锦鲤溃疡病病原菌的分离及16SrRNA鉴定

为寻找引起养殖锦鲤(Ornamental carp)病害的致病因子,从北京地区自然患病的锦鲤体内分离疑似致病菌,再将此菌人工感染健康锦鲤,确定致病菌。采用生理生化鉴定与16S rRNA基因序列的系统发育学分析相结合的方法确定该致病菌株的系统发育地位,同时采用琼脂扩散法测定该菌对抗菌类药物的敏感性。试验结果表明,从病鱼体内分离得到革兰氏阴性杆菌CL0901,人工感染健康锦鲤后,能够引起鱼生病甚至死亡,症状与自然发病症状一致。菌株CL0901与Aeromonas veronii ATCC 35624T的16S rRNA基因序列相似性达99.9%,构建系统发育树,并结合形态特征与生理生化测定结果,将该致病菌鉴定为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。在21种抗菌类药物对该菌的抑菌试验中,左氧氟沙星、诺氟沙星和洛美沙星等10种药物的抑菌效果较好。本研究为进一步防制锦鲤养殖病害提供依据。     

1株锦鲤致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定及生物学特性研究

从患病锦鲤体内分离得到1株细菌ML1,经人工感染后发现ML1具有较高的致病性,临床症状与自然发病症状一致,96 h的LD50为5.0×107cfu/m L。ML1菌株革兰染色呈阴性,杆状。16S rRNA基因序列分析结果显示,序列片段长度为1 419 bp,ML1菌株在系统发育树上与嗜水气单胞菌聚类,相似性达到100%。综合VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪的生理生化特征分析、形态学观察、人工感染以及16S rRNA基因序列分析,将ML1菌株鉴定为嗜水气单胞菌。ML1菌株的最适生长p H为7~9,最适生长温度为28℃。在28℃200 r/min条件下的生长周期是:0~4 h为生长延迟期,4~10 h为对数生长期,10~24 h为稳定期,24~48 h为衰亡期。药敏试验表明,ML1菌株对多黏霉素B、环丙沙星、诺氟沙星等高度敏感,对磺胺异恶唑中度敏感,对麦迪霉素、氨苄西林、林可霉素等不敏感。研究结果为指导临床合理用药提供了科学依据。     

禾花鲤细菌性败血症病原菌的分离鉴定及毒力基因检测

以常规方法对广西全州县患病禾花鲤进行病原菌的分离,人工感染试验确定病原菌的致病性,API全自动细菌鉴定仪和16S rRNA基因序列分析对病原菌进行生化鉴定和分子鉴定,K-B纸片扩散法进行病原菌的药敏试验,毒力基因检测为PCR扩增法。结果表明,从患病禾花鲤肝脏组织分离到2株优势菌株HHL130和HHL165,对健康禾花鲤的致死率均为100%,是禾花鲤细菌性败血症的病原菌;API生化鉴定和16S rRNA鉴定结果,HHL130和HHL165均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),与标准菌株Aeromonas hydrophila ATCC 7966的同源相似度为99.6%,亲缘关系最近;2株病原菌对头孢他啶、庆大霉素、强力霉素3种药物敏感,对磺胺新诺明、头孢拉啶、青霉素等9种药物耐药;2株病原菌的基因型分别为HHL130:hly~+Aer~+Alt~-Act~+ahal~+ahp~+;HHL165:hly~+Aer~+Alt~-Act~+ahal~+ahp~-。     

兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

应用16S rRNA基因测序法对兔支气管败血波氏杆菌标准株和分离的5株波氏杆菌进行了16S rRNA基因序列分析。结果表明,5株分离菌与标准株同源性在99.4%~100%之间。后经Blast分析各分离株与已发表的32株波氏杆菌同源性均在98%以上。进一步的生化试验鉴定表明标准株与分离菌株生化反应结果均符合兔支气管败血波氏杆菌生化反应特征。综合各种试验结果表明5株分离菌株均为兔支气管败血波氏杆菌。     

袋鼠摩根氏菌生物特性鉴定及系统发育分析

本研究利用Biolog快速鉴定系统、16S rRNA序列分析及传统细菌鉴定方法对3株分离自北京动物园袋鼠肺脏的菌株进行形态学、培养特性、生化特性、小鼠致病性等生物特性的鉴定及系统发育分析。结果表明,3株菌株均为摩根氏菌,对昆明小鼠有强致病性;3株袋鼠摩根氏菌16S rRNA序列与LMG7874模式株同源性均为99.8%,且位于系统发育树的同一分支。     

大鲵致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

从患皮肤溃烂的大鲵体内分离到一株细菌,经人工回归感染试验证实该菌株具有较强致病力;通过生理生化鉴定和16S rRNA序列分析,分离菌株为嗜水气单胞菌。该分离菌株对头孢噻吩、庆大霉素、氟哌酸、头孢三嗪高度敏感,对强力霉素、头孢唑啉、卡那霉素中度敏感。     

牛瘤胃乳酸片球菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了获得生物学特性良好的乳酸菌,试验利用厌养菌分离技术从成年牛瘤胃中分离出一株牛瘤胃乳酸菌,命名为Y-A-2,并对该菌进行了形态分析、生化试验、16S rRNA序列同源性分析和生物学特性研究。结果表明:Y-A-2菌株为乳酸片球菌,可发酵纤维二糖、水杨苷、菊糖;最适生长温度为26℃,最适生长温度下pH值随着时间的延长逐渐降低,具有一定的耐盐能力,不耐强酸强碱。说明该菌具有良好的生物学活性,有助于牛瘤胃微生态制剂的研制和控制牛瘤胃的微生物发酵进程。     

牛源马巴氏杆菌的分离鉴定

为了解引起牛肺炎的主要病原,试验从患有肺炎的牛支气管中分离获得一株巴氏杆菌,并对其进行生化鉴定、16S rRNA测序、特异性PCR鉴定及药敏试验。结果表明:分离菌株与马巴氏杆菌(Pasteurella caballi)的生化特性一致;16S rRNA序列与Pasteurella caballi参考菌株ATCC49197的同源性为100%;特异性PCR鉴定为Pasteurella caballi;分离菌株对诺氟沙星、头孢噻吩、四环素等多种抗生素敏感。说明分离菌株为Pasteurella caballi,该细菌同样可以感染牛。     

貉源肺炎克雷伯菌的分离鉴定与药敏试验

为了确定引起貉肺炎的病原菌,本试验从临床貉子死亡病例中分离到的1株病原菌,命名为HM-1,试验采用分离培养、纯培养、形态观察、生化鉴定、16S rRNA序列测序等方法进行了鉴定。结果表明,分离菌株HM-1呈杆状、革兰染色阴性;16S rRNA基因序列通过NCBI的Blast检索系统进行序列同源性分析,HM-1株与克雷伯菌F2R9以及01A030聚为一支,相似度为最高,达到99.8%,确定分离菌株HM-1为肺炎克雷伯菌。动物致病性试验表明分离株HM-1株具有较强的致病性。药敏试验说明分离菌株HM-1株对头孢噻肟高度敏感,对卡那霉素、新霉素、头孢曲松中度敏感,对青霉素、氟苯尼考、恩诺沙星等10种药物耐药。本试验为防治貉肺炎克雷伯菌引起的肺炎提供一定的参考依据。     

养殖型吉富罗非鱼暴发性死亡的病原菌分离鉴定及药敏测定

为查明广西全州县养殖吉富罗非鱼大批死亡的病原及其药物敏感性,为生产中有效防治该病提供参考。按常规方法从患病罗非鱼的腹水、肝脏和心脏中分离细菌,人工感染确定病原菌,以API 20NE生化鉴定和16S rRNA分子鉴定相结合的方法鉴定病原菌并确定其系统发育地位,K-B纸片扩散法检测病原菌的药物敏感性。试验结果,从患病吉富罗非鱼中分离到1株优势菌株GXQZ1,经API 20NE生化鉴定和16S rRNA分子鉴定为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides),与Plesiomonas shigelloides HRS12816L株的同源性最高(99.3%)。根据人工感染试验结果,认为该菌株是引起广西全州县养殖吉富罗非鱼大批死亡的病原菌。该菌对先锋Ⅴ、先锋Ⅵ、复方新诺明等12种药物高度和极度敏感,对苯唑青霉素等3种药物耐药。