抗凋亡基因bcl—2在涎腺癌中的表达及意义

目的：观察ｂｃｌ－２基因表达对涎腺癌发生及发展的关系。方法；采用免疫组织化学法对５５例涎腺癌，２５例癌旁涎腺组织及１１例多形性腺瘤组织ｂｃｌ－２表达产物进行检测。结果：涎腺癌组织ｂｃｌ－２阳性表达明显高于癌旁涎腺组织及多形性腺瘤。ｂｃｌ－２表达与涎腺癌的临床分期及恶性程度有关，临床晚期组及恶性程度较高组ｂｃｌ－２呈现高表达。     

转移抑制基因nm23—H1在涎腺癌中的表达

目的：观察ｎｍ２３－Ｈ１基因表达与涎腺癌发生和转移的关系。方法：采用免疫组织化学法。结果：ｎｍ２３－Ｈ１基因在涎腺癌中表达阳性率为８８．３３％，癌旁涎腺组织为３７．５０％；ｎｍ２３－Ｈ１表达的阳性率与涎腺癌发生的部位、肿瘤大小及临床分期无关，而ｎｍ２３－Ｈ１高表达与颈淋巴结转移呈负相关。结论：ｎｍ２３－Ｈ１基因与涎腺癌发生有关；ｎｍ２３－Ｈ１高表达对涎腺癌颈淋巴结转移具有抑制作用。     

内皮素-1及其受体基因在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 :探讨内皮素 1 (ET 1 )及其受体A、B(ETAR、ETBR)在前列腺癌 (Pca)组织中的表达及临床意义。方法 :应用免疫组化和RT PCR方法检测Pca组织ET 1、ETAR及ETBRmRNA的表达 ,并同正常前列腺组织 (NP)比较。结果 :ET 1、ETARmRNA在Pca组织中的吸光度分别为 (1 .84± 0 .1 2 )与 (2 .4 1± 0 .1 6 ) ;与NP组织中的吸光度 [分别是 (0 .6 1± 0 .0 7) ,(0 .36± 0 .0 6 ]相比差异有显著性 (P <0 .0 1 ) ,而ETBRmRNA在Pca与NP组织中的表达差异无显著性 [吸光度分别为(0 .4 5± 0 .0 5 )与 (0 .5 5 2± 0 .0 7) ],P >0 .0 5。结论 :ET 1及ETAR在前列腺癌的发病过程中起一定作用     

棉花抗细胞凋亡基因GhDAD1的克隆、定位及表达分析

【目的】克隆陆地棉抗细胞凋亡新基因GhDAD1,为陆地棉细胞凋亡的分子机制提供依据,为培育不早衰陆地棉品种提供理论基础。【方法】采用RT-PCR以及电子克隆获得陆地棉GhDAD1的基因组序列以及全长cDNA序列并进行生物信息学分析,然后通过荧光原位杂交(FISH)技术进行染色体定位,利用real-timePCR进行表达模式分析,分析6-BA、乙烯、H2O2、SA以及NO对GhDAD1表达量的影响。【结果】棉花GhDAD1编码阅读框全长354bp,包含5个外显子,4个内含子以及232bp的5′非编码区和280bp的3′非编码区。氨基酸序列分析表明,GhDAD1蛋白属于DAD家族,与柑桔、拟南芥GhDAD1蛋白的相似性分别为91%和88%,起始密码子区符合Kozark规则,内含子剪接位点符合GT-AG规则。FISH技术将GhDAD1定位于染色体长臂上。real-time PCR分析表明,陆地棉各组织中均表达该基因,花和种胚等幼嫩组织表达量较高,并且随着衰老的进行,表达量降低。利用6-BA、乙烯、水杨酸、一氧化碳以及双氧水处理中棉所10号,qRT-PCR分析表明,6-BA、水杨酸处理能够延缓衰老,增加GhDAD1的表达量;乙烯能够加速衰老,降低GhDAD1的表达量;H2O2对GhDAD1的表达量的影响不大;而NO不同浓度影响不一样,随着浓度的升高,GhDAD1的表达量先升高后降低【。结论】陆地棉中存在抗细胞凋亡基因(GhDAD1)。     

上腹部手术患者手术和麻醉对中性粒细胞凋亡及bc1-2基因表达的影响

目的：研究手术与麻醉对上腹部手术患者的中性粒细胞(PMN)凋亡及Bcl—2基因表达的影响。方法：分离围术期上腹部手术患者外周血中性粒细胞，采用流式细胞仪分析培养24h中性粒细胞凋亡及bcl-2基因表达的情况。结果：与健康人相比，手术患者术前中性粒细胞调亡被明显抑制(P＜0．01)，bcl—2基因表达明显上调(P＜0．01)。而与手术患者自身术前相比，硬外麻醉后中性检细胞凋亡抑制及bcl-2表达上调变化不明显，但手术切皮后3h、术后24h、72h变化有显著的差异(P＜0．01)，且以术后24h达峰值。结论：外科创伤可导致明显的PMN凋亡抑制，而bcl—2基因表达上调可能是创伤后PMN凋亡抑制的分子机制之一，硬膜外麻醉对PMN凋亡及bcl—2基因表达影响不大。     

14-3-3及Bcl-2蛋白在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的通过检测14-3-3和Bcl-2蛋白在人脑胶质瘤中的表达情况,探讨其在胶质瘤发生、发展中的作用机制.方法采用免疫组化S-P法对5例正常脑组织标本和68例人脑胶质瘤标本进行14-3-3和Bcl-2蛋白检测.结果与正常脑组织比较,14-3-3蛋白在胶质瘤表达异常增强（P〈0.05）;在不同病理分级中胶质瘤组织表达无统计学意义（P〉0.05）,随着胶质瘤恶性程度的增加,14-3-3蛋白表达的强度和范围增加（P〈0.05）.Bcl-2蛋白在不同级别的恶性胶质瘤中阳性表达率有差别（P〈0.05）,且表达强度随着胶质瘤病理分级增高呈明显增高趋势.结论 14-3-3和Bcl-2蛋白对胶质瘤的恶性程度、肿瘤的病理分级有影响,可作为指导临床病理诊断及分级的参考指标.     

TNFAIP3和TNIP1基因在寻常型银屑病中的表达及意义

目的检测轻度和中重度寻常型银屑病患者的皮肤中肿瘤坏死因子-α诱导蛋白质3（TNFAIP3）和TNFAIP3相互作用蛋白质1（TNIP1）mRNA表达。方法采用实时荧光定量PCR来检测20例寻常银屑病患者皮损和正常皮肤中TNFAIP3和TNIP1 mRNA表达。结果与正常皮肤相比,10例轻度银屑病患者皮损中出现TNFAIP3基因表达下调和TNIP1基因表达上调（P〈0.05）。10例中重度银屑病患者的正常皮肤和皮损中,TNFAIP3和TNIP1 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 TNFAIP3和TNIP1 mRNA表达异常可能在寻常性银屑病的早期发挥作用。     

水稻基因OsGLP1-2的克隆、表达及功能分析

【目的】克隆水稻镉(Cadmium, Cd)响应基因OsGLP1-2,并对其进行生物信息学及Cd胁迫处理的表达模式分析,为探索OsGLP1-2基因在水稻中应对重金属胁迫的分子机制提供基础。【方法】以水稻为材料,利用PCR克隆OsGLP1-2基因,并利用生物信息学方法对其顺式作用元件、二级结构和疏水性等进行分析,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其在100μmol/L Cd处理下,水稻茎部和根部中的表达特征,再利用转基因酵母进行Cd耐受性分析。【结果】水稻OsGLP1-2基因编码区(CDS)序列长度为651 bp,编码216个氨基酸,其编码蛋白的相对分子量为22.48 kDa,理论等电点(PI)为7.16,为稳定性的中性疏水性蛋白,含有Cupin结构域,属于Cupin家族,该家族在植物防御等方面发挥着重要作用。同源家族进化树表明该基因是单独的一支,但与大麦HvGER5a的亲缘关系最为接近,表明OsGLP1-2可能具有HvGER5a类似的功能。二级结构分析表明该蛋白含有10个β折叠、8个α螺旋和17个无规卷曲结构。并且OsGLP1-2具有光、干旱等环境诱导相关的调节元件以及生长素、...     

CMV启动子指导pDsRed2-1基因在牛胎儿成纤维细胞中的表达

目的:为了检测扩增所得CMV启动子能够指导下游基因序列表达,从而可以为构建其它真核表达载体提供实验基础和依据。方法:对pEGFP质粒上的CMV启动子进行扩增,并将其插入pDsRed2-1质粒红色荧光蛋白上游,构建pCMV-Red质粒转染牛胎儿皮肤成纤维细胞,对其进行荧光检测。结果:质粒转染牛胎儿皮肤成纤维细胞48h后,荧光激发细胞,发红色荧光。结论:扩增所得CMV启动子具有启动其下游基因表达的功能。pCMV-Red质粒可用于构建其它真核表达载体。     

HEV2．1基因启动子在转基因橡胶树中的表达

橡胶蛋白与橡胶粒子的凝结有关,并且已知它在橡胶乳管细胞中是高表达。由于所有橡胶蛋白基因在其转录区是高度保守的,研究者对转基因橡胶树中一个启动子的功能进行了分析,以评估HEV2．1基因的表达,该基因是橡胶蛋白多基因家族中一员。筛选出3个携带HEV2．1：：GUS的转基因植株,用以再生小植株。利用gusA和橡胶蛋白反义mRNA探针对转基因和野生型植物组织分别进行原位杂交。     

家蚕凋亡相关基因ice的克隆及在大肠杆菌中的表达

ICE(白细胞介素-1β转换酶)是caspase家族 (半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶cys-teinylaspartate specific proteinase)中最早发现的成员,在多细胞生物细胞凋亡的过程中起着重要作用.为了深入了解模式昆虫家蚕ICE在凋亡通路中的作用,采用紫外线刺激家蚕细胞,PCR克隆获得2个新的ice基因不同剪切体,分别命名为ice-2和ice-5(GenBank登录号:DQ360829和DQ360830),并将这2个剪切体分别克隆进原核表达载体pET28a中,在大肠杆菌中诱导表达,对表达产物进行了检测,结果显示ICE-2和ICE-5蛋白表达过程中能发生自我剪切.     

环氧化酶-2及潜伏膜蛋白-1在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)、潜伏膜蛋白-1(LMP-l)在鼻咽癌的表达及临床意义。方法用SP免疫组织化学法检测76例鼻咽癌活检标本(鼻咽癌组)和32例正常鼻咽黏膜组织常规石蜡切片标本(正常组)的COX-2、LMP-1的表达情况,分析其与鼻咽癌的临床分期及颈部转移的关系。结果鼻咽癌组中COX-2及LMP-1在的阳性率分别为73.6%和63.2%,高于正常组织的6.2%和9.4%(均P<0.01)。颈部淋巴结转移组的COX-2及LMP-1表达的阳性率分别为83.6%和80.0%,均高于无颈部淋巴结转移组的47.6%和57.1%(P<0.01或0.05)。而鼻咽癌组中的早期与晚期的COX-2及LMP-1的阳性率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论 COX-2、LMP-1在鼻咽癌的发生及颈部淋巴结转移有重要的意义。     

抗细胞凋亡基因Bcl-2与肿瘤研究进展

利用丙烯酰胺和二甲基二烯丙基氯化胺共聚制得阳离子聚电解质.实验结果表明,在该聚合体系中大单体引发体系是两单体共聚优秀引发剂;该聚合体系的最佳条件是:单体浓度18%,引发剂用量为单体质量的1.6%,AM与DMC的摩尔配比为8:2,聚合温度30℃.     

抗细胞凋亡基因Bcl-2与肿瘤研究进展

bcl-2是滤泡型B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)的缩写,人bcl-2基因是从与滤泡性淋巴瘤相关的t(14:18)染色体易位的断裂点克隆到的.在此易位中,bcl-2从其正常位点(18q21)易位到与位于14q32的免疫球蛋白重链(1gH)座位并列的位置,这导致在淋巴瘤细胞中该基因的转录启动以及26kb bcl-2蛋白的过度表达.1984年Tsujimoto将18q21序列命名为bcl-2癌基因,它是研究最早的与细胞凋亡有关的基因.     

EMP2、TTF-1在子宫内膜增生恶变中的表达及意义

目的 了解子宫内膜增生症癌变中EMP2与TTF-1的表达及临床意义.方法 选取1990年1月至2014年10月在广东省中山市人民医院妇科就诊、初次病理诊断为子宫内膜增生症(包括单纯型、复杂型、不典型增生),且随访时再次行子宫诊刮或手术切除子宫的患者51例.根据是否癌变分为两组:子宫内膜增生癌变组28例,子宫内膜增生非癌变组23例.应用免疫组化S-P法检测上述两组组织标本EMP2和TTF-1的表达情况.结果 在子宫内膜增生非癌变组和子宫内膜增生癌变组标本组织中,EMP2蛋白的阳性表达率分别为17.39％和46.43％,差异有统计学意义(x2=4.791,P＜0.05);TTF-1的阳性表达率分别为60.87％和32.14％,差异有统计学意义(x2=4.209,P＜0.05).EMP2阳性者的比例随临床分期、组织病理分级的升高而增加(P＜0.05),而TTF-1阳性者的比例随临床分期、组织病理分级的升高而逐渐下降(P＜0.01或0.05).结论 EMP2和TTF-1可能参与子宫内膜增生症的癌变过程.     

β_1-和β_2-微管蛋白基因在赤霉病菌抗多菌灵中的作用

【目的】揭示β1-微管蛋白基因(β1-tub)和β2-微管蛋白基因(β2-tub)在赤霉病菌(Gibberella zeae)对多菌灵的抗性过程中所起的作用。【方法】采用PCR克隆测序法测定Js449(EC50=7.911μg·m L-1)、Js462(EC50=6.515μg·m L-1)、Js484(EC50=5.031μg·m L-1)、Js506(EC50=8.455μg·m L-1)和Js519(EC50=6.280μg·m L-1)等5个多菌灵抗性菌株的α-、β1-、β2-、γ-tub序列,并与敏感菌株HG-1(EC50=0.552μg·m L-1)进行比对。采用实时荧光定量PCR(q PCR)测定β1-tub和β2-tub在多菌灵胁迫下的抗性菌株Js506中的相对表达量。构建β1-tub和β2-tub的超量表达载体,分别在HG-1中表达。运用split PCR获得含有潮霉素磷酸转移酶基因和目标基因的融合片段,并对Js506进行原生质体转化,通过同源重组获得β2-tub的敲除体和互补体。对菌株Js506、HG-1及其突变体分别进行多菌灵敏感性测定、菌落生长观察和致病力测定。【结果】基因比对结果表明,5个抗性菌株的α-、β1-、γ-tub基因序列与敏感菌株的一致。对β2-tub序列比对结果表明,Js449、Js462和Js506菌株的第167位氨基酸由苯丙氨酸(Phe)变为酪氨酸(Tyr)。Js484菌株的第200位氨基酸由苯丙氨酸(Phe)变为酪氨酸(Tyr)。Js519菌株的第198位氨基酸由谷氨酸(Glu)变为谷氨酰胺(Gln)。5μg·m L-1多菌灵能诱导Js506菌株的β1-tub表达量显著上调(P0.05)。10μg·m L-1的多菌灵对Js506菌株的β2-tub表达量影响不显著。β1-tub的超量表达使HG-1突变体的EC50增加至2.839μg·m L-1,抗药性显著增强(P0.05)。β2-tub超量表达突变体的抗性水平与野生型菌株无显著差异。对Js506菌株的β2-tub进行敲除试验,分别获得了2个转化体(△β2tub-Js506-1、△β2tubJs506-2),经潮霉素抗性筛选、PCR和Southern杂交验证,确认2个转化体均不含有β2-tub。与野生型菌株Js506相比,敲除体△β2tub-Js506-1(EC50=0.078μg·m L-1)和△β2tub-Js506-2(EC50=0.072μg·m L-1)对多菌灵均表现为超级敏感,且菌落生长变慢,致病力显著下降(P0.05)。对△β2tub-Js506-1进行互补转化获得了2个互补体,β2tub-Js506-C1(EC50=7.521μg·m L-1)和β2tub-Js506-C2(EC50=7.243μg·m L-1),2个互补转化体均使敲除体△β2tubJs506-1基本恢复了抗性、菌落生长速率和致病力。【结论】5个赤霉病菌菌株对多菌灵的抗性与β2-tub的第167、198、200位密码子突变有关,与α-、β1-和γ-tub序列的突变无关。β1-tub在多菌灵胁迫下诱导表达,且β1-tub的超量表达能增强赤霉病菌对多菌灵的抗性。β2-tub是小麦赤霉病菌对多菌灵抗性所必需的,β1-tub和β2tub均能影响赤霉病菌对多菌灵的抗性。     

鸡白细胞介素-2基因在Pichia methanolica酵母中的表达

鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichia methanolica (P. methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P. methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达菌株(pMETαA/rchIL-2).经SDS-PAGE、Western印迹测定,证实chIL-2基因在P. methanolica中表达成功,rchIL-2的分子量约为16 kDa,其表达量占分泌总蛋白的35%.     

DGAT1-2基因在超高油玉米中的转化、表达及对油脂含量的影响

【目的】三酰甘油是油料作物油脂的主要成分,二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)是催化三酰甘油合成唯一的关键酶和限速酶.探讨DGAT基因对超高油玉米Zea mays L.种子油分含量的影响,以进一步提高超高油玉米的含油率.【方法】采用花粉管通道法将DGAT1-2基因导入超高油玉米自交系,在盆栽条件下5~6叶期对T1代植株进行PCR检测筛选,Southern杂交进一步验证.成熟时收获10株自交授粉的转基因植株(T2代)籽粒,测籽粒平均含油率,通过t检验进行统计分析.【结果和结论】初步筛选获得假定转化植株163株,Southern杂交获29株转基因植株,平均转化率为1.44%.t检验结果表明,10株自交授粉的转基因植株(T2)籽粒平均含油率比非转基因植株籽粒平均含油率提高了6.19%,差异极显著(P0.01).利用花粉管通道法导入DGAT1-2基因,可显著提高超高油玉米籽粒含油率,是一种切实有效提高超高油玉米含油量的新途径.     

猪TOLL样受体2基因在CHO-K1细胞中的表达

将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观察,转染细胞可见绿色荧光,表明获得了表达pTLR2的克隆细胞系.     

3-1E/mChIL-15融合基因构建及在真核细胞中的表达

将鸡堆形艾美尔球虫(E.acervulina)子孢子和裂殖子表面抗原3-1E基因片段与鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段(mChIL15)通过四个柔性氨基酸SPGS连接,构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1/3-1E-linker-mChIL-15。表达质粒纯化后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光和免疫组织化学方法对重组质粒的体外瞬时表达进行检测。结果表明,成功构建了融合基因3-1E-linker-mChIL-15,转染后30h可检测到融合基因编码的融合蛋白在293T细胞中的瞬时表达。研究为鸡艾美尔球虫基因工程疫苗进一步研制及应用奠定了基础。