble substances chromatography, for instance). As an example one might remember that the first salting-out chromatography, and the first low-tension chromatoelectrophoresis have been developed only very recently.

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Zusammenfassung Die Vorzüge der Oberflächen-Chromatographie gegenüber der Säulen-Chromatographie wurden kurz aufgezählt und die Besonderheiten der Dünnschicht- und der Papier-Chromatographie verglichen. Die Grundlagen der DC werden erklärt (Vorbereitung der Schicht, Arten der Schicht, Auftragen der Proben, analytische DC, vorbereitende DC, Entwicklungsverfahren der Chromatogramme). Anschließend werden die grundsätzlichen Verfahren der verschiedenen Typen von Chromatographie erörtert (Adsorption, direkte Trennung, inversierte Trennung, Aussalzen, Diffusion, Ionenaustausch, spezifische Verfahren), die praktisch infrage kommen. Für jeden Typ werden Beispiele gegeben. Die Probleme der Elektrophorese und der Elektrophorese-DC werden ebenfalls behandelt. Obwohl diese Analysenmethode das einfachste und stärkste Trennverfahren für Stoffgemische ist, so muß daran erinnert werden, daß ihre Entwicklung in gewissen Gebieten durch Fehler in der Auffassung gehemmt worden ist, zum Beispiel ihre Anwendung für wasserlösliche Stoffe. Verfasser weist darauf hin, daß die erste Aussalz-DC und die erste Niederspannungs-Chromato-Elektrophorese erst ganz kürzlich realisiert wurden.

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Avec la collaboration technique de MademoiselleCh. Thommegay et de MademoiselleA.-M. Drapier.     

Etude de la composition en acides aminés des fourrages produits en Belgique

Résumé Les auteurs ont fait la détermination des acides aminés dans les différents aliments pour bétail que l'on produit en Belgique, c'est à dire: herbes de prairies, foins de prairies, de trèfle violet et de luzerne, betteraves et navets, choux-moèlliers, pommes de terre, spergules, lupins doux et séradelles. Ils donnent aussi la composition en acides aminés des céréales produites en Belgique: épeautre, froment, avoine, orge, seigle, maïs.Toutes ces déterminations ont été faites par la méthode deStein et Moore sur colonnes d'échangeurs d'ions (Dowex 50). La cystine est dosée selon la méthode deSchram et le tryptophane par une variante de la méthode deRoth &Schuster. Ils ont consigné leurs résultats en tableaux qui expriment la composition en acides aminés de 100 grammes de protéine brute. Il sera donc possible à partir de ces chiffres de calculer la teneur en acides aminés des aliments.Partant de ces tableaux, ils calculent le Chemical Score (C.S.) des différents fourrages par comparaison avec la composition en acides aminés de l'oeuf complet (analyses faites par le même laboratoire et avec la même méthode). Ils déduisent de là, les acides aminés limitants primaires et secondaires des différents types de fourrages analysés. Pour terminer, ils abordent succintement le problème des facteurs externes qui influencent la composition en acides aminés des plantes. Finalement, ils donnent une critique de la méthode utilisée, ses avantages et ses inconvénients, en insistant surtout sur deux points: la préparation des échantillons et les méthodes d'hydrolyses.

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Summary The authors have determined the amino acid composition of some of the belgian cattle-feeds: meadow grass, hays (meadow, clover and alfalfa) beets and turnips, cabbages, potatoes, spurrey, lupine, seradella.They also give the amino-acid composition of the belgian grains spelt, wheat, oats, barley, rye, corn.They used the method ofStein &Moore, on collumns of ionexchange resins (Dowex 50). Cystine is determinated following the method ofSchram and Tryptophan by a modifiedRoth &Schuster method.The tables give the amino-acid composition of 100 grs. crude protein. From this figures, it is possible to calculate the amino-acid composition of feedstuffs.They also give the Chemical Score of this feedstuffs by comparison with the amino-acid composition of the whole egg protein.They deduct the limiting amino-acid (primary and secondary).Finally they come to the question of the different factors influencing the amino-acid composition.The method is also criticized and they insist specially upon the preparation of the samples to be analysed, and the methods of hydrolysis.

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Zusammenfassung Die Verfasser geben Werte für den mittleren Gehalt an Aminosäuren für die in Belgien erzeugten Futterpflanzen an. Sie beziehen in ihre Untersuchungen ein: Grünpflanzen (Weidekräuter, Spörgel, Serradella, Süßlupine, Markstammkohl, Futterrüben, Kohlrüben und Kartoffeln), Heu von Wiesen, Klee und Luzerne, sowie die Futtergetreide (Hafer, Weizen, Mais, Spelz, Gerste und Roggen).Alle Bestimmungen wurden säulenchromatographisch nach der Methode vonStein &Moore mit Hilfe von Ionenaustauschern (Dowex 50) durchgeführt. Den Gehalt an Cystin ermittelten sie nach der Methode vonSchram und den an Tryptophan nach einer Abwandlung der Methode vonRoth &Schuster. Tabellen geben den Gehalt an 18 Aminosäuren bezogen auf 100 g Rohprotein an. Mit Hilfe dieser Werte wird eine Berechnung der Aminosäuregehalte der Futtermittel ermöglicht.Außerdem ermitteln die Verf. den Chemical Score für die verschiedenen Futtermittel, indem sie das Aminosäurespektrum mit dem des Volleies vergleichen. Das Vollei wurde dabei nach derselben Methode analysiert. Sie leiten aus den Befunden ab, welche Aminosäuren in erster und zweiter Linie in den verschiedenen Futterarten limitierend sind.Schließlich gehen sie noch kurz auf die exogenen Faktoren ein, die den Gehalt an Aminosäuren zu beeinflussen vermögen.Die angewandte Methode wird einer kritischen Betrachtung unterzogen, wobei die Vor- und Nachteile herausgestellt werden. Letztere bestehen besonders in der Vorbereitung der Proben und der Methode der Hydrolyse.

     

Possibilites d'application en analyse bromatologique de la chromatographie sur couches minces d'echangeurs d'ions et sur couches multiples juxtaposees

Résumé En analyse bromatologique, la chromatographie sur couches minces classiques a été appliquée jusqu'alors essentiellement à des séparations de composés organiques. Il n'est pas doûteux cependant, que l'utilisation de couches minces d'échangeurs d'ions puisse élargir encore le domaine d'application de cette méthode, tout particulièrement en expertise alimentaire. La séparation et la caractérisation de nombreux ions minéraux toxiques ou frauduleux, tels que Pb, Hg, Cu, As, SCN, Fe (CN)₆ ..., peuvent être réalisées à l'aide de cette méthode, couplée éventuellement avec les procédés classiques de minéralisation et d'extraction par solvants ou avec des méthodes plus modernes, telles que la radioactivation.La chromatographie sur couches multiples juxtaposées de nature différente doit permettre de réaliser en une seule opération des analyses plus complètes de mélanges complexes de composés minéraux et organiques, en mettant en jeu successivement des phénomènes de partage, d'adsorption ou d'échange d'ions.

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Summary In bromatological analysis, classical thin layer chromatography has been applied up to now essentially for the separation of organic compounds. It cannot be doubted though, that the use of thin layers of ion exchangers may broaden the field of application of this method, particularly in food evaluation. The isolation and characterization of numerous toxic or fraudulent mineral ions such as Pb, Hg, Cu, As, SCN, Fe(CN)₆ ... can be achieved by this method, eventually coupled with the classical methods of mineralisation or solvent extraction, or with more modern methods such as radio activation.Chromatography on multiple layers of differing nature, set side by side, must give the possibility of achieving in one operation more complete analysis of complex mixtures of mineral and organic compounds by bringing into play, successively, the phenomena of partition, adsorption, and ion exchange.

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Zusammenfassung Für Lebensmittelanalysen wurde die klassische DC bisher hauptsächlich zur Trennung von organischen Stoffen benutzt. Zweifellos kann der Anwendungsbereich durch Einführung von dünnen Schichten aus Ionenaustauschern noch erweitert werden, insbesondere für Lebensmittelbegutachtungen. Die Trennung und Identifizierung von zahlreichen giftigen oder gefälschten mineralischen Ionen, wie Pb, Hg, Cu, Ag, SCN, Fe(CN)₆ ..., können mit dieser Methode erreicht werden, die nötigenfalls mit den klassischen Verfahren der Mineralisierung und der Extraktion durch Lösungsmittel oder mit modernsten Methoden wie Radioaktivierung gekuppelt wird.Die Chromatographie mit nebeneinander liegenden Schichten ist anders geartet und erlaubt in einem einzigen Arbeitsgang vollständigere Analysen komplexer Gemische mineralischer oder organischer Art. Hier werden nacheinander Teilungs-, Adsorptions- oder Ionenaustauschphänomene ausgenützt.

     

Application de la chromatographie sur couche mince a l'analyse des phospholipides et galactolipides des vegetaux

Résumé Les principes de la séparation des lipides polaires des autres catégories lipidiques, puis de la séparation des différents lipides polaires entre eux sont rapidement passés en revue. Les principaux systèmes, récemment décrits, permettant de réaliser ces séparations sur couche mince, sur papier silicé ou en couplant un fractionnement préalable sur colonne avec une chromatographie ultérieure sur couche mince, sont présentés. Plusieurs exemples sont fournis de l'application de ces méthodes d'analyse aux lipides polaires de divers fruits, tubercules ou feuilles vertes.

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Summary The principles of the separation of polar lipids from the other lipid categories, then the principles of the separation of the various polar lipids between them, are rapidly reviewed. The main systems, recently described, thanks to which it is possible to achieve these separations on a thin-layer, on silica paper, or by coupling a preliminary column fractionation with an ulterior thin-layer chromatography are presented. Several examples of the application of these methods of analysis to the polar lipids of various fruits, tubers, or green leaves, are given.

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Zusammenfassung Die Grundsätze der Trennung der polaren Lipide von den anderen Lipiden, und der verschiedenen polaren Lipide untereinander werden kurz besprochen. Die kürzlich beschriebenen Verfahren, welche diese Trennungen auf Dünnschichten möglich machen, auf Kieselgel oder durch Kupplung mit einer vorherigen Säulen-Fraktionierung und anschließender DC werden dargestellt. Mehrere Beispiele werden bezüglich der Anwendung dieser analytischen Verfahren für polare Lipide in verschiedenen Früchten, Knollen oder grünen Blättern gegeben.

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Abréviations utilisées PA acide phosphatidique - PI phosphatidylinositol - PS phosphatidylsérine - PE phosphatidyléthanolamine - PG phosphatidylglycérol - PGP diphosphatidylglycérol (cardiolipine) - MGDG monogalactosyldiglycéride - DGDG digalactosyldiglycéride - LN lipides neutres     

Chromatographie sur couche mince des oses et oligosaccharides

Résumé Après un rappel des différents supports et solvants utilisés par divers auteurs (Stahl), l'auteur propose deux solvants qui donnent une séparation efficace et rapide de certains oligosaccharides (stachyose, raffinose, saccharose...) sur Kieselgel G. Il est indiqué à titre d'exemple la séparation d'une série d'oligomannosides et des couples mannobiose-mannobiitol d'une part et mannotriosemannotriitol d'autre part, ces derniers n'étant pas séparables sur papier. Les avantages de cette technique sont, à côté de la rapidité et de la facilité de révélation, la possibilité de chromatographier des échantillons non desionisés, et l'application facile à la chromatographie quantitative. Par contre, certains couples de sucres tels que galactose-saccharose ou lactose-raffinose ne sont pas séparés de façon satisfaisante.

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Summary After recalling the various supports and solvents employed by different searchers, the author proposes two solvents giving a rapid and effective separation of certain oligosaccharides (stachyose, raffinose, sucrose ...) on Kieselgel G. As an example the author describes the separation of a series of oligomannosides and of the couples mannobiose — mannobiitol on one side, and of the couples mannotriose — mannotriitol on the other side, the separation of these groups by paper chromatography being impossible. The advantages of this technique are, besides its rapidity and ease of the development, the possibility to make a chromatographical analysis of non de -ionized samples, and the ease of its application to quantitative chromatography. On the other hand the separation of sugar couples such as galactose- saccarose or lactose- raffinose is not achieved satisfactorily.

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Zusammenfassung Nach Aufzählung von Trägern und Lösungsmitteln, die von verschiedenen Autoren benützt worden sind (Stahl), nennt die Autorin zwei Lösungsmittel, welche eine wirksame und rasche Trennung bestimmter Oligo-saccharide (Stachyose, Raffinose, Saccharose) auf Kieselgel G geben. Man zeigt, als Beispiel, die Trennung einer Reihe von Oligo-mannosiden und eines Paares Mannobiose-Mannobiitol und andererseits eines Paares Mannotriose-Mannotriitol; die letzteren sind auf Papier nicht trennbar. Die Vorteile dieser Technik sind, neben der Geschwindigkeit und Leichtigkeit der Entwicklung, die Möglichkeit der Chromatographie von nicht desionisierten Proben und die leichte Anwendung für quantitative Chromatographie. Manche Zucker-Paare jedoch, wie Galactose-Saccharose oder Lactose-Raffinose, werden nicht befriedigend getrennt.

     

Die Entwicklung der Arznei- und Gewuerzpflanzenproduktion in Oesterreich

Zusammenfassung Oesterreich gehört zu den ersten Ländern, die einer Regelung der Erzeugung von Arznei-, Gewürz- und verwandten Pflanzen in engster Zusammenarbeit von Wissenschaft und Praxis ihre volle Aufmerksamkeit zuwandten. Dies fand in dem 1910 auf Anregung vonW. Mitlacher gegründeten staatlichen Komitee zur Förderung der Arzneipflanzenkultur und der Anlage des Versuchgartens in Korneuburg seinen Ausdruck. Ersteres entwickelte besonders unterR. Wasicky undW. Himmelbaur eine fruchtbare, weit über Oesterreich beachtete wissenschaftliche, praktische und organisatorische Tätigkeit bis zur Auflösung durch Gleichschaltung im Jahre 1938. Insgesamt erschienen 91 Veröffentlichungen. Die Erforschung der Vegetationsbedingungen in Korneuburg führte zu brauchbaren Kulturanleitungen von 76 Pflanzen, zur Kenntnis der Boden-, Klima-, Dünger-, Standweite- und Bearbeitungsansprüche der betreffenden Pflanzen und zur Einführung einer Anzahl bedeutungsvollen Kulturen wieSoja hispida, Helianthus annuus, Digitalis lanata, Rheum palmatum, u.a.Rheum palmatum L. bildete Gegenstand der Züchtung. In Zusammenarbeit mit der Schweiz wurde die Grundlage zur bioklimatischen Erforschung gelegt. Die Mitarbeit der Schulen wurde pädagogisch und propagandistisch vorbildlich gelöst. Im Jahre 1927 ging von Wien die Anregung zur Gründung des internationalen Verbandes für Arznei-, Gewürz- und verwandte Pflanzen aus, der in Budapest, Padua-Venedig, Paris, Brüssel, München und Prag Tagungen abhielt und besonders die Frage der Normierung behandelte und mit Erfolg einer Lösung zuführte. Oesterreich hatte 1938 bereits acht Drogen normiert. 1937 erfolgte durchW. Hecht die Einführung der feldmässigen Erzeugung von Mutterkorn. Der volksgesundheitliche Wert wurde in den Zeiten der Absperrung allen Kreisen klar, da die vom Komitee angeregten und geförderten Kulturen wertvolle Rohstoffe zur Versorgung des Marktes lieferten. Trotz der Ernährungskrise und der Zerstörungen des Krieges befindet sich das Gesamtgebeit im Wiederaufbau und mit der Anregung zur Gründung des internationalen Rohstoffverbandes hat Oesterreich wieder die Initiative ergriffen. Es steht aufgeschlossen allen Problemen der Zeit gegenüber. Es sieht nach wie vor seine Aufgabe nicht in Massenerzeugung, sondern in der wissenschaftlichen und praktischen Arbeit an Qualitätserzeugnissen. Im Dienste dieser Ideen wurde 1950 unter Vorsitz von Prof.Fuchs Das Komitee zür staatlichen Förderung der Kulture von Arznei-, Heil-und Gewürzpflanzen in Oesterreich wieder gegründet.

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Le développement de la production des plantes médicinales et aromatiques en autriche

Resumé L'Autriche est un des premiers pays qui ont commencé de régler la production des plantes médicinales et aromatiques. en contact étroit avec la science et la pratique. Ce travail fut commencé en 1910 sur une proposition deW. Mitlacher par la création du Comité gouvernemental pour l'encouragement de la culture des plantes médicinales et par la création du jardin d'essais à Korneuburg. Le Comité développa surtout sousR. Wasicky etW. Himmelbaur une féconde activité scientifique, pratique et organisatoire bien connue au delà des frontières de l'Autriche, jusqu'à sa dissolution en 1938. Comme résultats des études sur les conditions de la croissance à Korneuburg des indications pour la culture de 76 plantes médicinales furent publiées; d'autres pour la connaissance des exigences des plantes quant'au sol, au climat, au fumage, à l'espace et à la culture et pour l'introduction de cultures importantes, comme leSoja hispida, le Helianthus annuus, le Digitalis lanata, le Rheum palmatum etc. Ce dernier fut l'objet d'une sélection, spéciale, L'étude bioclimatique fut entreprise en collaboration avec la Suisse. La collaboration pédagogique et propagandique dans les écoles fut entreprise d'une façon modèle. En 1927 on proposait à Vienne de créer une Fédération internationale pour les plantes médicinales, aromatiques et similaires. Des congrès à Budapest, Padoue-Venise, Paris, Bruxelles, Munich et Prague furent organisés. La fédération s'est occupé surtout des questions de normalisation des drogues. L'Autriche avait normé jusqu'en 1938 huit drogues. En 1937 le DrHecht commença de produire leSecale cornutum dans des champs. Pendant la guerre le marché fut approvisonné par des cultures fondées grace aux idées recommandées par le Comité. Actuellement la culture des plantes médicinales se trouve en état de réorganisation. L'Autriche se donne pour tache par la production d'articles en grande quantité, mais le travail scientifique et pratique avec des produits de qualité.

     

Androgenicity in vitamins

On studying androgenicity of vitamins the following results were obtained:Vitamins E and A possess androgenic property and act synergistically with testosterone on increasing the seminal vesicle weight of castrated male rats. Vitamin B₁₂ also exhibit androgenic activity but has no effect on the action of testosterone. On the other hand vitamin C though possesses no androgenic properties yet it acts synergistically with testosterone. As regards vitamin B₆, it has neither androgenic property nor synergistic action with testosterone.

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Zusammenfassung Untersuchungen über androgene Wirkung von Vitaminen hatten folgende Ergebnisse.Vitamin E und Vitamin A besitzen androgene Wirkung und zeigen sich synergistisch mit Testosteron bei der Vergrößerung des Gewichtes der Seminal-Vesikel kastrierter männlicher Ratten. Vitamin B₁₂ zeigt ebenso androgene Aktivität, besitzt aber keinen Einfluß auf die Wirkung des Testosterons. Vitamin C besitzt keine androgenen Eigenschaften, trotzdem wirkt es synergistisch mit Testosteron. Vitamin B₆ zeigt weder androgene Eigenschaften noch synergistische Wirkung mit Testosteron.

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Resume Recherches sur l'activité de quelques vitamines ont délivrées les résultats suivants.Les vitamines E et A possèdent une activité androgène et agissent synergétique avec le testostérone en faisant grandir le poids des vésicules séminales de rats masculins châtrés. La vitamine B₁₂ fait voir aussi une activité androgène, mais aucun effet sur l'action de testostérone. D'autre part la vitamine C possède aucune qualité androgène, mais un effet synergétique avec le testostérone. Quant à la vitamine B₆, elle fait voir ni une qualité androgène, ni un effet synergétique avec le testostérone.

     

Nouvelles techniques de separations chromatographiques a l'aide de couches minces sur support flexible: Eastman Chromagram

Résumé La chromatographie sur couche mince donne lieu chaque jour à des applications nouvelles. Sa mise au point sur support souple a par exemple, permis de réaliser des progrès dans plusieurs domaines.Grâce à la possibilité de courber la feuille, on a pu faire des séparations sur cône, en conservant la finesse de séparation de la couche mince, et en profitant des possibilités de concentration croissante avec la migration, caractéristique de la technique sur cône.En chromatographie quantitative, ou dans certains cas de séparation, on a pu sur des couches suffisamment épaisses isoler complètement les produits séparés en découpant les taches ou les zones avec des ciseaux. Cette technique peut être employée simultanément avec la chromatographie sur cône. Dans le cas de séparations sur couche de polyamide non insolubilisée, il a été possible, après séparation, de clarifier la couche par des vapeurs d'éthanol. Après découpage et pelliculage de la couche chromatographique, on a pu faire ensuite des spectrophotomètries par transmission dans le visible et l'ultra-violet jusqu'à 240 nm afin de caractériser les produits séparés. L'étude du déplacement des bandes d'absorption par rapport à une spectrophotométrie en solution a été faite dans quelques cas expérimentaux.D'autre part, en travaillant sur des couches très minces (silice, alumine, résine micro-coagulée de type polycarbonate) on a pu accroître le pouvoir résolvant de la couche, c'est à dire diminuer les prises d'essais à 0,2, µl et réduire la distance de séparation à moins de 4 cm.Des exemples de séparations notamment de colorants, de vitamines, de corps gras, de sucres, de pesticides sont cités dans ces divers domaines.

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Summary Thin-Layer chromatography finds new applications each day. Its use of a flexible support, for instance, made possible advancement in several fields.Thanks to the possibility of bending the sheet it was possible to make separations on a cone, while preserving the fineness of separations obtained on thin-layer and taking advantage of the possibilities of concentrations increasing with the migration, characteristic of the technique on cones.In quantitative chromatography, and in certain cases of separation, it was possible, on sufficiently thick layers, to completely isolate the separated products by cutting out the spots or zones with scissors. This technique can be used simultaneously with cone chromatography. In the case of separations on layers of unsolibilized polyamide, it was possible, after separation, to clarify the layer with ethanol vapours. After cutting out and turning the chromatographic layer into a film, it was possible to achieve spectrophotometries by transmission in the visible and the ultraviolet zone until 240 nm in view to characterize the isolated products. The study of the migration of absorption bands compared to a solution spectrophotometry has been done in a few experimental cases.On the other hand, by operating on very thin layers, (silica, alumina, micro-coagulated resin of polycarbonate type) it was possible to increase the resolving power of the layer, which means that it was possible to diminish the importance of the experimental sample to 0.2 µl, and reduce the distance of separation to less than 4 cm.Examples of separations, more particularly of dyes, vitamins, fats, sugars, pesticides, are given in these various fields.

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Zusammenfassung Die Dünnschichtchromatographie findet immer neue Anwendungsbereiche. Die Technik mittels flexiblen Trägern erlaubte auf verschiedenen Gebieten nennenswerte Fortschritte.Infolge der Möglichkeit, das Band zu biegen, konnte man Trennungen gemäß der Konustechnik durchführen, wobei die Trennfeinheit der dünnen Schicht gewahrt blieb und von der mit der Migration anwachsenden Konzentrierung, die charakteristisch ist für die Konustechnik, profitiert wurde.In der quantitativen Chromatographie, oder für bestimmte Trennungen, konnte man auf genügend dicken Schichten die getrennten Stoffe durch Abschneiden der Flecke oder der Zonen völlig isolieren. Diese Technik kann ebenfalls für die Konus-Chromatographie zur Anwendung kommen. Im Fall der Trennungen auf unlöslich gemachten Polyamid-Schichten war es nach der Trennung möglich, die Schicht mittels Ethanoldämpfen zu klären. Nach Schneiden und Zubereiten der chromatographischen Schicht konnte man anschließend Spektrophotometer-Aufnahmen durch Übertragung in den sichtbaren und Ultraviolettbereich bis 240 nm herstellen, die der Charakterisierung der getrennten Produkte dienten. Das Studium der Verschiebung der Absorptionsstreifen im Verhältnis zur Spektrophotometeraufnahme in Lösung wurde für einige Versuche durchgeführt.Man hat andererseits bei Versuchen mit sehr dünnen Schichten (Siliziumdioxyd, Aluminiumoxyd, mikrokoaguliertes Harz vom Polykarbonate-Typ) das Lösungsvermögen der Schicht vergrößern können, was zu einer Verringerung der Proben auf 0.2 µl und des Trennabstandes auf weniger als 4 cm führte.Beispiele von Analysen der Farbstoffe, der Vitamine, von Fetten, Zuckern und Pestiziden werden gegeben.

     

Dünnschichtchromatographisches Verfahren zur Schnellbestimmung von Vitamin C in Lebensmitteln

Zusammenfassung Mit der von Verfassern entwickelten dünnschichtchromatographischen Methode kann die Ascorbinsäure und Dehydroascorbinsäure — von sämtlichen störenden Stoffen vollkommen getrennt — in Extrakten von rohen und wärmebehandelten Lebensmitteln bestimmt werden. Das Dehydroascorbinsäure-Osazon trennt sich beim Chromatographieren mit einem Benzol-Aceton-Pyridin-Gemisch (80 : 12 : 8) in Form eines bläulich-violetten Fleckes von den gelblichen Osazonflecken der übrigen Verbindungen. Die neue Methode wurde mit einer photometrischen (,'-Dipyridylmethode) und einer Titrationsmethode (2,6-Dichlorphenolindophenol-Methode nachTillmans) durch Untersuchung von mehreren rohen, wärmebehandelten und tiefgekühlten Lebensmitteln verglichen. Durch die aus den Unterschieden der Mittelwerte der Methoden berechnete statistische Bewertung wurde bewiesen, dass kein signifikanter Unterschied zwischen den Methoden besteht.

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Summary An extract of the product containing vitamin C is treated by a mixture of oxalic acid and ethanol in the ratio of 1 to 1.Ascorbic acid is oxydized by bromine, and from the resulting dehydroascorbic acid we obtain osazone by a treatment with 2–4 dinitrophenylhydrazine.The sedimented osazone being soluble in ethyl acetate, is separated from the haze materials by thin layer chromatography.The mixture of benzol, acetone and pyridin, (in the ratio of 80 to 12 and 8) that is used as solvent gives a clean partition as long as the haze-forming materials are not too numerous.The content of the samples in vitamin C was determined by comparison with spots of ascorbic acid and osazone of known concentration plated simultaneously.We have determined the vitamin C content in several fresh, lyophilized, and thermally processed products. For comparison parallel analyses have been done on each of the samples by the other two conventional methods.

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Résumé Nous traitons un extrait de denrées qui soutient la vitamine C à l'aide du mélange de l'acide oxalique et de l'éthanol dans la proportion de 1 à 1.L'acide ascorbique est oxydée par brome, et de l'acide dehydroascorbique qui s'est constituée ainsi, nous produisons osazone à l'aide de 2–4 dinitrophénylhydrasine.Le sediment d'osazone étant solué dans l'acétate éthylique, nous séparons avec matériaux troublants par chromatographie en couche mince.Le mélange de benzol, d'acétone et de pyridine (dans la proportion de 80 à 12 et 8) qui est employé comme solvant, donne une séparation nette jusqu'à la présence de grandes quantités des matériaux troublants.Nous avons enregistré la teneur en vitamine C dans les échantillons, par comparaison avec les taches de l'acide ascorbique et d'osazone, dont la concentration était déjà connue, l'étalement étant fait simultanément.Nous avons enregistré le contenu de vitamine C dans plusieurs prod uits frais et de ceux qui ont été lyophilises et traités thermiquement. Pour comparer, nous avons procédé aux analyses parallèlement avec chacun des échantillons à l'aide des deux autres méthodes conventionnelles.

     

Chromatographische Untersuchungen über den Einfluß von Kalium- und Phosphat- Düngung auf den Gehalt von einigen Aminosäuren in Erbsen

Zusammenfassung Das eindimensionale chromatographische Verfahren mit Phenol als Lösungsmittel, mit dem Glutaminsäure, Asparaginsäure, Serin, Glycin und Threonin im Erbsenhydrolysat getrennt und quantitativ bestimmt werden können, wurde nachgeprüft.Die Bedingungen, die sowohl die quantitative als auch die qualitative Bestimmung der Aminosäuren ermöglichen, die Behandlung des Papiers, die Verwendung einer Pufferlösung (pH 12) statt Ammoniak, die Darstellung der Eichkurve für jedes Chromatogramm, die Dauer der Farbentwicklung und schließlich die Messung der Farbintensität wurden untersucht. Bei sorgfältiger Arbeit ist es möglich, mit einer Genauigkeit von ± 5% die obigen Aminosäuren quantitativ zu bestimmen.Die Ergebnisse der Düngungsversuche bei Erbsen zeigten, daß — obwohl die Kali- und Phosphordüngung Einfluß auf den Ertrag und den Gehalt an Rohprotein hat — keine Korrelation zwischen der Zusammensetzung des Rohproteins an Glutaminsäure, Asparaginsäure, Serin, Glycin und Threonin und der Düngung besteht.

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Summary Using phenole as a solvent, the one- dimensional chromatographic method by means of which glutamic acid, aspartic acid, serine, glycine and threonine can be separated and quantitatively determined in pea hydrolysate has been examined again.The conditions affecting the quantitative as well as qualitative determination of the amino acids—the treatment of the chromatographic paper, the substitution of buffer solution (pH 12) for ammonia, the drawing of the standard curve for each chromatogram, the duration of the colour development and finally, the measurement of the colour intensity were investigated. With a thorough work, it is possible to determine these 5 amino acids with an accuracy of ± 5%.The results of the fertilizer experiments with peas show that although the potassium and phosphate fertilization affects the yield and the crude protein contents of the peas, there is no correlation between the amino acid composition of the crude protein and the fertilization.

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Résumé On a vérifié le procédé unidimensionnel chromatographique en se servant de phénol comme milieu de solution dans lequel on peut, au cours de l'hydrolysat des pois, dissocier et déterminer quantitativement: l'acide glutaminique, l'acide asparaginique, le sérine, le glycine et le thréonine.Les conditions permettant de déterminer quantitativement les amino-acides, le traitement du papier, l'utilisation d'une solution (pH 12) qui ralentisse l'opération de préférence à l'amoniaque, l'étude de la courbe type de chacun des chromatogrammes, la durée du changement de coloration en fin le mesurage de l'intensité des couleurs — tout ceci a fait l'objet de nos travaux. Un travail minutieux permet de déterminer quantitativement les amino-acides précipités avec une exactitude de ± 5%.Les résultats des expériences faites sur l'amendement des pois montrent qu'il n'existe aucune corrélation entre la synthèse des éléments de la protéine brute: acide glutaminique, acide asparaginique, sérine, glycine, thréonine et l'amendement, bienque cependant l'amendement par la potasse et le phosphore aient une influence sur le rendement et la teneur en protéine brute.

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Direktor: Prof. Dr. Dr. h. c. F.Scheffer, Göttingen, Nikolausberger Weg 7     

Thin-layer chromatography of tocopherols of oil seeds

Summary The thin- layer chromatography technique on Silicagel G/250 and with chloroform as solvent, has been adapted for separation and estimation of tocopherols in linseed, rapeseed and soybean. The isolation of an additional tocopherol with Rf value between and tocopherol has been achieved in all investigated seeds. Moreover, linseed has been found to contain only traces of tocopherol, the main amount, till now determined as tocopherol has been localised in the new fraction.The absorption maximum of this fraction has been found to be at 293 mµ. It gives positive reaction with Emmerie-Engel and Further-Meyer reagent and is more susceptible to oxidation than other tocopherols found in the benzene solution of unsaponified matter of oil of investigated seeds. It is supposed that the new tocopherol is identical with 5.7,8-tocotrienol, i.e. with zetatocopherol. It has been stated, that this fraction is separable only, when the chromatography cell is full saturated with solvent vapors and the adsorbent is long time activated at 130°C. The content of this tocopherol in investigated oil seeds has been determined.

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Zusammenfassung Die DC-Technik auf Kieselgel G (250 µ) mit Chloroform als Lösungsmittel wurde zur Trennung und zur quantitativen Analyse der Tocopherole in Samen von Raps, Lein und Soja angewandt. Bei allen untersuchten Samen erhielt man die Trennung eines zusätlichen Tocopherols mit einem Rf Zwischenwert (zwischen den alpha- und den gamma-Tocopherolen). Ferner wurde festgestellt, da Leinsamen nur Spuren von alpha-Tocopherol enthält, daß der Hauptanteil, der bis jetzt als alpha-Tocopherol bestimmt werden konnte, sich in dieser neuen Fraktion befindet. Die maximale Absorbierung dieser Fraktion liegt bei 293 mµ. Sie gibt eine positive Reaktion mit dem Reagenz Emmerie-Engel und Further-Meyer und ist leichter oxidierbar als die anderen Tocopherole, die man in der Benzollösung des Unverseifbaren der untersuchten Samenöle fand. Es ist zu vermuten, daß das neue Tocopherol identisch ist mit 5,7,8-Tocotrienol, das heißt mit dem zeta-Tocopherol. Es wurde gezeigt, daß diese Fraktion nur getrennt werden kann, wenn die chromatographische Zelle mit Lösungsmitteldämpfen gesättigt ist und der Adsorptionsstoff einer längeren Aktivierung bei 130°C unterzogen wurde. Der Gehalt der Ölsamen an diesem Tocopherol wurde untersucht.

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Résumé La technique de la CCM sur Silicagel G (250 g), avec du chloroforme comme solvant a été adaptée pour la séparation et l'analyse quantitative des tocopherols dans les graines de lin, de colza et de soja. La séparation d'un tocopherol supplémentaire avec une valeur de Rf intermédiaire entre celles des alpha et des gamma tocopherols a été obtenue dans toutes les graines analysées. De plus il a été établi que les graines de lin ne contenaient des alphatocopherols qu'à l'état de traces, la majeure partie de la teneur, déterminée à ce jour comme des alpha-tocopherols, se trouvant dans cette nouvelle fraction.L'absorption maximum de cette fraction a été obtenue à 193 mµ. Elle donne une réaction positive au réactif de Emmerie-Engel et Further-Meyer, et est plus facilement oxydable que les autres tocopherols trouvés dans la solution benzenique de l'insaponifiable des huiles des graines étudieées. On suppose que ce nouveau tocopherol est identique au 5.7,8-tocotrienol, c'est-à-dire, avec le zetatocopherol. Il a été montré que cette fraction n'est séparable que lorsque la cellule chromatographique est saturée de vapeurs du solvant et que l'adsorbant a subi une longue activation à 130°C. La teneur des graines oléagineuses en ce tocopherol a été étudiée.

     

Applications of gas chromatography in studying the aromatic qualities of wines

Summary The possible uses of different types of the gas chromatography in the study of the aromatic qualities of wines are considered. It is concluded that the vapor sampling chromatograph with its extreme sensitivity will be of value in following changes with age in bottled wines. The techniques of isolating and concentrating aroma materials from wines are discussed. The various types of columns to be employed and the attendant chemical separations used are considered with particular respect to the analyses of free volatile acids, free alcohols, esters and carbonyl compounds in aroma extract fractions. The uses of the gas chromatograph in analysis of fusel oils from wines, in the analysis of the high boiling esters from a muscat raisin fusel oil and in the analysis of the aroma material from flor sherry are discussed.

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Zusammenfassung Die Anwendungsmöglichkeiten verschiedener gaschromatographischer Verfahren zum Studium der Aromastoffe des Weines wurden untersucht, mit dem Ergebnis, daß der Chromatograph für Muster in dampfförmigem Zustand infolge seiner hohen Empfindlichkeit besonders geeignet ist, die durch die Alterung des Weines erfolgten Veränderungen festzustellen. Die Technik der Trennung und der Konzentrierung der aromatischen Stoffe wird diskutiert und verschiedene Kolonnen mit den entsprechenden chemischen Trennverfahren studiert. Insbesondere wird ihre Eignung hinsichtlich der Analyse flüchtiger, freier Säuren, der freien Alkohole, der Ester und der Karbonylverbindungen in den Fraktionen der Aromastoffe besprochen. Die Durchführung der gaschromatographischen Verfahren für die Untersuchung von Fuselölen des Weins, für die Analyse der Ester mit hohem Siedepunkt aus einem Fuselöl eines aus getrockneten Trauben hergestellten Muskatweines und für die Bestimmung der aromatischen Stoffe eines Sherry wird besprochen.

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Résumé Les possibilités de l'emploi de différents genres de chromatographie en phase gazeuse dans l'étude des propriétés aromatiques des vins ont été examinées. On a conclu que la chromatographie permettant de prélever des échantillons de vapeurs sera d'une grande utilité, du fait de son extrême sensibilité, pour étudier les modifications causées par le vieillissement des vins. Les techniques de séparation et de concentration des substances aromatiques des vins sont discutées. Au cours de ce rapport on étudie les divers types de colonnes, et les méthodes de séparation chimique s'y rattachant, plus particulièrement du point de vue de l'analyse des acides volatils libres, des alcools libres, des esters et composés carbonyliques dans les fractions des extraits aromatiques. L'utilisation de la chromatographie en phase gazeuse dans l'analyse des huiles de fusel des vins, dans l'analyse des esters à point d'ébullition élevé, provenant d'une huile de fusel d'un vin muscat, préparé à partir de raisins secs, et dans l'analyse des substances aromatiques de Jerez (flor sherry) est discutée.

     

L'utilisation de la chromatographie sur couches minces pour separer quantitativement les flavonols des anthocyanes des extraits et jus de raisin et des vins en vue du dosage de ces colorants jaunes

Résumé Les recherches sur les flavonols du raisin et du vin prennent une importance croissante, notamment à cause des propriétés vitaminiques et physiologiques de ces polyphénols et de l'intérêt que présentent ces colorants jaunes en génétique.Dans le cas du raisin, on constate qu'il n'existait pas jusque-là de méthode adéquate d'isolement quantitatif des flavonols. Or la chromatographie sur couche mince permet une séparation fine des divers polyphénols, et en particulier des flavonols, sans qu'un traitement préalable du vin soit nécessaire. Cette technique donne en outre la possibilité de récupérer facilement ces flavonols en vue de leur dosage.Au cours des recherches entreprises dans cette direction à la Station Centrale de Technologie des Produits Végétaux (I.N.R.A.) de Narbonne, on a d'abord sélectionné la cellulose comme support et deux solvants de développement. Le mode opératoire établi, fondé sur la chromatographie bidimensionnelle conduit simultanément à la séparation entre flavonols et anthocyanes et à la séparation individuelle des divers flavonols, glucosides et aglucones, qu'il est ainsi possible d'identifier et de doser après grattage et élution.Le dosage global est fondé sur la mesure, à 430 mµ, de l'exaltation de la densité optique due à la formation d'un complexe avec l'aluminium. Dans les conditons précisées, l'exaltation est proportionnelle au nombre de molécule-grammes de flavonols par litre et indépendante de la nature des flavonols. La rutine est prise comme étalon. La précision des résultats est de ± 4 mg/l.Le choix de la chromatographie sur couche mince de cellulose permet l'utilisation de cette méthode dans le cas des moûts, des jus et des extraits.L'application de cette méthode montre que les vins rouges peuvent contenir de l'ordre de 100 mg de ces colorants jaunes par litre (vendange éraflée). Les vins blancs sont très pauvres (de l'ordre de 5 mg/l), sauf s'ils proviennent d'une vinification avec macération des pellicules auquel cas ils sont aussi riches en flavonols que les vins rouges.

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Summary Investigations on flavonols of grapes and wine are growing in importance, especially because of the vitaminic and physiological properties of these polyphenols and of the interest presented by these coloured compounds in genetics.In the case of grapes one may see that up to now there was no adequate method for the quantitative isolation of flavonols. Now thin-layer chromatography makes possible a precise separation of the various polyphenols, and particularly of flavonols without any previous treatment of the wine being necessary. This technique gives also the possibility of easily recovering these flavonols in view of their quantitative determination.In the course of investigations undertaken in this direction by the Central station of Technology of vegetable products (INRA) of Narbonne, cellulose as support and two developing solvents were selected. The operatory procedure, such as it was established, based on bi-dimensional chromatography, leads simultaneously to a separation between flavonols and anthocyans, and to the individual separation of the various flavonols, glucosides, and aglucones, that it is possible to identify and determine quantitatively after scraping and elution.The overall quantitative determination is based on the measuring at 430 mµ, of the increase of the optical density due to the formation of a complex with aluminium. In the conditions of the experiment this increase is proportional to the number of molecule-grams of flavonols. Rutin is taken for standard. The precision of the results is ± 4 mg/l.The choise of chromatography on thin-layer of cellulose enables this method to be used in the case of musts, juices, and extracts.The application of this method shows that red wines can contain as much as 100 mg of those yellow-coloured substances per liter (after destemming). White wines are very poor (of about 5 mg/l) except when they are macerated with their skins during the elaboration of the wine, in which case they are as rich in flavonols as are the red wines.

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Zusammenfassung Die Forschungen über die Flavonole der Rebe und des Weines werden immer bedeutender, besonders wegen der physiologischen Eigenschaften dieser Polyphenole, auch als Vitamin, und dem genetischen Interesse dieser gelben Farbstoffe. Im Fall der Rebe stellt man fest, daß es bisher keine entsprechende Methode zur quantitativen Isolierung der Flavonole gab. Die DC erlaubt aber eine feine Scheidung der verschiedenen Polyphenole, besonders der Flavonole, ohne vorherige Behandlung des Weines. Diese Technik gibt übrigens die Möglichkeit, diese Flavonole zur Bestimmung leicht zu gewinnen. Im Verlauf der Forschungen in dieser Richtung hat man in der Zentrale für Technologie der Pflanzenprodukte (I.N.R.A.) von Narbonne die Cellulose als Träger und zwei Entwicklungslösungsmittel gewählt. Dieser Arbeitsvorgang, die zweidimensionale Chromatographie, führt sowohl zur Trennung der Flavonole und Anthocyane, als auch zur individuellen Trennung der verschiedenen Flavonole, Glucoside und Aglucone, die auf diese Weise identifiziert und nach dem Abkratzen und Eluieren bestimmt werden können. Die quantitative Bestimmung basiert auf der Messung bei 430 mµ, der Erhöhung der optischen Dichte mittels Bildung eines Komplexes mit Aluminium. Unter den Versuchsbedingungen steht diese Erhöhung im Verhältnis zur Zahl der Gramm-Mole der Flavonole je Liter und ist unabhängig von der Natur der Flavonole. Das Rutin dient zur Eichung. Die Genauigkeit der Ergebnisse ist ± 4 mg/l. Die Wahl der DC auf Cellulose erlaubt die Verwendung dieser Methode für Moste, Säfte und Extrakte. Die Anwendung dieser Methode zeigt, daß die Rotweine diese gelben Farbstoffe in der Größenordnung von 100 mg/l enthalten können (Weinlese nach Abbeeren). Die Weißweine sind sehr arm (in der Größenordnung von 5 mg/l), außer wenn bei der Weinbereitung der Most lange auf der Maische steht. Im letzten Fall sind sie so reich an Flavonolen wie die Rotweine.

     

Principes et applications de la chromatographie en phase vapeur

Resumé La chromatographie en phase vapeur ne doit pas être considérée comme une distillation fractionnée, mais comme une séparation des constituants d'un mélange basée sur un phénomène d'adsorption des différentes substances à l'état de vapeur sur la paroi du tube, conformément `a la th%eorie émise par HenriDevaux.L'auteur passe en revue les avantages présentés par cette méthode qu'il a lui-même pratiquée longuement: à savoir sa grande sensibilité, rendant possible la séparation de quantités de l'ordre de 10-⁷g; sa grande rapidité, permettant d'effectuer certaines analyses, exigeant autrefois plusieurs jours, en quelques minutes; sa réproductibilité et sa fidélité; l'absence de phénomènes d'azéotropie, et la possibilité qu'elle donne de séparer des isomères de position.La chromatographie en phase vapeur a permis notamment de réaliser des progrès substanciels dans l'analyse des corps gras, du sang humain, et l'identification de certains alcools jusqu'alors insoupçonnés, dans les phénomènes de fermentation.

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Summary Vapour-phase chromatography should not be considered as a fractional distillation but as a separation of the constituents of a mixture, based on the phenomenon of adsorption of different substances as vapours on the walls of the tube, in conformity with the theory exposed by HenriDevaux. The author reviews the advantages offered by this method, put into practice by him a long time, i.e.: its great sensibility, making possible the isolation of quantities as minute as 10^–7 g; its speed, making possible some analyses that would normally have taken several days, in a few minutes; its reproducibility and fidelity; the absence of any phenomenon of azeotropy, and the possibility to separate positional isomers.Vapour-phase chromatography has rendered possible, more particularly, substancial advances in the analysis of fats, human blood, in the perfume industry, and the identification of certain alcohols, the precense of which has been up to now unsuspected, in fermentation phenomena.

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Zusammenfassung Die Chromatographie in der Dampfphase soll nicht als eine fraktionierte Destillation aufgefaßt werden, sondern vielmehr als ein Trennverfahren der Bestandteile einer Mischung auf Grund eines Adsorptionseffektes auf der Rohrwandung der verschiedenen Substanzen in gasförmigen Zustand, entsprechend der Theorie von H.Devaux. Der Autor erklärt die Vorzüge dieser Analysenmethode, welche er gründlich angewandt hat; große Empfindlichkeit, die Quantitäten in der Größenordnung von 10-⁷ g zu trennen erlaubt, große Schnelligkeit, so daß gewisse Analysen, die früher mehrere Tage erforderten, in wenigen Minuten durchgeführt werden können, Wiederholbarkeit und treue Wiedergabe, Fortfall azeotropischer Einflüsse, Trennung der Isomere.Die Chromatographie in der Dampfphase bringt unter anderem wesentliche Fortschritte für die Analysenergebnisse der Fette und Öle, des menschlichen Blutes, für die Feststellung bestimmter Alkohole in Gärungsprozessen.

     

Gaschromatographische Untersuchungen an elektronenbestrahlten Fetten

Zusammenfassung Untersuchungen über die chemischen Veränderungen in Fetten, die mit 100 Mrad bestrahlt wurden, ergaben, daß Verbindungen mit mittelkettigen Fettsäuren entstehen. Neben einer Abspaltung endständiger Methylgruppen tritt besonders eine Trennung der mittelständigen C-C-Bindungen auf, wodurch gesättigte und ungesättigte C₆- bis C₁₁-Bruchstücke nachweisbar werden. Die Doppelbindungen selbst sind relativ stabil, doch werden die der Doppelbindung benachbarten C-C-Einfachbindungen bevorzugt gespalten. Neben der Bildung von Fettsäuren findet auch eine solche von Carbonylverbindungen statt. Mehr als 20 verschiedene Ketone und Aldehyde konnten gaschromatographisch nachgewiesen werden. Die Aufspaltung der Ester-C-O-C-Bindung ist meist von einer Zerstörung der Fettsäurekette begleitet, wodurch Carbonylverbindungen mit 6 bis 12 C-Atomen entstehen. Relativ große Mengen von ungesättigten C₉-Ketonen und geringe Menge von Ketonen mit mehr als 13 C-Atomen werden in bestrahltem Tripalmitin sowie in bestrahlter Palmitinsäure gefunden. In ungesättigten Ölen treten diese Verbindungen nicht auf, dagegen enthalten diese mehr C₁₁-und C₁₂-Ketone.

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Summary Experiments on the chemical transformation of fats irradiated at 100 Mrads have shown the formation of fatty acid, median-branched bonds.Besides a separation of terminal branchings of methyl groups appears more particularly a scission of the median branchings C-C, following which saturated and unsaturated fragments from C₆ to C₁₁ have been made apparent. The double bonds themselves are relatively stable, while the single bonds adjacent to the double one, are in majority separated. Aside from the formation of fatty acids occurs also the formation of carbonyl bonds.More than 20 different ketones and aldehydes have been detected by gas chromatography. The scission of the bond ester-C-O-C is generally accompanied by a destruction of the fatty acid chain, following which appears the carbonyl bonds, with 6 to 12 atoms of carbon.Relatively great quantities of unsaturated C₉ ketones and small quantities of ketones with more than 13 atoms of carbon have been found in irradiated tripalmitin and in irradiated palmitic acid. In unsaturated oils these compounds are not found, but, on the other hand these oils have a greater content in C₁₁ and C₁₂ ketones.

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Résumé Des expériences sur les transformations chimiques des matières grasses, irradiées à 100 Mrad, ont montré la formation de liaisons à branchements médians d'acides gras.A côté d'une séparation de branchements terminaux de groupes méthyles, apparait en particulier une scission des branchements médians C-C, à la suite de laquelle des fragments saturés et non saturés de C₆ jusqu'à C₁₁ ont été mis en évidence. Les liaisons doubles mêmes sont relativement stables, cependant les liaisons simples, voisines à la liaison double, se trouvent en prédominance séparées.A côté de la formation d'acides gras, la formation de liaisons carbonylées a également lieu.Plus de 20 différents cétones et aldéhydes ont pu être mis en évidence par la chromatographie en phase gazeuse. La scission de la liaison ester-C-O-C-est généralement accompagnée d'une destruction de la chaîne d'acide gras, à la suite de laquelle naissent les liaisons carbonylées de 6 à 12 atomes de carbone.Des quantités relativement grandes des cétones C₉ non saturés et de petites quantités de cétones avec plus de 13 atomes de carbone ont été trouvées dans la tripalmine irradiée, ainsi que dans l'acide palmitique irradié. Dans les huiles non saturées, ces combinaisons ne se trouvent pas, par contre ces huiles contiennent davantage de cétones C₁₁ et C₁₂.

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mit 3 Fig.     

Quelques progres dans la chromatographie sur couche mince

Résumé L'auteur envisage les possibilités d'améliorer le pouvoir séparatif et discute plus particulièrement de la variabilité des conditions de milieu tel que l'atmosphère de la chambre, mode de développement et conditions initiales.Du point de vue de l'examen des chromatogrammes les relations entre le mode d'analyse, la surface des zones et la nature des substances sont démontrées. Dans cet ordre d'idées trois groupes de procédé de haute sensibilité sont envisagés.1. méthode universelle.2. méthode des groupes.3. méthode spécifique sur une substance déterminée.Les résultats d'essais présentés dans la partie finale de l'exposé montrent qu'il est possible de raccourcir sensiblement le temps de séparation en se servant de couches possédant une constitution et une granulométrie déterminée ou en utilisant des substances d'élution spécifiques.L'auteur présente une classification selon leur vitesse de passage des solvants susceptibles d'être appliqués avantageusement à la C.C.M.L'existence d'un rapport plus ou moins étroit entre la vitesse et la viscosité des solvants a été démontrée.

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Summary The author considers the possibility of improving the separative power and discusses more particularly the variability of the conditions of the medium such as room atmosphere, method of development, and initial conditions.As regards the study of the chromatograms the correlation between the analytical procedure, the area of the spots, and the nature of the substances are demonstrated. From this point of view three groups of procedures of high sensitiveness are considered.1. Universal method.2. Method of groups.3. Method specific on a determined substance.The results of the tests presented in the final part of this report show that it is possible to shorten considerably the time for separation through the use of layers having a determined constitution and granulometry or by using specific substances for election.The author presents a classification of solvents that may be advantageously applied in thin-layer chromatography, based on the speed of their passage.

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Zusammenfassung In einer Übersicht werden die Möglichkeiten zum Verbessern der Trenneffekte besprochen. Den experimentell variablen Milieubedingungen, wie Kammerklima, Art der Entwicklung und den Verhältnissen am Startpunkt wird hierbei besondere Beachtung gewidmet. Im Hinblick auf die Auswertung der Chromatogramme werden die Zusammenhänge zwischen der Art des Nachweises, Zonengröße und Substanzart demonstriert. Erstrebenswert sind in diesem Zusammenhang drei Gruppen von Erkennungsmöglichkeiten: 1. Universal-, 2. Gruppen- und 3. Substanzspezifische Nachweisverfahren; alle mit hoher Empfindlichkeit. Die abschließenden Versuchsergebnisse zeigen, daß es durch die Verwendung von Schichten mit einer bestimmten Korngrößenzusammensetzung und/oder entsprechenden Fließmitteln gelingt, die Trennzeit erheblich zu verkürzen. Die in der DC häufig verwendeten Lösungsmittel wurden nach ihrer Wanderungsgeschwindigkeit geordnet und es ergab sich ein mehr oder weniger enger Zusammenhang mit deren Viskosität.

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avec 13 figs.