Aroclor 1254对小鼠胚胎植入的影响

探讨了Aroclor 1254对小鼠胚胎植入的影响。将用无水乙醇溶解的Aroclor 1254母液分别按比例添加到CZB胚胎培养液中,组成0.25、1.25、6.25μg/mL 3个浓度的Aroclor 1254毒性试验溶液,溶剂对照组试验溶液为含无水乙醇(无水乙醇与毒性试验组浓度相同)的CZB胚胎培养液,空白对照组为CZB胚胎培养液。在小鼠配种后第4天上午(dpc 4.5),手术法分别暴露双侧子宫角,分别注入上述试验溶液5μL于子宫角内。于小鼠配种后第8天上午(dpc 8.5),尾静脉注射5 g/L台盼蓝溶液,检测试验小鼠胚胎植入位点。结果表明,溶剂对照组与空白对照组的平均植入位点没有统计学差异;质量浓度为0.25μg/mL和1.25μg/mL Aroclor 1254组的平均植入位点(6.27±1.41和5.83±1.09)与溶剂对照组(6.26±1.63)差异不显著;质量浓度为6.25μg/mL Aroclor 1254组的平均植入位点数(5.07±1.64)极显著低于溶剂对照组(6.26±1.63)(P<0.01),显著低于1.25μg/mL Aroclor 1254组(5.83±1.09)(P<0....     

Aroclor 1254致孕鼠子宫内膜细胞损伤模型的建立

为建立Aroclor 1254致孕鼠子宫内膜细胞损伤模型,通过分离、培养怀孕大鼠的原代子宫内膜细胞,用不同浓度的Aroclor 1254处理子宫内膜细胞48 h,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞的活力,Western blot法检测细胞中CYP450的表达,并通过ELISA法检测细胞培养基中TNF-α、IL-6、雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)的含量,来确定Aroclor 1254是否对细胞造成损伤。结果表明,随着Aroclor 1254浓度的升高,子宫内膜细胞的损伤及抑制率也随之增高,CYP450的表达随Aroclor 1254浓度的升高而升高。TNF-α和IL-6的水平比对照组显著升高(P0.05),E2和P4的水平则比对照组显著降低(P0.05)。这表明Aroclor 1254对体外培养子宫内膜细胞损伤程度呈浓度依赖性,10 mg/L的质量浓度作用48 h可建立可靠的子宫内膜细胞损伤模型。     

槲皮素对Aroclor 1254致孕鼠子宫内膜细胞损伤的保护作用

为了研究槲皮素对Aroclor 1254损伤的孕鼠子宫内膜细胞是否具有保护作用,试验通过分离、培养怀孕大鼠的子宫内膜细胞,以Aroclor 1254诱导子宫内膜细胞损伤模型,用不同剂量的槲皮素分别处理损伤的子宫内膜细胞24~72h,MTT法测细胞的活力,RT-PCR及Western blot法检测细胞中CYP450的表达,并通过ELISA法检测细胞培养基中TNF-α、IL-6、雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)的含量,来确定槲皮素是否对损伤的细胞具有保护作用。结果显示,处理24h后,随着槲皮素浓度的升高,子宫内膜细胞的成活率也随之增高,其中50μmol/L槲皮素时成活率最高。CYP1A1、CYP2B1和CYP2E1在子宫内膜细胞mRNA中的表达随槲皮素浓度的升高呈上升的趋势。CYP1A1和CYP2E1在细胞的蛋白中不表达,CYP2B1的表达随槲皮素浓度的增加而呈升高的趋势。50μmol/L槲皮素作用24h对损伤的怀孕大鼠子宫内膜细胞CYP1A1、CYP2B1和CYP2E1的表达效果最明显。Aroclor 1254损伤的子宫内膜细胞中TNF-α和IL-6的含量比对照组显著升高(P0.05),E2和P4的含量则比对照组显著降低(P0.05)。50μmol/L槲皮素处理后TNF-α和IL-6的含量比Aroclor 1254损伤组显著降低(P0.05),E2和P4则显著升高(P0.05)。这表明槲皮素对损伤的怀孕大鼠子宫内膜细胞具有保护作用。     

槲皮素对Aroclor1254诱导的孕鼠肝细胞CYP450表达的影响

采用胶原酶二步灌流法获取怀孕大鼠的原代肝细胞,以Aroclor1254诱导肝细胞损伤,用不同剂量的槲皮素分别处理损伤的肝细胞24⁷2h,RT-PCR及Western-blot法检测肝细胞中细胞色素酶P450(CYP450)的表达。结果显示,槲皮素处理损伤的肝细胞后,肝细胞CYP1A1、CYP2B1及CYP2E1的表达随槲皮素浓度的增加和处理时间的延长而呈先升高后降低的趋势。10mg/L Aroclor1254是诱导体外培养的原代肝细胞损伤的最适质量浓度,10μmol/L槲皮素是对损伤的怀孕大鼠肝细胞的最佳保护浓度。结果表明,槲皮素对损伤的怀孕大鼠肝细胞具有保护作用。     

槲皮素对Aroclor1254诱导的孕鼠肝细胞CYP450表达的影响

采用胶原酶二步灌流法获取怀孕大鼠的原代肝细胞,以Aroclor1254诱导肝细胞损伤,用不同剂量的槲皮素分别处理损伤的肝细胞24～72h,RT—PCR及Western—blot法检测肝细胞中细胞色素酶P450（CYP450）的表达。结果显示,槲皮素处理损伤的肝细胞后,肝细胞CYPIAl、CYP281及CYP2E1的表达随槲皮素浓度的增加和处理时间的延长而呈先升高后降低的趋势。10mg／LAroclor1254是诱导体外培养的原代肝细胞损伤的最适质量浓度,10μmol／L槲皮素是对损伤的怀孕大鼠肝细胞的最佳保护浓度。结果表明,槲皮素对损伤的怀孕大鼠肝细胞具有保护作用。     

多氯联苯(Aroclor 1254)对小鼠生殖系统毒理的组织病理学研究

以小鼠为试验动物,采用腹腔注射染毒法研究二噁英类环境激素多氯联苯(Aroclor 1254)对小鼠的生殖毒性,并用组织病理学方法研究毒性机理.组织病理学变化的程度及表现的种类存在剂量-效应变化规律,并存在个体发育时期与效应的变化规律,较高剂量时变化比较明显.     

多氯联苯(Aroclor 1254)对小鼠生殖毒理的组织病理学研究

以小鼠为实验动物模型,采用腹腔注射染毒法研究二嗯英类环境激素多氯联苯(Aroelor 1254)对小鼠的生殖毒性,并用组织病理学方法研究毒性机理.内脏的组织病理学现察结果表明,不同发育阶段接触多氯联苯的小鼠,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏均出现有组织病理学变化.心脏主要表现心肌纤维颗粒变性,间质毛细血管扩张、充血.肝脏主要表现肝细胞胞浆及胞核的病理变化,中央静脉、小叶间静脉扩张、充血.脾脏主要表现红髓轻度充血,轻度含铁血黄素沉着,巨核细胞及淋巴细胞增多,出现炎性细胞;脾小体数量增加,脾小体周围淋巴细胞增生、部分细胞核染色质减少,甚至成空泡状.肺脏主要表现胞壁毛细血管扩张,局部充血、出血;动脉扩张充血;肺泡隔增厚.肾小管尤其是近曲小管上皮细胞肿胀,上皮细胞颗粒变性,有的胞浆崩解使管腔狭窄,甚至堵塞:部分肾小球肿胀、充血,胞核染色质淡染,有的成空泡样:肾小囊狭窄;间质毛细血管扩张、充血、甚至出血:远曲小管胞浆溶解,残存一些散在的细胞核,个别细胞核染色质减少,甚至成为空泡状.组织病理学变化的程度及表现的种类存在剂量.效应变化规律;并存在个体发育时期与效应的变化规律.     

玉米赤霉烯酮对鸡胚成纤维细胞的毒性作用

旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的毒性作用机制,采用MTT法检测细胞活力变化,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA法检测Caspase-3含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,荧光显微镜观察细胞活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测内质网应激(ERs)和细胞凋亡相关基因的mRNA转录水平。结果显示,12.5~50.0 μg·mL^-1 ZEA显著抑制DF-1细胞增殖(P<0.01),且呈时间和剂量依赖性关系。25.0 μg·mL^-1 ZEA处理细胞24 h后,上清液中LDH和Caspase-3含量显著升高(P<0.01);细胞中ROS水平和细胞凋亡数量极显著升高(P<0.01);线粒体膜电位极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Caspase-3、Bax mRNA转录水平极显著上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);ERs相关基因GRP78、ATF6、ATF4、CHOP、PERK mRNA转录水平极显著上调(P<0.01)。综上表明,ZEA能通过内质网应激途径导致细胞凋亡并对鸡胚成纤维细胞发挥毒性作用。研究结果为深入研究ZEA对鸡细胞的毒性作用和解毒手段奠定基础,对相关禽类疾病治疗具有意义。     

猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞培养方法的研究

为了研究猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞的分离培养体系,根据取样组织的不同,筛选出最佳的培养方法,试验以猪胎儿和耳皮肤为试验材料,用4种不同的培养分离方法,即胰酶热消化法、胰酶冷热结合消化法、胰酶室温消化法和组织块培养法,分离培养猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞,对比培养效果,筛选出最佳的培养方法。结果表明:胰酶室温消化法分离的猪胎儿成纤维细胞存活率显著高于胰酶热消化法和胰酶冷热结合消化法(P<0.05),细胞贴壁效果好,且操作简单;猪耳皮肤成纤维细胞原代培养中,胰酶热消化法和胰酶室温消化法分离的细胞数量少,组织块培养法所需的组织量少,且较胰酶冷热结合消化法操作简单。试验中培养的细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈"S"型,经冻存复苏后生长状态良好,说明胰酶室温消化法是猪胎儿成纤维细胞较好的培养方法,胰酶热消化法和胰酶室温消化法是猪耳皮肤成纤维细胞原代培养的理想培养方法。     

12种藏药对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

为筛选抗新城疫病毒藏药复方的组分药,将安全质量浓度范围内的藏菖蒲、红景天、灵芝菌柄、灵芝菌盖、决明子、天冬、龙胆、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味松石丸、二十五味珍珠丸的煎液和鸡新城疫病毒(NDV)分别以3种方式(先加藏药后接种病毒、先接种病毒后加藏药、藏药和病毒感作后同时加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)的培养体系中.用MTT法测定各藏药对NDV感染CEF能力的影响.结果表明:多数藏药均能显著抑制NDV感染细胞,且与加药方式和药物质量浓度有一定关系.藏菖蒲、灵芝菌盖和降香在3种加药方式中均呈现显著效果,可作为抗NDV藏药复方的组分药.     

野牦牛成纤维细胞的分离培养与传代

为了提高野牦牛成纤维细胞分离培养效果,研究了组织保存方法、原代培养方法、培养液类型、添加细胞生长因子和冷冻保存液配方对野牦牛体细胞分离培养与传代的作用。结果表明,PBS、D/F12和TCM199适合野牦牛皮肤组织的保存,D/F12和TCM199培养液适合组织块培养,组织块成活率达到（86.29±4.62）%,组织块法适合野牦牛成纤维细胞的原代培养;D/F12培养液培养野牦牛成纤维细胞效果较好,群体倍增时间和平台期密度分别为38.47 h和2.075×10⁶/mL,正常二倍体核型百分率为84.33%;表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）产生了较明显的促增殖作用,平台期细胞密度明显增加;2种冷冻保存液（D/F12添加胎牛血清和二甲亚砜及胎牛血清添加二甲亚砜）均能用于野牦牛细胞冷冻,细胞存活率分别是87.33%和89.00%。     

成纤维细胞生长因子对动物的营养研究

成纤维细胞生长因子是广泛存在于机体组织细胞的一类生长因子。它对动物具有十分重要的营养作用。它可以促进动物生长、刺激骨骼肌细胞增殖、抑制胫软骨发育不良等作用，现已知ＦＧＦ家族至少有１８名成员。该家庭存在２类受体：高亲和力受体具有酷氨酸蛋白激酶活性；抵亲和力受体为肝素样受体，它们对机体内激素的分泌以及多种细胞的生长和分化有一定的影响。     

碱性成纤维细胞生长因子及其对生殖的影响

碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）是成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）家族中的主要成员，广泛分布于动物机体中，影响细胞的生长，分化和功能，本文在系统介绍ｂＦＧＦ的生化特性，来源，分布以及一般生物学效应的基础上，着重介绍了ｂＦＧＦ对生殖调控方面的研究进展。     

种公牛耳组织成纤维细胞的分离与培养

哺乳动物细胞培养始于20世纪50年代,发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法.近年来,体细胞克隆技术得到迅速发展,不同细胞类型供体的克隆动物相继产生.     

小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的研究

研究主要探讨在制备小鼠胎儿成纤雏饲养层中，不同处理条件对小鼠胎儿成纤雏细胞分裂与存活的影响。结果表明：小鼠胎儿成纤雏细胞用适当处理浓度的丝裂霉素-C或适当强度的γ-射线处理一定的时间(10μg／mL 1-4h,20μg／mL 1—2．5h或21Gy和28Gy各处理1h)，能有效地抑制其分裂，且不影响其活力。     

影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的因素

本研究从丝裂霉素 - C处理时间、消化时间及细胞浓度等方面比较了诸因素对小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的影响。结果表明 ,1 0 μg/m L 丝裂霉素 - C处理以 1 .5～ 2 h为宜 ,0 .2 %胰酶 + 0 .0 4% EDTA消化时间以 2～ 3min( 37℃ )为宜 ,接种浓度以 3～ 3.5×1 0 5m L- 1为宜。在成纤维细胞的分离过程中 ,接种后 30 min换液 ,能达到纯化成纤维细胞的效果。     

两种制备鸡胚成纤维细胞的方法比较

在伪狂犬病活疫苗和法氏囊病毒GT株生产上均需制备鸡胚成纤维细胞.在制备鸡胚成纤维细胞过程中,对用连续消化法与玻璃珠分散法两种方法进行比较,结果表明:用玻璃珠分散法制备细胞,易使死亡细胞数大幅增加,在生产中加大成本,并在旋转培养中,影响活细胞的贴壁及生长;而采用胰酶连续消化法制备的细胞,贴壁较好、成活率高,但比前者工作量大;结合两者优点,找出了制备鸡胚成纤维细胞最佳的方法.     

二甲基砷酸对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的毒性作用以及诱导细胞凋亡的机制

旨在用类金属毒性物质——砷对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的染毒试验,探索砷对绒山羊皮肤成纤维细胞毒性作用和其诱导细胞凋亡的机制,为后续研究砷对绒山羊皮肤细胞生长的影响提供理论依据.本研究随机选取1只7月龄各项机能正常,体重为25 kg左右的雄性辽宁新品系绒山羊,取其腹部皮肤,进行细胞培养.将二甲基砷酸药物配制成11个不同浓...     

TSA对滩羊成纤维细胞作为供体细胞的作用

为探索成纤维细胞作为供体细胞的潜能和TrichostatinA(TSA)处理供体细胞的适合浓度,提高克隆胚胎的发育水平。本研究分别利用100、50、25、10ng·mL-1TSA处理滩羊成纤维细胞,观察细胞形态,统计细胞活率,利用流式分选技术分析处理前后细胞的周期时相,同时通过间接免疫荧光法检测细胞乙酰化水平,并以经过10～50ng·mL-1TSA处理的成纤维细胞作为供体细胞,检测其重构胚发育水平。结果发现,当TSA的浓度达100ng·mL-1时,细胞大量死亡,不同浓度TSA处理细胞24h后,细胞周期被明显抑制在G0/G1期,乙酰化水平明显高于对照组,其中供体细胞经10ng·mL-1TSA处理的克隆胚胎卵裂率和囊胚率明显升高(P0.05,(85.2±3.4)%vs(68.6±6.7)%,(35.6±5.7)%vs(10.4±8.3)%)。结果表明,经10ng·mL-1TSA处理的滩羊成纤维细胞周期同步化明显,乙酰化维持较高水平,重构胚胎发育水平明显提高,适合作为成纤维细胞的处理方法和浓度。