蛹虫草固体培养产子实体条件的优化及其虫草素含量测定

本研究采用大米米饭固体培养基培养出蛹虫草子实体,在菌株、培养基、接种方式三个因素中筛选出高产蛹虫草子实体的最优组合,并与工业液体发酵蛹虫草菌丝体作比较,用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定了子实体和采后培养基中的虫草素含量,结果表明,子实体中的虫草素含量(10.22 mg/g)是采后培养基中虫草素含量(2.04 mg/g)的5倍,是工业液体发酵蛹虫草菌丝体中虫草素含量(7.06 mg/g)的1.45倍。     

提高蛹虫草培养物中虫草素含量的研究

为提高蛹虫草的虫草素含量，从寄主培养、液体培养、固体培养和代料栽培等方面进行研究，使蛹虫草培养物的虫草素含量获得显著提高，寄主培养的蚕虫草虫草素含量超过12mg／g，菌核超过30mg/g；液体培养的培养液超过0．2mg／ml，菌丝体超过3mg／g；固体培养物超过10mg/g，代料栽培子实体超过3mg/g，采后培养基的虫草素含量比子实体还要高。     

不出草的蛹虫草固体培养基中虫草素含量分析

确定不出草的蛹虫草(Cordyceps militaris)固体培养基中虫草素含量,可为合理利用不出草的蛹虫草固体培养基提供理论依据。以虫草素含量为检测指标,利用优化后的虫草素超声提取条件以及高效液相色谱定量分析条件,分别对5个不同批次不出草蛹虫草固体培养基中的虫草含量进行了测定。结果表明:5个批次的不出草蛹虫草固体培养基中均含有一定数量的虫草素,虫草素含量为347.2~735.5μg/g,平均548.5μg/g。不出草的蛹虫草固体培养基中虫草素含量较高,具有开发利用价值。本研究结果为今后从不出草的废弃固体培养基中提取虫草素提供了依据,有利于减少虫草资源的浪费。     

加硒对蛹虫草主要活性成分含量的影响

[目的]明确不同加硒量对蛹虫草主要活性成分含量的影响。[方法]向固体培养基中加入不同含量的亚硒酸钠,接种培养后用高效液相色谱法测定虫草素和腺苷,用高碘酸钠法测定虫草酸,用苯酚-硫酸法测定虫草多糖。[结果]虫草素在加硒量为5.5mg/kg时达到4.50mg/g,虫草酸在加硒量为4.0mg/kg时达到30.06mg/g,腺苷和虫草多糖含量与加硒量无明显相关性。[结论]加硒可显著提高蛹虫草固体培养物中虫草素和虫草酸含量,但医疗保健功效的提高还需通过动物试验加以验证。     

杜仲茎点霉SP-16F产松脂醇二葡萄糖苷营养条件的优化

【目的】对杜仲茎点霉SP-16F发酵生产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的营养条件进行优化,以提高发酵液中的PDG产量。【方法】在单因素实验的基础上,通过三元二次中心组合设计和响应面分析法优化杜仲茎点霉SP-16F发酵产生PDG的最佳营养条件。【结果】在液体培养条件下,茎点霉SP-16F产PDG的最佳培养基组成为:蔗糖47.5 g/L,NaNO33.0 g/L,K2HPO42.83 g/L。在最佳培养条件下,PDG产量预测值较优化前的最大值提高了3倍以上。【结论】获得了茎点霉SP-16F的最佳产PDG培养基,有效地提高了其发酵产PDG的能力。     

不同培养基对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量的影响

采用不同种类培养基栽培蛹虫草,以虫草素和腺苷含量为指标,筛选出培养蛹虫草的最优培养基。结果表明,最佳栽培培养基配方为3号培养基(大米40 g+纯柞蚕蛹),以3号培养基栽培获得的蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量均为最高,分别达到15 986.3 mg/kg和2176.5 mg/kg,与其它实验组结果的差异达到极显著水平。     

蛹虫草大米培养残基中虫草素提取方法的优化研究

[目的]优化蛹虫草大米培养残基中虫草素的提取方法。[方法]以蛹虫草大米培养残基为原料,根据虫草素的理化性质,采用不同提取溶剂、温度、时间和pH值,进行单因素试验设计,利用HPLC技术检测虫草素。[结果]结果表明,蛹虫草大米培养残基中虫草素含量为2．011—2．185g／kg。不同水浴时间和温度条件的提取值为1．316～1．968g／kg。培养基残基中虫草素含量与子实体的比较系数为99．1％～110．9％。不同pH值提取液提取虫草素分别提高2．15％-15．89％。残基中虫草素优化的水溶剂提取工艺条件为：时间60min、温度60℃、pH值2．0;高浓度虫草素在水溶液中可能会发生降解。[结论]该研究为蛹虫草固体培养基的深加工和再利用以及开发新的虫草素资源提供理论依据和技术指导。     

蛹虫草浅层发酵产虫草素培养基优化

为了获得蛹虫草CY1909菌株的最佳培养条件,通过单因素试验和响应面试验设计,对该菌株进行液态发酵培养基优化。得到生产虫草素的最优培养基配方:酵母蛋白胨52.25 g/L、酵母粉8.43 g/L、硫酸亚铁0.06 g/L、腺嘌呤3 g/L+甘氨酸12 g/L。在此条件下进行验证,测得虫草素产量6.35 g/L,与预测的产量几乎一致。优化后配方为高产虫草素及其后期开发应用提供了坚实的基础。     

蛹虫草浅层发酵产虫草素培养基优化

为了获得蛹虫草CY1909菌株的最佳培养条件,通过单因素试验和响应面试验设计,对该菌株进行液态发酵培养基优化.得到生产虫草素的最优培养基配方:酵母蛋白胨52.25 g/L、酵母粉8.43 g/L、硫酸亚铁0.06 g/L、腺嘌呤3 g/L+甘氨酸12 g/L.在此条件下进行验证,测得虫草素产量6.35 g/L,与预测的产量几乎一致.优化后配方为高产虫草素及其后期开发应用提供了坚实的基础.     

蛹虫草浅层发酵产虫草素培养基优化

为了获得蛹虫草CY1909菌株的最佳培养条件,通过单因素试验和响应面试验设计,对该菌株进行液态发酵培养基优化.得到生产虫草素的最优培养基配方:酵母蛋白胨52.25 g/L、酵母粉8.43 g/L、硫酸亚铁0.06 g/L、腺嘌呤3 g/L+甘氨酸12 g/L.在此条件下进行验证,测得虫草素产量6.35 g/L,与预测的产量几乎一致.优化后配方为高产虫草素及其后期开发应用提供了坚实的基础.     

蛹虫草产胞外多糖发酵培养研究

[目的]对蛹虫草产胞外多糖发酵培养进行研究。[方法]通过响应面方法分析蔗糖、蛋白胨和KH2PO43个主要因素对蛹虫草产胞外多糖得率的影响,以获得比较适宜的培养基组成。另外,对发酵培养的条件进行了研究。[结果]蛹虫草胞外多糖优化发酵培养基组成为：蔗糖2.00%,蛋白胨1.50%,KH2PO40.05%,酵母粉0.20%,硫酸镁0.01% 发酵培养的适宜条件为：pH值6.8,温度28℃。在上述条件下蛹虫草胞外多糖得率为19.4 g/L。[结论]得到蛹虫草产胞外多糖的优化工艺条件,为上罐提供理论依据。     

蛹虫草废弃培养基二次应用于蛹虫草栽培的探索

以不添加废弃培养基的普通栽培的蛹虫草为对照,研究蛹虫草废弃培养基二次应用于蛹虫草栽培对于蛹虫草子实体鲜质量、虫草素及腺苷含量的影响。结果表明:与对照组相比,废弃培养基添加量为10%、20%、30%时,蛹虫草子实体鲜质量高于对照组,但无显著差异;废弃培养基添加量大于30%时,蛹虫草子实体鲜质量则低于对照组,差异显著;虫草素含量则随废弃培养基添加量的增加而逐渐提高,腺苷含量与对照组相比也有所升高,当废弃培养基添加量为100%时达到最高;虫草素含量比对照组提高2.10倍,腺苷含量比对照组提高1.75倍。     

蛹虫草大米培养基中活性多糖的提取及免疫调节功能研究

为探讨从蛹虫草大米培养基中提取其活性多糖的可行性、验证蛹虫草大米培养基活性多糖对小鼠免疫调节功能的调节作用。采用正交实验法优化蛹虫草大米培养基活性多糖提取工艺,用血凝法检测血清溶血素的水平,用M TT法测定了脾淋巴细胞的转化。结果表明,蛹虫草大米培养基活性多糖的最佳提取条件是乙醇浓度95%、提取4次、提取温度90℃,其提取率为0.74%;蛹虫草大米培养基活性多糖能显著提高小鼠的血清溶血素含量,促进小鼠的脾淋巴细胞转化能力。     

人工栽培蛹虫草虫草素含量HPLC检测方法研究

应用高效液相色谱法检测蛹虫草子实体及其固体培养基中的虫草素含量,优化了样品前处理条件,色谱柱为MP-C18 (4.6 mm ×150 mm,5 μm),流动相为V(甲醇):V(水)=15:85,流速1 ml/min,柱温25 ℃,样品回收率范围为95.1%～104.2%;同时对比使用3种不同的培养基(大米、小麦、蚕蛹粉)栽培的蛹虫草子实体中虫草素的含量,结果表明生长在大米培养基上的蛹虫草子实体中虫草素含量最高.     

固体培养条件对蛹虫草产子实体和虫草菌素的影响

研究了营养液不同pH值和米粒大小两个培养条件对蛹虫草固体发酵产子实体和虫草菌素的影响.当营养液pH值为5.5～6.0时子实体的产量最大,营养液pH值为6.5时,虫草菌素总的产量最大,达48.44 g/瓶.较大的米粒有利于蛹虫草子实体的生长,较小的米粒有利于蛹虫草虫草菌素的积累.子实体的产量随着米粒的变小而减少;子实体中虫草菌素的含量随着米粒的变小而增加.当采用整米作为培养基基质时,蛹虫草子实体产量最大,达1.67 g/瓶,当采用40目米 10目米(1∶1,M/M)作为培养基基质时,蛹虫草子实体中虫草菌素含量最大,达1.87%,虫草菌素总的产量也最大,达52.46 mg/瓶.     

用响应面法优化人工蛹虫草子实体中虫草素的超声提取工艺

为优化人工蛹虫草子实体中虫草素的超声提取工艺,在单因素试验基础上,利用响应曲面法考察提取温度、超声提取时间以及液料比对虫草素提取率的影响,并对提取工艺进行优化.结果表明:人工培养蛹虫草子实体中虫草素超声提取的优化工艺条件为超声温度50℃,超声提取时间47min,液料比30mL/g,提取次数3次.在此工艺条件下,虫草素提取率的理论值为1.057％.     

人工蛹虫草固体培养基虫草素的分离纯化研究

以人工蛹虫草固体培养基为原料,首先热水浸提虫草素,然后设计单因素试验和正交试验,通过离子交换层析进行分离。结果表明:洗脱流速、料水比为主要影响因子。最优条件为:料水比1∶16,洗脱流速为30滴/min,离子柱pH 3.5,此时虫草素的得率为0.014 2%。     

北冬虫夏草深层发酵高产虫草素工艺的优化

对23个北冬虫夏草菌株发酵液中虫草素的含量进行了测定,发现发酵液中虫草素含量最高的菌株为21号;对该菌株的发酵条件进行优化,获得最适培养基配方为:蔗糖40 g/L.蛋白胨15 g/L,MgSO4·7H2O0.5 g/L,KH2PO4 0.5 g/L,K2HPO4·3H2O 0.5g/L,pH自然;在此培养基中添加0.5 g/L腺嘌呤进行培养,可使发酵液中虫草素含量提高约30%,同时腺嘌呤的添加可以加快虫草素的合成.培养方式的考察结果表明:纯静置培养有利于虫草素的产生和积累,静置培养28 d,所得发酵液中虫草素含量达2.05 g/L,比优化前提高了2倍.     

链霉菌JD211发酵条件优化

以戊二酰亚胺类抗生素菌株链霉菌(Streptomyces)JD211为研究对象,研究其发酵培养基和发酵条件,得出最佳培养基组成是甘油30 g/L、酵母膏10 g/L、硫酸铵5 g/L、Na Cl 5 g/L、Ca CO33.5 g/L。优化后的发酵条件为装液量50 m L/250 m L,初始p H 7.0,接种量7.5%,培养温度30℃,培养时间为144 h。培养基优化后菌丝体干重较优化前提高了166.61%,抑菌圈提高了30.77%。     

氮源对蛹虫草产量及药效物质产量影响的研究

为研究氮源对蛹虫草产量及药效物质产量的影响,本试验测定了添加不同量氮源时蛹虫草的产量情况,同时测定了蛹虫草中腺苷、虫草素、虫草多糖和虫草酸的含量。结果表明,PDA培养基添加10%的蚕蛹粉时蛹虫草的产量以及腺苷、虫草素和虫草酸的产量最高,PDA培养基添加15%的蚕蛹粉时蛹虫草的虫草多糖产量最高,综合考虑蛹虫草的药效价值最高,选用PDA培养基添加10%的蚕蛹粉为蛹虫草的最佳培养条件。