"小粒黄"大豆子叶节丛生芽的诱导

为建立大豆子叶节高频再生体系,以"小粒黄"大豆子叶节为外植体,研究了萌发天数、6-BA及TDZ浓度对大豆子叶节丛生芽诱导的影响.结果表明: 随着萌发天数的增加丛生芽诱导率下降,萌发7 d的子叶节外植体对丛生芽诱导率最高,达到82.6%.附加不同浓度6-BA 和 TDZ的1/2MSB5的基本培养基上均能诱导出丛生芽,但丛生芽诱导率也不同,以1.5 mg·L-16-BA 和 0.2 mg·L-1 TDZ配比时,丛生芽诱导率最高,达到85.7%.     

大豆子叶节、胚尖再生植株的研究

为了获得高效的大豆再生体系,以大豆品种合丰35和北京小黑豆的成熟种子为材料,利用氯气和升汞两种消毒方法,研究不同浓度6-BA和2,4-D对子叶节和茎出芽的影响.结果表明:在大豆萌发时,加入1.0 mg L-1 6-BA和2.0 mg L-2,4-D,每个外植体分化的芽数较高;在茎尖再生系统中,6-BA和2,4-D诱导茎尖不定芽形成的最佳浓度是3.0 mg L-1和3.5 mg L-1,最佳诱导时间是24-48 h.     

灵发素（LFS）在甘蔗组培中的应用

探讨LFS在甘蔗组培快繁中的作用与使用前景。以新台糖22号茎尖或其组培继代苗为试验材料,以MS为基本培养基,分别添加不同浓度的LFS,并以6-BA为诱导丛生芽及增殖对照,NAA为诱导生根对照,然后按常规方法进行诱导茎尖分化丛生芽及其增殖和生根等培养。结果显示:①LFS比6-BA显著减轻茎尖褐化,提高茎尖成活率,促进其分化丛生芽和增殖,并提高苗的质量。诱导茎尖分化丛生芽培养基中LFS的适宜浓度为2.5～3.0 mg/L;继代增殖的适宜浓度为3.0～5.0 mg/L,培养3代后,增殖倍数8.76倍,略高于CK的8.53倍,且苗长势旺,黄叶少;②LFS可诱导不定根的发生,适宜浓度在2.0～4.0 mg/L,发根率≥90%。表明LFS在甘蔗组培效果优于传统使用的6-BA,具有良好的应用前景。     

蝴蝶兰丛生芽途径的组织培养技术

对蝴蝶兰丛生芽途径的组织培养进行研究,结果表明,不经过愈伤组织直接诱导丛生芽的过程中,6-BA是影响蝴蝶兰丛生芽诱导的重要因素,6-BA浓度达3.0mg/L以上时丛生芽的诱导率就可达100%;在丛生芽增殖过程中,6-BA8.0mg/L处理效果最好,丛生芽增殖率可达304%;6-BA8.0mg/L+NAA0.5mg/L的处理更能促进蝴蝶兰丛生芽的增殖效果,丛生芽增殖率可达506%;生根培养基组合MS+NAA0.5mg/L+10%椰子汁的生根效果较好。     

高产大豆新品系哈交5337和哈交5489再生条件的优化

为了拓宽大豆受体材料基因型,提高转基因大豆的应用价值,对两个综合性状较好的新品系大豆哈交5337和哈交5489进行子叶节器官发生途径再生条件的优化研究.在芽诱导培养基中添加不同浓度6-BA和IBA,采用正交法进行分析,取含6-BA(G1)萌发培养基中的大豆子叶节与不含6-BA(C2)萌发培养基中的大豆子叶节做平行对照,结果表明哈交5337最适的萌发培养基与芽诱导培养基的组合为G1S7(萌发培养基中不添加6-BA,芽诱导培养基中添加1.7 mg·L-16-BA和0.1 mg·L-1IBA)和G2S4(萌发培养基中添加1.0 mg·L-1的6-BA,芽诱导培养基中添加1.1mg·L-16.BA和0.1 mg·L-1IBA);哈交5489最适的萌发培养基与芽诱导培养基的组合为G1s4(萌发培养基中不添加6-BA,芽诱导培养基中添加1.1 mg·L-16.BA和0.1 mg-L-1IBA)和C2S4(萌发培养基中添加1.0 mg·L-1的6-BA,芽诱导培养基中添加1.1 nag·L-16-BA和0.1 mg·L-1IBA);同时确定两个品系大豆在丛生芽分化阶段采用延迟筛选方法,草铵膦筛选浓度为3.5 mg·L-1.     

IBA和6-BA浓度配比对诱导大豆下胚轴不定芽的影响

以大豆黑农44下胚轴为外植体,研究不定芽诱导培养基中IBA和6-BA浓度及配比对不定芽诱导与伸长的影响。结果表明,以MS基本培养基+1.0 mg·L-16-BA为大豆无菌苗培养基,在诱导培养基中不添加6-BA时有利于下胚轴不定芽的诱导,添加0.1 mg·L-1IBA时,培养14 d不定芽诱导率可达96.69%,每个下胚轴形成2.31个芽(芽长≥0.5 cm);不定芽诱导培养基中添加高浓度6-BA和IBA组合不利于大豆下胚轴不定芽的诱导与伸长。     

6-BA和IBA浓度对不同基因型大豆胚尖诱导丛生芽的影响

以吉林17,吉林27,吉林28和吉林29共4种大豆基因型胚尖为外植体诱导丛生芽,研究了不同浓度的六苄基嘌呤(6-BA)和吲哚丁酸(IBA)对胚尖再生率的影响.结果表明:不同基因型大豆在不同激素浓度配比下再生率存在明显差异.吉林28和吉林29更适合大豆胚尖再生系统,其最佳激素配比均为2.0 mg·L-16-BA +0.2 mg·L-1IBA,再生率为分别达78.17％和80.04％.     

6-BA浓度及基因型对大豆胚尖诱导丛生芽的影响

以吉林35、吉林47等5个大豆品种为材料,胚尖为外植体,研究不同浓度6-BA对丛生芽诱芽率和平均芽数的影响,同时测定吉林35在胚尖诱导丛生芽的过程中对潮霉素的耐受性.结果表明:3.0 mg·L<,-1>6-BA浓度下吉林35的诱芽率最高,综合考虑丛生芽诱芽率和平均芽数2个性状,吉林35更加适合于大豆胚尖再生系统;在遗传...     

大豆子叶节植株再生体系的研究

以大豆品种"辽豆17"、"辽豆18"和"辽豆23"子叶节为外植体诱导不定芽的发生.结果表明:随着培养基中6-BA浓度的增加,每块外植体上不定芽的数量呈增加的趋势,当向1/2MSB培养基中添加0.05 mg·L-1IBA和4.0 mg·L-16.BA时,不定芽的诱导率最高.比较不同的外植体获得方法,保留半片子叶的外植体诱...     

基于葡萄柚叶片离体再生体系的研究

以10个葡萄柚品种种子萌发的无菌苗叶片为外植体,研究葡萄柚的离体再生体系。结果表明:在MS+1.0 mg/L 2,4-D+6%蔗糖培养基上,8个葡萄柚品种能诱导出愈伤组织,其中"星路比"品种诱导率最高为46.67%,将诱导的愈伤组织转移至相同培养基中可继代增殖;"帕利斯"、"星路比"、"泰国种"3个品种的叶愈伤组织接种于MS+3.0 mg/L 6-BA分化培养基上可分化出丛生芽,这些丛生芽在MS+0.2 mg/L 6-BA培养基上平均可增殖4~6个芽;丛生芽在1/2 MS+1.0 mg/L IBA生根培养基上可诱导出不定根。炼苗后,田间移栽成活率为78.18%。为后续葡萄柚良种选育及遗传转化体系的建立奠定基础。     

2,4-D、Dicamba和KT对小麦成熟胚离体培养的影响

为了建立优良小麦品种遗传转化的高效组织培养体系,以扬麦158和郑麦9023成熟胚为外植体,探讨了Dicamba和2,4-D及KT对小麦成熟胚愈伤组织诱导和再生的影响。结果表明,Dicamba和2,4-D的愈伤组织诱导率最低为88.7%,最高可达95.1%,处理间无显著差异。不同激素诱导的愈伤组织在添加KT的培养基上分化时,再生率存在显著差异。两种基因型小麦用Dicamba诱导的愈伤组织比2,4-D诱导的愈伤组织具有更高的再生率。在分化培养时,培养基中添加5mg·L-1 KT比添加3mg·L-1的分化效果更好,但不同浓度KT对愈伤组织分化的效果因诱导激素的配比和基因型而异。扬麦158的综合指标更优,平均再生率可达20.1%,比郑麦9023高6.6%;采用4mg·L-1 Dicamba进行愈伤组织诱导,配合5mg·L-1KT分化培养更有利于小麦成熟胚离体培养。     

TDZ在小麦花药培养中的作用

为了进一步提高小麦花药培养效率,以8个小麦杂交F1代为供试材料,通过在培养基中添加不同浓度的噻重氮苯基脲(thidiazuron,TDZ)探讨其对小麦花药培养的作用。结果表明,TDZ的作用与添加剂量及小麦基因型密切相关。在诱导培养基中添加TDZ对基因型中麦875/郑豫麦043具有负向调控作用,但对兰考198/黄明118、郑麦7698/西农979以及天禾7号/0836H-3则具有正向促进作用。TDZ的最佳添加剂量为0.05mg·L-1,可显著提高3个基因型的胚性愈伤组织诱导率和绿苗产率,其中兰考198/黄明118胚性愈伤组织诱导率和绿苗产率最高,分别达到25.1%和8.7%。同样,在分化培养基中添加一定剂量的TDZ,对4个基因型的愈伤组织分化均表现正向促进作用,TDZ的适宜浓度范围为0.5~1.0mg·L-1,以添加0.5mg·L-1的处理表现最优,能够显著提高绿苗分化率和绿苗/白苗比率;基因型兰考198/黄明118的绿苗分化率和绿苗/白苗比率最高,分别达50%和1.87。研究还表明,在诱导培养基或分化培养基中添加TDZ还能够促进绿苗增殖,提高单倍体自然加倍效率。本研究结果将有助于小麦花药培养技术的优化,进而提高花培育种效率。     

In vitro direct plant regeneration and Agrobacterium‐mediated transformation of lucerne (Medicago sativa L.)

In vitro direct plant regeneration of lucerne was achieved by simultaneous application of thidiazuron (TDZ) and 6‐benzyladenine (BA) in Murashige and Skoog (MS) medium. Seedlings were germinated and grown for 6 d on growth regulator–containing MS medium. The shoot tip, consisting of the apical meristem along with parts of the cotyledonary leaves and hypocotyl, was then cultured on a medium containing the growth regulator(s). Adventitious budding of the shoot tip was promoted synergistically by treatment with TDZ and BA, and a maximum of thirty‐five shoots per explant was obtained on a medium supplemented with 2 mg L^?1 TDZ and 1 mg L^?1 BA. Plant regeneration frequency varied from 67 to 93%, and five Indian lucerne cultivars responded well to the regeneration protocol. The Agrobacterium‐mediated transformation frequency from co‐cultivated explants was 13% following multiple shoot induction. Southern analysis of the T₀ plants and T₁ progenies confirmed stable inheritance of the hpt marker gene. Agrobacterium infection of the explant caused a significant reduction in the plant regeneration frequency (23%) and the number of shoots induced (11) when compared with uninfected explants. A single shoot tip provided sufficient material to regenerate and establish twenty‐seven lucerne plants, whereas only nine plants could be regenerated from an Agrobacterium co‐cultivated explant. This transformation protocol could represent a valuable improvement over existing ones for lucerne.     

滁州白头翁组织培养及再生体系的建立

为建立白头翁再生体系,以白头翁主根的切段和试管苗叶片为外植体,比较2种外植体离体培养差异,探讨不同植物生长调节剂对不定芽和愈伤组织诱导、愈伤增殖和再分化及芽苗生根的影响。结果表明:叶片可以通过愈伤组织再分化和直接产生不定芽2种途径建立再生体系,而根只诱导出了愈伤组织,增殖培养中逐渐褐化死亡;在含6-BA培养基上,叶块死亡,而根只诱导出少量愈伤组织;叶片诱导不定芽的培养基为MS+TDZ 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L;愈伤组织增殖的培养基为MS+TDZ 0.2 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L;再分化时,需要转接到TDZ和NAA组合的培养基上,其中处理组合TDZ 0.3 mg/L+NAA0.1 mg/L的再分化率达100%;生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L。不同外植体离体培养存在差异,叶片较根易培养;TDZ对白头翁叶片培养效果较好,2,4-D对愈伤组织的诱导能力较强,而NAA适合于不定芽分化,NAA与IBA组合使用生根效果较好。     

小麦成熟胚组织培养体系优化及其影响因素的研究

为了优化小麦主要推广品种的成熟胚组织培养体系,并筛选优良的转基因受体基因型,以12种小麦品种的成熟胚为材料,对其成熟胚为外植体的愈伤组织进行了诱导分化和再生的研究,探讨了不同2,4-D浓度下3种诱导培养基(MS2、L32、N64)、以L3为基本培养基的3种分化培养基以及以MS为基本培养基的3种生根培养基对小麦成熟胚离体培养的影响。结果表明,各培养基对成熟胚愈伤的诱导率和分化率的影响差别不大,而主要影响愈伤质量和生根效果。3种诱导培养基的平均诱导率均超过85%,N64的最高(90.13%),L32培养基的愈伤质量最好,诱导效果最佳。不同激素配比均可诱导小麦成熟胚愈伤组织分化再生,但不同基因型间有较大差异,添加0.5mg.L-1 IAA和1mg.L-1 KT的分化培养基L2的平均分化率最高(55.68%);添加0.2 mg.L-1 IAA和0.5 mg.L-1 MET的生根培养基MX1的平均生根率最高(37.02%)。不同基因型的出愈率、胚芽率、分化率、生根率差异显著,筛选出鲁麦14、良星99、济麦21、山农20、良星66等5个小麦品种可作为优良的转基因成熟胚受体材料,并初步建立起适于它们的组织培养体系。     

小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化特性的影响因素

为建立稳定、高效的小麦幼胚愈伤组织继代分化体系,以4个小麦品种为材料,对影响普通小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化特性的因素进行了研究。结果表明,碳源、有机添加物、诱导和继代间隔时间及基因型对小麦幼胚愈伤组织的分化和继代分化特性有显著影响。1.5%蔗糖和1.5%麦芽糖配合使用,小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化效率显著高于3%蔗糖和3%麦芽糖单独使用的分化效率;4种有机添加物对小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化特性均有正向增加效应,其中,诱导培养基中分别添加500mg·L-1酸水解酪蛋白、250mg·L-1 L-谷氨酰胺和250mg·L-1 L-天门冬酰胺的正向效应显著,愈伤组织分化率分别比对照提高17.5%、15.2%和14.2%,继代3次后的愈伤组织分化率比对照显著提高了93.9%、73.6%和52.8%;诱导分化和继代诱导分化的时间是小麦幼胚愈伤组织分化和继代分化特性重要的影响因素之一,诱导15d和继代间隔15d的愈伤组织分化和继代分化率显著高于20d和25d,且随诱导和继代间隔时间的延长,愈伤组织分化率迅速下降;供试4种基因型材料的愈伤组织分化和继代分化特性有显著差异,供试品种千斤早和小偃22愈伤组织分化特性较好,扬麦12和扬麦18继代愈伤分化特性较好,愈伤组织分化和继代分化特性的表现无相关性。     

节节麦幼胚再生体系的建立

为建立高效的节节麦幼胚再生体系,以节节麦幼胚为外植体,通过正交设计,探索基本培养基、2,4-D、碳源、KT等因素对幼胚愈伤组织诱导、分化及植株再生效果的影响。结果表明,4种因素中,基本培养基对节节麦幼胚愈伤组织诱导的影响最显著(P0.05),2,4-D浓度对节节麦幼胚愈伤组织诱导也有显著影响(P0.05),添加3.0mg·L~(-1) 2,4-D的培养基诱导出的愈伤组织质量高,淡黄色,表面呈不规则颗粒状,质地致密,再生频率可以达到17.62%。KT浓度对节节麦愈伤分化影响最显著,基本培养基、2,4-D和碳源对节节麦幼胚愈伤分化均无显著影响。不同碳源对节节麦幼胚愈伤组织诱导和分化的影响均不显著,为节约成本可直接选用30g·L~(-1)蔗糖作为碳源。节节麦幼胚组织培养的最佳组合是:愈伤诱导培养基为MS培养基+3mg·L~(-1) 2,4-D+15g·L~(-1)蔗糖+15g·L~(-1)甘露醇,愈伤分化培养基为MS培养基+15g·L~(-1)蔗糖+15g·L~(~(-1))甘露醇+1.0mg·L~(-1) KT。     

二穗短柄草成熟胚再生体系建立及农杆菌介导转化研究

为建立二穗短柄草组织培养及遗传转化体系,以二穗短柄草BD21-3成熟胚为外植体,对成熟胚愈伤诱导、分化以及农杆菌侵染条件进行了研究。结果表明,在含有2.5mg·L~(-1) 2,4-D的培养基上,愈伤组织出愈率最高为93.83%;在含有0.2mg·L~(-1) KT的分化培养基上,分化率最高为38.18%;对二穗短柄草胚性愈伤组织农杆菌转化和GUS染色结果表明,侵染的过程中农杆菌菌液浓度OD_(600)为0.6、侵染时间为5min时转化率最高。     

TDZ和暗培养对蝴蝶兰叶片不定芽发生的影响

以蝴蝶兰幼嫩花梗诱导的无菌苗叶片为外植体,以MS为基本培养基,研究不同暗培养时间和TDZ浓度对蝴蝶兰叶片诱导不定芽的影响。结果表明：暗培养和TDZ对接种的蝴蝶兰叶片的成活率均具有显著影响,暗培养60 d时,叶片的存活率在90%以上,而在同一暗培养时间条件下,叶片的存活率随着TDZ浓度的增加而上升;在TDZ浓度为3.0 mg/L,暗培养60 d时,蝴蝶兰存活叶片不定芽的诱导率最高,达到93.45%;诱导的不定芽数最多,平均每个外植体诱导的不定芽数为13.22个。综合考虑外植体的成活率、不定芽诱导率和诱导的不定芽数,蝴蝶兰叶片诱导不定芽的最佳条件为：MS＋TDZ 3.0 mg/L,暗培养60 d。     

培养条件对甘蓝型黄籽油菜下胚轴的再生影响

以甘蓝型黄籽油菜GH01的下胚轴为材料，研究影响外植体芽再生的因素。试验结果表明，苗龄、预培养基的激素浓度和预培养时间、分化培养基等对芽再生频率均有较大影响。8d苗龄的下胚轴置MS 1．5mg／L2，4-D 0．1mg／L6-BA培养基预培养4d后，转分化培养基MS 4．0mg／L6-BA 0．05mg／LNAA 5．0mg／LAgNO3 0．6mg,／LGA3培养，可获得较高的芽再生频率。添加5mg／LAgNO3处理可防止外植体褐化并有利于芽分化；0．6mg／L GA3处理可促进胚状体形成，提高芽再生频率。GH01最高芽再生频率为40．50％。