液氮超低温在赤霉素产生菌菌种保藏中的应用

目的:探索液氮超低温在赤霉素产生菌菌种保藏中的应用。方法:用15%的甘油制成的菌丝片段悬浮液经匀速降温预冷后,置于液氮所产生的-196℃的超低温环境中保藏,一定保藏周期后取出液氮管做菌株形态观察及上摇床进行效价测定,检验保藏效果。结果:赤霉素产生菌菌种在液氮超低温保藏条件下,其生物活性、生产能力基本无变化。结论:液氮超低温法适用于赤霉素产生菌菌种保藏,效果优于传统的石蜡油保藏法。     

不同保藏方法对香菇菌种酶活性影响

为研究香菇菌种在不同保藏方法后的酶活性变化,用液氮保藏、4℃保藏、矿物油保藏、25℃保藏等4种保藏方法对香菇菌种进行保藏试验,同时测定保藏后的生长速度和酶活性。研究结果可知:液氮保藏对维持香菇菌种活力的效果最好,香菇菌种经液氮保藏后的生长速度最快,并且其漆酶、羧甲基纤维素酶(CMC酶)、木聚糖酶和淀粉酶的活性最高,而矿物油保藏的生长速度最慢和酶活性最低。结论:上述4种酶活力可作为香菇菌种保藏效果的评价指标。     

液氮保藏菌种对平菇菌丝体和子实体的影响

以皖平菇1号为试验材料,对菌种液氮保藏过程中的降温方式、保护剂、解冻3个关键环节设计三因素三水平正交试验.结果表明,正交试验9个不同的处理中对菌种萌发率影响最小的条件处理组合为不加保护剂直接放入液氮,38 ～40℃水浴解冻;对菌丝生长速度影响最小的处理组合为-70℃-液氮逐步降温,10％的二甲基亚砜作保护剂,38 ～ 40℃水浴解冻;对子实体平均产量影响最小的处理组合为4℃--20℃--70℃分别放置2h的逐步降温法,10％的蔗糖水溶液作保护剂,38 ～ 40℃水浴解冻.保护剂和解冻方式的选择对菌种影响较大,结合成本等其他因素综合考虑,不加保护剂直接将菌种放入液氮,38 ～ 40℃水浴快速解冻的处理方式为最佳选择.     

冬虫夏草菌种保藏方法的比较

[目的]研究3种抑制菌株代谢活性的长期保藏方法对冬虫夏草菌种保藏的效果。[方法]以菌丝体生长得率、虫草多糖、虫草酸作为衡量菌种的质量指标,采用低温冻结、液氮冷冻和冷冻干燥保藏等3种方法对C-03冬虫夏草菌种的保藏效果进行比较。[结果]真空冷冻干燥保藏,以脱脂牛奶为保护剂,4℃预冷30 min,然后于-20℃预冻2 h,再于-80℃预冻24 h的阶段降温条件下,菌株萌发长势、菌丝得率及有效成分含量优于其他2种保藏方法。[结论]真空冷冻干燥保藏为冬虫夏草菌种较为理想的长期保藏方法     

几种菌种保藏方法对地生枝顶孢活力的影响

用3种不同的保藏方法对地生枝顶孢菌种进行保藏处理,结果表明,灭菌蒸馏水室温保藏在长达30个月后完全保存了活力;冷冻干燥的菌种在25℃破坏性条件下12个月后仍然存活;黄豆粉培养基上4℃冰箱保藏存活6个月;SDAY培养基4℃冰箱保藏效果最差,只有1个月。     

重组菌低温冷冻保藏试验

综述了菌种保藏方法及研究进展。试验对比了不同浓度甘油冷冻保存不同重组大肠杆菌菌株的效果。冷冻保存360 d后测试表明,含质粒菌活细胞数15%甘油组25%甘油组8%甘油组,其中P38活细胞数GFP活细胞数4T-1活细胞数,8%甘油组与15%甘油组的质粒含量大小无差异;而无质粒菌活细胞数25%甘油组15%甘油组8%甘油组,且BL21的活细胞数TOP10的活细胞数。37℃培养菌落时,含质粒菌需20～22 h,无质粒菌只需16～18 h。-20℃冷冻保藏重组大肠杆菌时,宜在菌液OD600值为1.0,甘油终浓度保持15%～25%为佳。     

矿油保藏食用菌效果研究

保藏菌种，为了防止斜面传代培养由于培养基干燥而死亡，同时，为了限制氧的供应以削弱代谢作用，在斜面培养基覆盖灭过菌的矿油进行室温或冷却保藏，这就是所谓的矿油保藏法。它要求的条件不高，方法简便易掌握。５种食用菌：６８０１、６８１０、６８１３、６８１５和６８２３，经过３个矿油保藏后，检查其成活率是１００％，证明矿油保藏是一种较理想的菌种保藏方法。     

乳牛胚胎冷冻保存技术和受胎率的研究

51枚可用胚胎,依次通过含有3.3%,6.7%,10%甘油的抗冻剂处理后,装入26支塑料细管,置于冷冻仪上,以每分钟降低1℃的速率从室温降-6.5℃,平衡5 min 后进行诱发植冰,又平衡5 min,再以每分钟降低0.3℃的速率降至-36℃,平衡10 min 后直接投入-196℃的液氮中保存。先后从液氮中取出16支冷冻保存不同时间(1,8,9,10,28,29,31,32,62天)的冷冻胚胎塑料细管,用30℃温水进行快速解冻,分3步脱除甘油,回收32枚胚胎,其中可用胚胎22枚分别移植给11头受体牛,结果4头妊娠(妊娠率为36.3%)并顺利生下4头发育正常的犊牛。     

羊肚菌液体菌种培养基配方优化研究

以菌丝球数量、菌丝球大小、菌丝球干重为指标,试验羊肚菌仿野生栽培中利用液体培养基培养菌种时,在15℃~25℃下,采用适宜的培养基为玉米粉4.0%、葡萄糖1.0%、黄豆粉2.0%、酵母粉0.3%,KH2PO4 0.2%,MgSO4 0.1%,CaSO4 0.1%。生产液体羊肚菌菌种具有发菌快,菌龄一致,能够快速规模化生产。     

河西走廊灵芝不同菌种菌丝生长比较试验初报

对引进的6个灵芝品种进行种性比较试验。结果表明：各菌种在同一温度下的母种培养基上及不同温度下的原种培养基上的性状及菌丝生长速度存在较大差异。在母种培养基上,灵芝大盖G9、灵芝444、灵芝265、泰山仙芝菌丝生长势强,菌丝生长粗壮、旺盛、颜色纯白;在原种培养基上,温度在26℃时,灵芝265、灵芝大盖G9两种菌种菌丝生长速度最快。     

食（药）用真菌种质资源研究（一）子囊菌亚门的食（药）用药资源（待续）

中国微生物菌种保藏委员会农业微生物保藏中心上海食用菌分中心经过十多年的努力,收集、保藏了６３属１２５种近２０００株食、药用真菌菌株。已公开发表的有１１４１株,主要属于担子菌亚门和子囊菌亚门。采用－８６℃深度低温、冷冻干燥和液氮超低温保藏等方法进行保藏。近年来保藏设备有了更新。保藏方法正在与国际先进水平接近。子囊菌亚门的可食用真菌数量不多,该中心仅保藏了４属２３株真菌,大多是有经济价值的药用真菌。     

豆豉纤溶酶产酶菌的筛选及菌种保藏

[目的]从豆豉产品中筛选分离活性较高的豆豉纤溶酶产酶菌,并对菌种进行保藏。[方法]用自制的猪血粉为底物配制筛选培养基进行豆豉纤溶酶产酶菌的筛选,然后根据水解圈的大小筛选活性高的产酶菌株,最后将其保藏于LB培养基中。[结果]成功从湖南、广东、江西等地产的豆豉中筛选到一株溶栓活性相对较高的产酶菌。[结论]该研究为新型溶栓药物的开发奠定了基础。     

食用菌菌种的保藏方法

为了使优良菌株尽可能长时间地在生产上发挥作用 ,必须做好菌种保藏工作。菌种保藏的目的在于保持菌种优良性状。菌种保藏是采用干燥、低温、冷冻或惰气供给等方法 ,中止其繁殖、降低其代谢强度 ,使之处于休眠状态 ,菌种保藏方法很多 ,现介绍以下几种。1　母种保藏法1 .1　斜面低温保藏法 　将菌种在适宜的斜面培养基上培养成熟后 ,移入 0～ 4℃的低温下保藏 ;以后每隔 3个月传代 1次。这种保藏方法适用于所有的食用菌菌种 ,但草菇对低温的忍耐力较差 ,其菌丝在 5℃以下即死亡。因此 ,草菇的贮藏温度需提高到 1 0～ 1 2℃ ,否则需在草菇菌苔…     

微生物菌种的保藏方法

介绍了常用的微生物菌种保藏方法,包括斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、沙土管保藏法、生理盐水保藏法、冷冻真空干燥保藏法、液氮冷冻保藏法,并比较了它们的优缺点,旨在为微生物菌种的保藏提供参考。     

灵芝栽培技术

灵芝又称红芝,属担子菌亚门,多孔菌目,多孔菌科,灵芝属. 1菌种选择 灵芝菌种的好坏对子实体形成的迟早和产量高低有很大关系.好的菌种,接种半个月就可形成子实体,每只子实体可达50g左右;差的菌种,需30天左右才能形成子实体,每只子实体只有7～8g.因此,在生产上必须注意选择优良菌种.     

副溶血性弧菌7种保藏方法比较

采用7种不同方法对副溶血性弧菌的保藏效果进行研究,以菌种的保藏时间、存活率、生物学特性及毒力指标比较保藏效果.结果表明:保藏时间由长到短依次为:冷冻真空干燥保藏法＞-20℃脱脂牛奶保藏法＞室温液体石蜡保藏法＞4℃液体石蜡保藏法＞-20℃甘油保藏法＞室温斜面保藏法＞4℃斜面保藏法.7种方法保藏前后,副溶血性弧菌革兰氏染色,氧化酶,0 NaCl、4％ NaCl及10％ NaCl盐度生长试验,TCBS培养基上生长性状及溶血性试验等基本生物学特性均无影响.冷冻真空干燥法毒力稳定,其他保藏方法超过12个月后毒力出现不同程度的下降.采用室温斜面法保藏2个月,菌种生物学特性和毒力均稳定,操作最简便,适宜短期保藏;采用冷冻真空干燥法保藏24个月以上,或采用-20℃脱脂牛奶法保藏20个月,菌种生物学特性均稳定,这2种方法适宜长期保藏.     

缺帘鱼精子超低温保存的初步研究

筛选比较了不同保存液、保护剂、降温方式、解冻方式对缺帘鱼精液超低温保存活力的影响,初步解释了缺帘鱼精子经超低温短期保存后活力明显较鲜精低的原因.结果显示:Ringer's液作为保存液,16%二甲亚砜作为保护剂,选取五步法超低温冷冻保存精子[精子缓慢降温至-150℃→液氮面上3 cm(约-170℃),停留4 min→液氮面(约-190℃),停留1 min→液氮];40℃水浴解冻取得最好的冻后活力,解冻后精子活力为(35.2±4.5)%.     

小鼠半胚冷冻的研究

对半胚冷冻的方法和条件进行了系统研究,证明采用下述程序冷冻小鼠半胚可显著提高解冻半胚的成活率:①在含10％甘油的磷酸缓冲液中平衡35～40min;②在-6.5℃或-7℃诱发结晶,③以0.05℃/min的速度缓慢降温15min;④以0.3℃/min的速度降温至-35℃投入液氮;⑤在30～35℃的水浴中解冻;⑥在含不同浓度(6.6％,3.3％,0％)甘油和0.3mol/L蔗糖的磷酸缓冲液中平衡35～40min,去除甘油。将按上述程序冷冻—解冻的16对半胚移植后,获半胚鼠12只,其中5对为同卵双生。     

旋毛虫液氮冷冻保存试验

本试验系采集人工感染旋毛虫小白鼠的肌肉,经消化后,用PBS离心清洗三次,取沉淀用10％甘油的PBS制成虫体悬液,细管分装,在液氮罐口以1℃/分的速度降温至—36℃,然后投入液氮(-196℃)低温保存,解冻后约80％的虫体存活,效果良好。     

菌种保藏条件对尖顶羊肚菌(Morchella conica)菌丝生长的影响

研究了尖顶羊肚菌菌种在不同条件下的短期保藏对其菌丝生长的影响,以寻求适宜的菌种保藏条件。采用10℃/5℃(昼/夜)和15℃/10℃2种变温条件、散射光和黑暗2种光照条件,分别保藏菌种30 d和60 d,以冰箱(4℃)保藏为对照。结果表明,10℃/5℃保藏时,尖顶羊肚菌的菌丝生长优于15℃/10℃及对照保藏;散射光保藏菌落颜色和菌丝气生性好于黑暗保藏;在10℃/5℃温度下,保藏时间对菌丝生长影响不大,可以继续延长保藏时间,在15℃/10℃温度下,不宜超过60 d的保藏时间。因此,较适宜的保藏条件是10℃/5℃、散射光、保藏30 d,菌株表现为菌落边缘整齐,菌丝气生性中等,菌丝致密,菌落角变面积小,菌丝长速均匀稳定和菌丝干重较高。说明尖顶羊肚菌菌种在较低的常温、有散射光条件下保藏比保藏在冰箱里效果佳。