影响辽宁绒山羊母羔胚胎体外生产因素的研究

比较了PMSG+FSH、FSH+PMSG超排方法对超排效果与胚胎发育的影响,EGF对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响,以及TALP、SOF受精体系对胚胎发育的影响。结果表明:PMSG+FSH法超排后的卵裂率、囊胚率极显著高于FSH+PMSG法(P<0.01),但超排卵母细胞数差异不显著(P>0.05);成熟液添加20 ng/mL EGF组极体率、囊胚率显著高于对照组(P<0.05),卵裂率差异不显著(P>0.05);SOF受精体系卵裂率显著高于TALP(P<0.05),囊胚率极显著高于TALP(P<0.01)。     

表皮生长因子对水牛卵母细胞体外培养核质成熟的影响

为了探讨表皮生长因子（EGF）对水牛卵泡卵母细胞体外培养核质成熟的影响，在以TCM199为基础的成熟液中加入不同浓度的EGF（0、10、25、50、100 ng/ml），体外成熟培养24~26 h，观察第一极体（PB1）的排放；随后进行孤雌激活检测其分裂率、囊胚发育率、囊胚孵化率，并用Hoechst33342染色后计算囊胚的细胞数。结果发现添加EGF各组的卵母细胞第一极体排放率显著提高（P<0.05）；成熟液中添加25 ng/ml EGF时，卵裂率及囊胚发育率（分别为80.0%、44.8%）明显高于对照组（分别为69.3%、31.9%，P<0.05），但对囊胚的细胞数影响不大。EGF不仅促进水牛卵母细胞体外培养的核成熟，而且有利于卵母细胞的胞质成熟，其中EGF的最佳浓度为25 ng/ml。     

辽宁绒山羊母羔活体采卵及体外受精研究

本文以辽宁绒山羊母羔为研究对象,比较了COCs皮质采集与皮质髓质采集获得COCs数及可用COCs数,研究了重复超排对获得COCs数及可用COCs数的影响,比较了TALP与SOF受精体系卵裂率,以期建立胚胎体外生产技术体系。结果表明,卵巢皮质髓质采集的COCs数、可用卵母细胞数均显著高于采集卵巢皮质获得的COCs（P〈0．05）;重复超排获得的COCs量、可用COCs数量均极显著低于首次超排母羔（P〈0．01）;SOF受精体系卵裂率显著高于TALP（P〈0．05）。     

不同培养液对牛卵母细胞成熟及核移植效率的影响

在牛卵母细胞成熟液中分别添加促卵泡素(FSH)10μg/L、胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)10μL/mL、表皮生长因子(EGF)10μg/L,配成3种不同体外成熟液对牛卵母细胞进行成熟培养,结果FSH组卵母细胞成熟率84.2%显著高于ITS组75.9%和EGF组70.2%。卵母细胞成熟后构建牛体细胞核移植胚胎,结果FSH、ITS组卵裂率分别为87.2%、81.9%,显著高于EGF组(73.6%),但三组间囊胚率差异不显著(P0.05)。     

卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响

为探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)的添加浓度及脱卵丘细胞时间对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响.试验通过在体外成熟液中添加不同浓度(0、10、15、20、30、40 ng/mL)的EGF来研究其对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响;在培养开始后的不同时间(18、24、38、44 h)进行脱卵丘细胞处理来研究不同时间脱卵丘处理对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响.结果表明,成熟培养基中添加10 ng/mL EGF能显著提高卵母细胞的卵裂率和囊胚率(P <0.05).共培组和独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞成熟率均低于44 h,但差异不显著(P >0.05);共培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率和囊胚率显著高于培养44 h(P <0.05);独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率与44 h无显著差异(P >0.05),但囊胚率显著高于培养44 h后脱卵丘细胞(P <0.05).添加10 ng/mL EGF对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育较好;卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞可提高孤雌胚胎早期发育能力.     

体内、外卵母细胞对猪体细胞克隆胚胎发育潜力的影响

为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响,试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞,分别构建核移植重组胚,比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示,PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05）,体内收集到的卵母细胞,可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上,与其他处理组差异不显著（P>0.05）,说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞,而且卵母细胞的质量没有显著差异;以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎,二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05）,但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）;将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪,头平均移植30或60枚时,体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头,而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕,表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好,能显著提高克隆胚胎的囊胚率,减少胚胎移植数量,提高代孕母猪的怀孕率。     

超排兔卵巢卵母细胞直接用于体细胞核移植的研究

为了评估兔超排后卵巢残留卵泡内卵母细胞用作体细胞核移植的潜力,应用PMSG或FSH诱导母兔超排,排卵结束(hCG注射14h)后,抽吸卵巢表面卵泡回收卵母细胞(抽吸组/处理组)用于体细胞核移植(SCNT),同时与自然排卵到输卵管内的卵母细胞(排出组/对照组)进行比较。结果表明,PMSG和FSH超排获得的抽吸组成熟卵母细胞(以可见第一极体为准)的比率分别极显著和显著低于各自的排出组(PMSG:70.7%vs94.6%,P0.01;FSH:81.5%vs94.6%,P0.05),且PMSG和FSH抽吸组间卵母细胞的成熟率差异显著(70.7%vs 81.5%,P0.05)。PMSG和hCG超排的抽吸组成熟卵母细胞的去核效率也显著低于各自的排出组(PMSG:抽吸vs排出=69.2%vs83.6%,P0.05;FSH:抽吸vs排出=71.6%vs81.0%,P0.05)。抽吸组成熟的卵母细胞注核效率以及此类卵母细胞用作胞质受体经体细胞移植后的重构胚在融合率、分裂率以及分裂胚胎发育至囊胚的比例与排出组差异均不显著(P0.05)。另外,抽吸组卵母细胞孤雌激活后胚胎的发育能力以及囊胚细胞总数与排出组差异也不显著(P0.05)。但是,PMSG超排后的抽吸组成熟卵母细胞体细胞核移植的总体效率显著低于相应的排出组(8.4%vs11.5%,P0.05),而FSH超排的卵母细胞抽吸组与排出组差异则不显著(10.2%vs11.6%,P0.05)。结果显示,抽吸自超排兔卵巢表面卵泡内的卵母细胞大多数都已经成熟,虽然去核效果要差些,但获得的重构胚与源自排出到输卵管内的卵母细胞的重构胚具有等同的发育能力,可以不经体外成熟培养而直接用于体细胞核移植,而且FSH超排获得的抽吸组卵母细胞体细胞核移植的总体效率与自然排卵到输卵管内的卵母细胞没有显著差别。     

卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟发育及GPX3、GPX4基因表达的影响

为了深入探讨卵丘细胞对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的影响机制,试验设置裸卵(卵母细胞)组、共培养(卵丘细胞和裸卵母细胞)组和卵丘-卵母细胞复合体(COCs)组,将3组的猪卵母细胞体外成熟培养后,检测3组猪卵母细胞的存活率、第一极体排出率、卵裂率、囊胚率等指标,及每组卵母细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,并利用RT-qPCR技术测定了每组卵母细胞内与谷胱甘肽合成代谢相关的关键基因GPX3、GPX4的表达水平,最终从生化和分子水平揭示卵丘细胞影响猪卵母细胞成熟和胚胎发育的机制。结果表明:COCs组的存活率、第一极体排出率、卵裂率及囊胚率均显著高于裸卵组(P0.05);共培养组第一极体排出率、卵裂率和囊胚率显著低于COCs组(P0.05),但卵裂率、囊胚率显著高于裸卵组(P0.05),存活率和第一极体排出率与裸卵组差异不显著(P0.05);共培养组卵母细胞谷胱甘肽含量显著低于COCs组(P0.05),但GPX3、GPX4基因的表达量与COCs组差异不显著(P0.05);裸卵组谷胱甘肽含量和GPX3、GPX4基因表达量均显著低于COCs组(P0.05)。说明在猪卵母细胞成熟过程中,卵丘细胞不仅影响卵母细胞内谷胱甘肽的含量,而且对谷胱甘肽合成代谢相关基因GPX3、GPX4的表达也有显著影响,进而影响卵母细胞成熟质量和胚胎发育效果。     

绵羊体外受精技术条件的比较研究

为了解绵羊体外受精技术条件,比较研究了卵泡液、受精时间和季节对绵羊卵母细胞体外培养效果的影响。结果表明:在卵母细胞成熟培养液中添加绵羊卵泡液(SFF)组的卵裂率和囊胚率均优于添加同等浓度的牛卵泡液(BFF)组;受精22 h和18 h的囊胚率差异显著(P0.05),受精22 h和14 h的卵裂率差异极显著(P0.01)。秋季绵羊体外受精的卵裂率和囊胚率均高于夏季,差异显著(P0.05),但秋季与春季相比差异不显著(P0.05)。因此,进行绵羊卵母细胞体外成熟培养时,培养液中添加SFF受精时,精卵共培养22 h的效果较好。在绵羊的繁殖季节(秋季)进行体外受精较春季和夏季的结果好。     

影响绵羊体外受精技术因素的研究

作者对影响卵母细胞体外成熟和体外受精的因素进行研究。结果表明,激素FSH和LH明显促进卵母细胞的体外成熟,且10、20和40μg/m l组成熟率高于5μg/m l组,差异显著;运输温度在28~32℃的成熟率高于22~24℃和35~37℃,差异显著;用BO受精体系卵子卵裂率高于TALP受精体系,差异显著;用绵羊冻精进行体外受精,受精前除去大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞卵裂率高于保留大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞。