野生毛桃叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

【目的】为了初步建立野生‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生技术体系,【方法】以野生‘毛桃1号’试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨了基本培养基、激素配比等一系列因素对‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导和保存的影响及TDZ浓度对愈伤组织不定芽再生的影响。【结果】结果表明,适合‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导的培养基为LP+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 3.0 mg.L-1+AgNO30.5 mg.L-1+蔗糖30.0 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1;保存的培养基为LP+2,4-D1.5 mg.L-1+CH 0.4 g.L-1+蔗糖30 g.L-1+CA 3.0 g.L-1或PVP 3.0 g.L-1+琼脂5.8 g.L-1,且采用持续暗培养保存,每28 d继代1次。愈伤组织在SH+TDZ 3.0 mg.L-1+NAA 0.3 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1的培养基上可再生不定芽,再生率为6.83%。【结论】初步建立了‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生体系,为桃愈伤组织再生和遗传转化的研究奠定了基础。     

欧李离体叶片再生体系的建立

【目的】以欧李试管苗叶片为外植体进行不定芽再生研究,以期为核果类果树的品种改良、基因遗传转化和功能验证等生物技术育种奠定一定的基础,【方法】使用不同的基本培养基和激素组合促进其不定芽再生并建立再生体系。【结果】结果表明,欧李幼芽增殖对基本培养基类型较敏感,改良MS培养基优于MS、F14和WPM。在MS(改良)+NAA 0.1 mg.L-1+BA 0.2 mg.L-1培养基上,增殖系数为5.6,增殖效果较好。离体叶片不定芽再生的最适植物生长调节剂组合为MS(改良)+TDZ 4.0 mg.L-1+IBA 0.2 mg.L-1,再生率达到63.1%,平均每外植体再生芽数为4.9。暗培养10 d可以提高不定芽再生率。再生不定芽1/2 MS(改良)+IBA3.0 mg.L-1培养基上生根率最高,生根率达93.3%。【结论】在改良MS培养基上TDZ与IBA组合诱导不定芽再生的效果最好。     

库尔勒香梨叶片不定芽再生诱导的研究

以库尔勒香梨幼叶为外植体,研究基本培养基种类、外源激素浓度、AgNO3浓度及接种叶片的放置方向对叶片不定芽再生的影响。结果表明:培养基的种类是影响叶片能否获得再生不定梢成功的关键,NN69培养基是香梨叶片再生不定芽的最佳培养基,诱导不定芽的分化以培养基NN69+TDZ 1.0mg/L+IBA 0.3mg/L为最佳;附加0.5mg/L AgNO3有利于叶片再生;以叶片远轴面接触培养基比近轴面接触培养基更利于不定芽的再生;结合21d暗培养香梨叶片再生频率最高可达到64.3%,再生芽数最高为2.59。     

苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养及其叶片不定梢诱导

【目的】建立苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养快繁技术体系及其离体叶片不定梢再生技术体系,为工厂化生产优质苗木及利用生物技术手段改良品种奠定技术基础。【方法】以苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的半木质化新梢为试材,建立初代无菌试管苗。以试管苗为试材,研究了基本培养基、植物生长调节物质对试管苗继代生长及生根的影响。以离体叶片为外植体,研究了细胞分裂素种类和浓度及碳源对不定梢再生的影响。【结果】半木质化新梢在芽启动培养基上的腋芽萌发率达85%以上。在基本培养基MS和QL上,试管苗的增殖没有显著差异,但生长表现不同,QL培养基上的增殖苗表现出该品种田间生长的红色特征。当细胞分裂素为BA时,蔗糖比D-山梨醇易诱导出叶片不定梢;当细胞分裂素为TDZ并且浓度较高时,D-山梨醇比蔗糖易诱导出叶片不定梢。以添加3 mg·L-1BA和30 g·L-1蔗糖处理获得的不定梢再生率最高,为71.6%。生根诱导,基本培养基1/2MS比1/4MS有效,生长素IBA比NAA有利于提高生根率。【结论】苹果砧木‘BP-176’试管苗适宜的继代增殖培养基为添加1.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1IBA的QL培养基;最佳不定梢再生培养基为:NM+3 mg·L-1BA+0.3 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L-1IBA+20 g·L-1蔗糖,最高生根率为69.8%。     

不同培养条件对‘丰香’草莓离体叶片再生的影响

 以草莓品种‘丰香’离体叶片为外植体, 探讨了基本培养基、不同细胞分裂素、暗培养、硝酸银浓度以及不同植物生长调节剂组合对不定芽再生的影响。结果表明, 基本培养基中以MS 最为适合,WPM、QL 、AS 培养基均不利于不定芽的再生, 而TDZ 的诱导效果好于BA。以MS 基本培养基附加TDZ2.0 mg·L - 1和IBA 0.8 mg·L ^-1可以使‘丰香’叶片不定芽的再生率高达72.33 % , 平均每叶再生芽5.59个。暗培养14 d 可以将‘丰香’叶片的不定芽再生率提高到90.09 %。硝酸银对于提高‘丰香’叶片的不定芽再生没有明显效果, 但在一定程度上改变了细胞分化的方向。     

草莓叶片再生体系的建立

以草莓‘红颜’和‘章姬’的叶片为外植体,研究暗培养时间、不同植物激素及浓度对不定芽诱导的影响,不同植物激素种类浓度及继代次数对不定芽增殖的影响,以及组培苗生根的最佳培养基。结果表明:草莓叶片不定芽诱导的最适宜培养基为MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D,暗培养天数15~20 d;不定芽增殖的最适宜培养基为2 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,‘红颜’组培苗适宜继代4代,‘章姬’组培苗适宜继代5次;MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA生根效果最好。     

‘黄水蜜’桃实生苗茎段再生体系的建立

【目的】建立‘黄水蜜’桃实生苗茎段高效稳定的再生体系。【方法】以‘黄水蜜’桃实生苗茎段为外植体,探讨了不同植物生长调节剂质量浓度组合对不定芽诱导过程中愈伤组织形成率和不定芽形成率的影响,并采用两步生根法研究不同植物生长调节剂种类对不定根诱导的影响。【结果】适合‘黄水蜜’桃实生苗茎段切口处愈伤组织再生的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1,不定芽再生的最佳培养基为MS+6-BA 3.0mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1,其愈伤组织形成率和不定芽再生率分别为85%和47%;获得的不定芽先后经WPM+ZT 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1和MS+NAA 0.5 mg·L-1+GA30.5 mg·L-1+Ag NO30.5mg·L-1两步生根法培养后,不定根再生率为50%,平均根数量为5.00。【结论】初步建立了‘黄水蜜’桃实生苗茎段再生体系,为桃遗传转化研究奠定基础。     

香玲核桃离体叶片再生体系的建立

为解决核桃种质资源的实验室保存及转基因研究等问题,研究了暗培养时间、叶片放置方式及不同浓度激素组合(BA、NAA、TDZ)对香玲核桃叶片再生的影响。试验结果表明,最适宜的暗培养时间为14d;近轴面放置效果最好;不同组合的激素配比对叶片再生不定芽能力不同,最适宜香玲核桃叶片再生的培养基为:MS+BA0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+TDZ1.0mg·L-1+sucrose30g·L-1+agar6g·L-1,在该培养基上,离体叶片不定芽再生率达60%,每叶片平均再生不定芽数超过1.1个。筛选得到了香玲核桃离体叶片的最适分化及生根培养基,对离体再生培养条件进行优化,为香玲核桃的种质资源保存及遗传转化研究奠定了基础。     

鸭梨叶片不定芽再生体系的建立

为建立鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.cv.Yali)叶片不定芽再生体系,采用正交试验设计研究了不同培养基、植物激素和植物生长调节剂的种类及其浓度、蔗糖含量对鸭梨叶片不定芽再生的影响。结果表明,基本培养基是影响叶片不定芽的诱导、继代和生根的关键因素,分别以NN69、MS和1/2MS为宜;IBA是影响叶片不定芽增殖的重要因素;最适诱导培养基为NN69+BA3.0mg·L-1+IAA0.5mg·L-1,再生频率和再生芽数分别为80.00%和1.77;最适增殖培养基为MS+BA1.0mg·L-1+IBA0.5mg·L-1,增殖系数可达2.23;最适继代培养基为MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1,平均苗高4.98cm;最适生根培养基为1/2MS+蔗糖30g·L-1+IBA0.5mg·L-1,生根率和平均根数分别为50.00%和2.04。该再生体系可为鸭梨遗传转化提供有效的受体系统。     

甜樱桃四倍体杂种砧木Y1高频、高效离体再生体系研究

以甜樱桃四倍体矮化砧木Y1试管苗叶片为外植体,探讨了不同基本培养基、激素组合、暗培养时间和叶片发育阶段对其不定芽再生的影响,建立甜樱桃四倍体矮化砧木的高频、高效离体再生体系,为进一步进行遗传转化研究奠定基础。结果表明,甜樱桃四倍体矮化砧木Y1采用WPM培养基再生效果最好,明显优于MS和DKW培养基;最佳激素组合为6-BA2.0 mg.L-1+IBA1.0 mg.L-1;接种后暗培养可以明显提高不定芽再生率,最适宜暗培养时间为14 d;Y1试管苗顶部完全展开的幼嫩叶片再生能力最高。通过以上条件的优化,成功建立了甜樱桃四倍体矮化砧木的高频、高效离体再生体系,离体叶片不定芽再生率达90%,每叶片平均再生不定芽数达4.1。     

早梨18号叶片不定芽诱导及植株再生的研究

体外建立并扩繁了早梨18号的无性系,以试管苗叶片为外植体.研究了基本培养基、植物生长调节剂组合、暗培养时间对叶片不定芽诱导与植株再生的影响.结果表明:早梨18号叶片在适宜的条件下可发生大量不定芽;暗培养预处理有利于提高叶片的再生频率,以暗培养15 d为宜;叶片在NN 69 6-BA 5.0mg/L NAA 0.5mg/L和NN 69 TDZ 1.0 mg/L IBA0.5 mg/L的培养基上分别获得了56%和54%的叶片再生频率.     

‘嘎拉’苹果小孢子来源纯合基因型植株叶片再生体系研究

【目的】建立‘嘎拉’苹果小孢子来源纯合基因型植株高效再生体系,探索一个简单有效的苹果纯合基因型株系叶片外植体诱导再生不定芽的方法。【方法】以‘嘎拉’苹果花药离体培养获得的纯合基因型株系离体叶片为外植体,进行再生培养,检测‘嘎拉’各纯合基因型株系的不定芽再生能力;通过优化植物生长调节剂、叶片预处理和培养方式,建立苹果纯合基因型植株高效再生体系。【结果】苹果纯合基因型株系中双单倍体株系DH2-10的再生率最高,四倍体纯系DH2-15次之,单倍体株系DH2-3再生率较低,三倍体纯系DH2-40在培养中难以再生。不同基因型适宜的激素质量浓度不同,相较于双单倍体株系,四倍体纯系DH2-15在较高细胞分裂素水平再生率较好。再生培养过程中,整叶带伤口的外植体预处理方式优于叶片切块接种的方式,接种苗龄40 d左右的叶片有更好的再生率。【结论】建立了苹果纯合基因型高频高效离体再生体系:双单倍体株系DH2-10在最适再生培养基MS+0.5 mg·L~(-1)IBA+5 mg·L~(-1)6-BA上培养,再生周期为23~35 d,再生系数为7.27,再生率达100%。四倍体纯合基因型株系DH2-15适宜在MS+0.5 mg·L~(-1)IBA+6 mg·L~(-1)6-BA培养基上进行再生培养,再生率为93.33%。建立的再生体系可用于纯合基因型株系的快速增殖和遗传转化。     

秋福红树莓叶片离体再生植株研究

以红树莓品种秋福(Rubus L.cv.Autumn Bliss)离体叶片为外植体,研究适合其再生植株的叶片部位、放置方式、植物生长调节剂以及暗培养时间等条件。结果表明,叶片外植体接种于MS+TDZ2.00mg/L+IAA0.10mg/L的培养基,暗培养2～3周转移至正常光照下培养效果最好,愈伤组织形成率、不定芽再生率和外植体不定芽数分别为100.00%、95.83%和(5.57±0.27)个。将再生芽接种于1/2MS+IBA0.10mg/L的培养基中,35d后生根率达100.00%。再生植株炼苗后移栽,30d时成活率达97.30%,成功地建立了红树莓叶片的离体再生体系。     

薄皮甜瓜离体再生体系的优化

通过器官发生途径诱导形成不定芽,建立薄皮甜瓜‘IVF05’植株再生体系,探讨不同外植体及不同的激素组合对不定芽再生的影响。结果表明,子叶近胚轴端外植体的不定芽再生率为90.00%,子叶节的再生率为85.00%,子叶远胚轴端外植体的再生率为31.43%,下胚轴的再生率为0,子叶近胚轴端是‘IVF05’不定芽分化的理想的外植体。不定芽诱导中最适宜的培养基为MS+ABA 0.5 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1,在此培养基上产生的愈伤较少,能正常分化的不定芽较多,不定芽的生长较快。在MS+6-BA 0.05 mg·L-1的不定芽伸长培养基上,分化的不定芽能够伸长长大。在MS+IAA 0.2 mg·L-1的生根培养基上无根苗容易生根。从外植体培养到获得完整再生植株需50⁶0 d。     

'砀山酥'梨叶片再生体系的建立

以‘砀山酥’梨(Pyrus bretschneidericv.Dangshansu)叶片为材料,研究基本培养基种类、植物生长调节物质浓度、抗氧化剂、碳源对再生的影响,以及不同浓度生长激素对再生芽生根的影响。结果表明:NN69培养基是叶片再生不定芽的最佳培养基,诱导不定芽的分化以培养基NN69+6-BA 3.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+琼脂6 g/L为佳;AgNO3比活性炭和PVP更利于叶片的诱导;与蔗糖相比山梨醇更适宜作为叶片再生的碳源,最佳浓度是10 mg/L,叶片再生频率最高为74.03%,平均再生芽数1.01。生根培养基以ASH+IBA 10 mg/L+间苯三酚80 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂6 g/L为佳,生根率高且根粗壮。     

西瓜未成熟胚高效再生体系的建立

为了建立西瓜高效遗传转化的再生体系,以西瓜杂交品种‘秀玲’、自交系‘97103’和野生种质‘PI296341’的未成熟胚为外植体,分析了基因型、未成熟胚发育时间和植物生长调节剂等因素对体外再生率的影响,获得了西瓜离体培养再生植株。结果表明,以授粉后24 d的西瓜未成熟胚为外植体,在MS+SH维生素+6-BA2.2 mg·L-1培养基上,‘秀玲’、‘97103’和‘PI296341’的未成熟胚外植体能够诱导出不定芽,不定芽诱导率为87.78%、82.78%和86.11%,不定芽在MS+SH维生素+6-BA 0.2 mg·L-1+IAA 0.02 mg·L-1培养基上伸长、展叶,在MS+IBA 1.0mg·L-1的培养基上诱导生根得到完整的再生植株。以未成熟胚为外植体获得再生植株的途径,可为西瓜遗传转化提供有效的受体系统。     

平邑甜茶叶片不定芽再生及NO的效应

以平邑甜茶继代组培苗叶片为材料,研究了一氧化氮(NO)供体--硝普钠(SNP)、6-BA、NAA、2,4-D、ZT和光暗条件对平邑甜茶叶片不定芽再生的影响.结果表明,6-BA、ZT、NAA和暗培养均有利于叶片不定芽的分化;在含有生长素和细胞分裂素的MS培养基中,加入6.0和12.0 mg·L-1的SNP可极显著诱导叶片不定芽的分化;以MS 6.0 mg·L-1 BA 0.5 mg·L-1 NAA 0.2 mg·L-1 ZT 6.0 mg·L-1 SNP为培养基,暗培养15 d,叶片不定芽分化效果最好,再生率达67.8%.     

露地菊离体再生体系建立及BrDFR基因遗传转化

以露地菊(Chrysanthemum morifolium)品种‘神韵’无菌苗叶片为外植体材料,研究植物生长调节剂配比对其愈伤组织诱导再生芽的影响,以建立离体再生体系.研究结果表明,露地菊‘神韵’在含NAA 1.0 mg·L-1+BA 1.0 mg· L-1的MS培养基上获得了最高的再生芽分化率.利用已经克隆的‘津田’芜菁BrDFR基因构建非抗生素筛选的表达载体.以露地菊‘神韵’的无菌苗叶片为受体,通过农杆菌介导进行BrDFR基因的遗传转化.以载体的PMI基因为筛选标记,通过甘露糖筛选获得了‘神韵’的遗传转化再生植株.经过PCR验证和Southern杂交检测证实BrDFR基因已经整合到‘神韵’基因组中.     

红将军苹果离体叶片高频再生体系研究

以中熟红富士品种红将军组培苗的叶片为试材,研究了离体叶片诱导再生不定芽过程中不同激素种类与组合、暗处理时间、取叶部位等因素对再生率的影响。结果表明,试管苗继代培养3～4代,当代培养25～30d,取顶部嫩叶3～4枚,剪除叶片边缘,将剪切的叶片中部以近轴面接触在最佳诱导分化培养基上:MS+TDZ1.0mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖30g/L,培养基pH值5.8,黑暗培养10d后,转入光照培养条件下,再生频率达100%,再生芽数平均4.6个。叶片再生不定芽分化后15～20d转接到苹果继代培养基MS+BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L上,当不定芽长度约2cm时再转接到1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+Ac0.5g/L+蔗糖2%的生根培养基上,光培养15d后,生根率可达86.0%。     

甜樱桃砧木吉塞拉(Gisela)叶片再生体系研究

 以甜樱桃矮化砧木‘Gisela 5’和‘Gisela 6’的组培苗为试材，研究建立叶片的离体再生体系。结果表明，Gisela 6的再生能力高于Gisela 5；叶片正面接触培养基比背面接触培养基更有利于分化再生。用新梢顶端1~3节新展开的叶片制备外植体，分别接种在WPM+BA 7 mg/L+IBA 0.3 mg/L和WPM+BA 5 mg/L+IBA 0.5 mg/L的培养基上，黑暗处理15 d，Gisela 5的最高分化频率为75.1%，Gisela 6为100%。再生芽苗在三角瓶中生根容易，移人大田后生长正常。