黄姑鱼源溶藻弧菌的分离鉴定

2013年8月,罗源湾鸟屿海区网箱养殖黄姑鱼发生死亡事件。病鱼体表无明显异常,肝脏有点状出血,肾、脾略微重大,胃肿大明显,肠空。采用生理生化指标鉴定及16S rDNA系列同源性分析和系统发育树构建等方法,对从病鱼脾脏分离获得的优势菌株进行了鉴定。其生理生化指标符合溶藻弧菌特点,GenBank中同源序列比对结果显示,该菌与溶藻弧菌的16S rDNA序列同源性高达99.0%,系统进化树中与溶藻弧菌自然聚为一支。药敏实验结果表明:该菌对恩诺沙星等5种抗生素敏感。     

冻虾仁中一株发酵阿拉伯糖的溶藻弧菌的分离鉴定

在对一份冻虾仁样品的检测过程中分离到一株弧菌,经过形态观察、自动生化测试和手工生化测试,最终鉴定为发酵阿拉伯糖的特殊生化型溶藻弧菌.叙述了检测、分离和鉴定的过程,并对弧菌鉴定的方法选择和弧菌病的防治作了探讨.     

绿海龟源溶藻弧菌的分离鉴定及药敏分析

【目的】腐皮病是绿海龟(Chelonia mydas)龟苗培育中的常见病,传染性极强,发病率和死亡率高。为确定病因及治疗方法,从病龟鳍状肢的腐皮组织中分离病原菌。【方法】从症状明显的稚龟四肢病灶中分离纯化得到疑似病原菌,编号CMRT91026,开展形态特征、生理生化特性、16SrRNA鉴定和系统发育树构建及相关药物敏感试验。【结果】该菌能在TCBS培养基上生长,菌落呈黄色,为革兰氏阴性短杆菌;在1%NaCl葡萄糖磷酸盐胨水、蔗糖、甘露糖和赖氨酸脱羧酶上的生化特性均显示阳性,并且在3%～10%NaCl胨水均能生长;与NCBI上的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)同源性达100%。药敏结果显示,该菌对恩诺沙星、萘啶酸、左氧氟沙星、米诺环素、头孢吡肟和头孢曲松敏感;对多西环素、氟苯尼考、妥布霉素、大观霉素、诺氟沙星和氨曲南呈中介;对新霉素、复方新诺明、阿莫西林、庆大霉素、丁胺卡那霉素等15种药物有耐药性。【结论】该菌株鉴定为溶藻弧菌,对喹诺酮类药物(如恩诺沙星)、四环素类药物(如米诺环素)及头孢类(如头孢曲松)等药物较为敏感。试验结果为绿海龟稚龟溶藻弧菌病的诊断及病害防控提供了一定参考。     

一株溶藻真菌的初步分离鉴定及其溶藻作用研究

从水体中分离得到一株具有溶藻能力的真菌,命名为Am11.经形态学和18S rRNA序列对比分析,表明该菌株属于赤霉菌属(Gibberella).研究了该菌株对湖泊中优势藻的溶藻效果,初步探讨了其溶藻方式及溶藻物质.结果表明,该菌株对小球藻、惠氏微囊藻、栅藻和蛋白核小球藻具有一定的去除效果,对4种藻叶绿素a的去除率分别为82.5％、64.9％、63.5％和85.4％;该菌株对蛋白核小球藻是间接溶藻,且溶藻因子是菌体胞外分泌的具有热稳定性的非蛋白类物质.     

一株半滑舌鳎致病性假交替单胞菌的分离鉴定与药敏特性分析

从患皮肤溃疡病的半滑舌鳎肝脏中分离到一株优势菌株CSLG2,根据细菌形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA序列鉴定及系统发育进化树分析结果,发现该菌株与假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)同源性最高。对该菌株进行药敏试验,结果发现该菌对米诺环素、红霉素、头孢他啶、头孢曲松、氯霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物高度敏感,而对红霉素、四环素、头孢唑啉、头孢拉定、青霉素和呋喃妥因具有一定的耐药性。     

一株水华鱼腥藻溶藻细菌的分离鉴定和溶藻特性

从不同来源的水体和土样中,筛选出对水华鱼腥藻具有溶藻作用的溶藻菌株SLW6。对菌株SLW6进行形态特征分析和生理生化鉴定,及16S rDNA序列分析,并研究了溶藻菌在不同培养时期、不同pH条件下对菌株SLW6溶藻效果的影响,探究了该菌株对水华鱼腥藻的溶藻方式。结果表明：菌株SLW6呈革兰氏阴性,V-P试验、明胶液化试验、甲基红试验为阴性,过氧化氢试验、硝酸盐还原试验都为阳性,菌株SLW6与产碱杆菌属的Alcaligenes faecalis(NR113606.1)的同源性达到99.65%,结合形态学特征,生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,初步判断溶藻菌株SLW6为产碱菌属（GenBank登录号为OP363821）。超声辅助热乙醇提取叶绿素a,分光光度法测定叶绿素a含量,用叶绿素a含量变化计算溶藻率,结果表明SLW6处于对数期时的溶藻效果最好,溶藻率达89.45%;在pH=7条件下,溶藻效果较好,溶藻率为47.03%;溶藻菌SLW6对水华鱼腥藻的作用方式是直接溶藻为主间接溶藻作用为辅。     

6株解有机磷细菌的分离鉴定

从合肥市王小郢污水处理厂的污泥中筛选出6株能降解有机磷的细菌,对这6株茵株进行形态、生理生化性状测定,初步鉴定得出SI菌株为微杆菌属(Microbacterium),S2菌株为葡萄球菌属(Staphylococcus),S3(QY081102)菌株为假单胞菌属(Pseudomonas),S4菌株为不动杆菌属(Acinetobacter),S5菌株为黄色单胞菌属(Flavimonas),S6菌株为纤维单胞菌(Cellulomonas).对它们的解磷能力进行测定和比较,S3菌株的解磷能力最强,其D/d值为4.5,对卵磷脂的降解率为66%,进而对S3菌株进行了16S rDNA序列分析,确定其为产碱假单胞茵(Pseudomonas alcaligenes).     

不同氮源对一株溶藻弧菌好氧反硝化效率的影响

为研究溶藻弧菌Vibrio alginolyticus HA2同步硝化反硝化过程中氮的代谢产物,分别用以铵态氮(NH_4⁺-N)、硝态氮(NO_3+-N)、硝态氮(NO_3^--N)、亚硝态氮(NO_2--N)、亚硝态氮(NO_2^--N)为氮源的培养基培养溶藻弧菌HA2 120 h,测定不同时间段菌液浓度,以及NH_4--N)为氮源的培养基培养溶藻弧菌HA2 120 h,测定不同时间段菌液浓度,以及NH_4⁺-N、NO_3+-N、NO_3^--N、NO_2--N、NO_2^--N、pH和发酵罐中气体(N_2、NO、N_2O)的含量,并且拟合菌株生长曲线。结果表明:溶藻弧菌对NH_4--N、pH和发酵罐中气体(N_2、NO、N_2O)的含量,并且拟合菌株生长曲线。结果表明:溶藻弧菌对NH_4⁺-N、NO_3+-N、NO_3^--N、NO_2--N、NO_2^--N降解率最高分别为99.97%、99.95%、36.87%;生长极限k值分别为4.769、5.477、5.567;培养基中的NH_4--N降解率最高分别为99.97%、99.95%、36.87%;生长极限k值分别为4.769、5.477、5.567;培养基中的NH_4⁺-N直接被氧化为NO_3+-N直接被氧化为NO_3^--N;试验中均未检测出NO、N_2O气体,各培养基中N_2量均有上升趋势;各培养基中pH均有增加趋势。研究表明,溶藻弧菌HA2具有开发为高效、环保、安全的硝化反硝化细菌的研究价值。     

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscC基因缺失株的构建

[目的]构建未引入任何遗传标记物的溶藻弧菌vscC基因框内缺失突变株。[方法]首先以溶藻弧菌ZJ51-O基因组DNA为模板,用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)扩增法构建体外vscC基因缺失片段;扩增产物经酶切后连接至自杀质粒pDM4,再转化入大肠杆菌SY327进行克隆,筛选阳性克隆子并进行PCR分析鉴定;提取阳性克隆子的自杀重组质粒pDM4-△vscC,用热休克法将其转入到大肠杆菌S17-1中,再经接合生殖的方式将自杀重组质粒导入溶藻弧菌ZJ51-O菌株中,利用抗生素筛选策略与蔗糖反向筛选系统,挑选疑似目的突变菌株,最后利用PCR鉴定与测序分析进行确证。[结果]溶藻弧菌ZJ51-O的vscC基因框内缺失突变株构建成功。[结论]该研究为进一步研究vscC基因的功能和T3SS在溶藻弧菌致病过程中所起的作用奠定基础,同时也为溶藻弧菌的其他基因突变株的构建和研究提供了参考和试验经验。     

4株海洋放线菌对半滑舌鳎病原弧菌的拮抗作用

从山东日照海域潮间带选择出对半滑舌鳎鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolytic-us)同时具有较强拮抗作用的4株放线菌.采用琼脂块法测定4株放线菌的抗菌谱,并检测4株放线菌分别在固体和液体培养液中的拮抗作用.结果表明:4株放线菌的抗菌谱均较窄,在固体和液体培养基中对2种病原弧菌都有较强的拮抗作用.     

一株苯并芘高效降解菌的筛选鉴定

为了寻找可降解苯并芘的高效降解菌,从长期受苯并芘污染的焦化厂周边土壤和废水中取样,以苯并芘为唯一碳源反复驯化,分离、筛选出1株高效降解苯并芘的菌株A18。经形态特征和分子生物学分析,初步鉴定为木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)。菌株A18在苯并芘溶液浓度为5 mg/L下,28℃振荡培养12 d,苯并芘的降解率达到44.8%。该菌株首次被证实具有降解苯并芘的能力。     

文蛤中1株河流弧菌的分离·鉴定以及药敏试验

[目的]弄清河流弧菌对海水贝类的危害性,为预防该菌所引起的水产动物疾病提供参考依据。[方法]使用TCBS培养基从文蛤生物体内分离出1株弧菌,对其进行鉴定、致病性以及药敏试验。[结果]分离的弧菌为革兰氏阴性,根据其生理生化特性可初步鉴定为河流弧菌。动物试验结果表明,这株河流弧菌对昆明小鼠具有较强的致病性。河流弧菌对四环素、环丙沙星、头孢曲松、氟哌酸、先锋赛、先锋必、丁胺卡那高度敏感,对安卡青霉素、青霉素G、先锋霉素V、利福平耐药。[结论]临床上,应将选用四环素、环丙沙星、头孢曲松、氟哌酸、先锋赛、先锋必、丁胺卡那作为治疗河流弧菌的首选药物。     

一株益生芽孢杆菌的分离与鉴定

[目的]为优良益生菌的开发提供理论依据。[方法]以采自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所鸡舍附近的土壤样品为材料,采用稀释平板法对其中的菌株进行分离与纯化培养,并对分离菌株的生理生化特性和淀粉酶活性进行测定。[结果]从土壤样品中分离到一株芽孢杆菌（编号为P-31）,结合16S rDNA测序、系统发育树分析和生理生化鉴定结果,确定该菌株为巨大芽孢杆菌,其16S rDNA GeneBank登录号为GU271136;水解酶活性测定结果显示,该菌株具有产蛋白酶和淀粉酶的活性。[结论]该研究所分离的菌株P-31具有良好的益生菌开发前景。     

一株苄嘧磺隆降解菌的分离·筛选与鉴定

[目的]从长期使用苄嘧磺隆的土壤中分离筛选出降解苄嘧磺隆的微生物菌株,并对其进行形态学和生理生化鉴定。[方法]从河北保定农郊被农药污染的土壤中分离筛选出降解苄嘧磺隆的微生物菌株。采用液体发酵的方法筛选降解苄嘧磺隆的菌株,分别于18、48、72h取发酵液。用结晶紫染液涂片染色,观察细菌的生长情况,对涂片结果中菌体生长较好的菌种进行菌种鉴定。[结果]从含有除草剂苄嘧磺隆的初筛培养基中分离筛选出一株具有较好降解能力的菌株C1—11-2,它能够以苄嘧磺隆作为碳源生长。通过形态学、生理生化鉴定及16S rDNA测序,初步鉴定该菌为黄单胞菌属（Xanthornonas）。[结论]为苄嘧磺隆微生物降解的研究奠定了坚实的基础。     

氯霉素降解菌的驯化 筛选及分离鉴定

从鱼塘沉积物中驯化、筛选出能以氯霉素为惟一碳源和能源生长的好氧混合菌CSFO,经过平板分离纯化和进一步筛选得到了对氯霉素有较好降解效果的纯菌株CSFO-3,对其进行了形态特征、生理生化、16S rDNA序列分析和7 d生长及降解效果研究.结果表明,经过10代的驯化,筛选出的好氧混合菌CSFO在底物浓度为100 mg·L^-1时7 d的降解率为28.96%,分离纯化得到的CSFO-3菌株7 d内降解率达30.01%,其菌液在降解4 d时菌密度达最大,该菌株经鉴定为假单胞菌属（Pseudomonas Migula）,与铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的同源性达99%.     

一株产纳豆激酶芽胞杆菌分离及鉴定

[目的]筛选并鉴定纳豆芽胞杆菌.[方法]筛选芽胞杆菌,显微镜观察其菌落形态,生理生化鉴定,测定其生长曲线及产纳豆激酶的酶活力.[结果]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023.该菌最高酶活力可以达263.38 IU/ml.[结论]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023,为下一步开发成具有溶栓功能的食品或药品奠定基础.     

一株喹啉降解菌的分离与鉴定

为了研究石油污染土壤中含氮杂环化合物的降解情况,本文采用选择性富集培养的方法.以喹啉作为目标污染物,从45份石油污染土壤样品中,分离得到155株降解喹啉污染物的高效降解菌株,其中降解效率最高的-株喹啉降解菌命名为Q5,在72h内对于浓度为500 mg·L-1喹啉的降解率达到72.6%.并通过形态学、生理生化试验和16S rDNA序列比对分析对Q5进行了鉴定.结果表明,株菌Q5为革兰氏阳性菌,在LB平板上菌落呈圆形,边缘整齐,乳白色,表面光滑,有黏稠感,是发酵乳酸杆菌(Lactobacillus),属酵母菌,与Lactobacillus fermentam同源性最高,为99.6%.     

一株脂肪酶细菌的分离、鉴定研究

在新疆吐鲁番地区筛选到一株脂肪酶产生菌 ,其形态为杆状 ,好氧 ,白色菌落 ,通过生理生化、16SrDNA序列测定 ,与GENEBANK同源性比较 ,其同源性与芽孢杆菌属标准菌株达到 97% ,认定其为芽孢杆菌属菌 ,暂命名为芽孢杆菌L0 7。