转基因动物制备方法

动物转基因技术是通过将外源性目的基因整合到动物染色体上,使其在体内整合和表达,获得表达外源基因动物的技术。该技术广泛应用于转基因动物育种、基因功能研究、药用蛋白生产和器官移植等方面。其主要方法包括逆转录病毒感染法、显微注射法、体细胞核移植法、胚胎干细胞介导法、精子介导法等。本文旨在对动物转基因的各种技术和方法进行综述,甄别各自的优缺点,为科研工作者提供一定的参考。     

动物基因转移技术

所谓基因转移(transgensis),是指借助基因工程技术将确定的外源基因导入动植物的染色体上,使其发生整合并遗传的过程。从广义上讲,所有向微生物、动植物细胞以及动植物个体导入外源基因,都可称为基因转移。应用转基因技术培育成功的携带外源基因并能遗传的动物个体或品系,就是转基因动物。人们可以根据自己的意愿和需要,在试管内分离或制备各种各样的     

转基因昆虫研究

所谓转基因是指基因的转移 ,即用各种方法插入生物体自身不具有的基因 ,由于染色体遗传物质的交换而使其表现形态得以改变。通过转基因获得的生物称为转基因生物 ,即转基因植物与转基因动物。进而所谓转基因昆虫 ,是指在昆虫染色体上插入了别的生物的基因的重组昆虫。利用病毒导入外源遗传物质时 ,被重组的基因存在于病毒染色体上 ,于是病毒仅只感染生物体 (也称宿主 ) ,而不将重组基因传递给它的下一代。但是转基因昆虫则在染色体上进行了遗传物质的重组 ,一旦基因导入后 ,则可在后代中传递 ,与昆虫自身所具有的基因在后代中的表达完全相同…     

鸡主要组织相容性复合体(MHC)的结构及其与抗马立克病的关系

在同种异体移植中不引起强烈移植排斥反应的抗原称为主要组织相容性抗原。主要组织相容性抗原不是单一抗原,而是一组抗原,控制抗原的基因为一组基因,形成一个免疫识别和调控免疫应答反应的基因复合体即主要组织相容性复合体(MajorHistocompatibility Complex,MHC)。主要组织相容性复合体在不同动物位于不同的特定染色体区带上,是一组紧密连锁的基因群。     

家畜基因转移的研究及进展

<正> 家畜的基因转移是指用物理学的、化学的和生物学的方法,将外源基因导入受精卵中,与动物的染色体稳定地整合在一起,成为受体动物的遗传结构并获得表达,同时能随着动物的繁殖稳定地遗传给后代动物.自从Mintz(1979)成功地将猿猴病毒40的DNA转入小鼠的胚胎,获得第一个转基因小鼠     

转基因动物细胞中外源基因整合位点的分析

旨在通过测定转基因动物中外源基因在宿主染色体上的整合位点来阐述外源基因的整合机制及对该过程中出现的有关问题进行讨论。本研究以MYF6(Myogenic factor 6)转基因小鼠及FAT-1转基因牛为试验材料,采用TAIL-PCR(热不对称交互式PCR)、hiT AIL-PCR(高效热不对称交互式PCR)及本试验室改进的hiT AIL-PCR法,对转基因动物进行了外源基因的整合位点的检测及测序分析。本研究检测到3个MYF6转基因小鼠和一个FAT-1转基因牛的外源基因插入到染色体上的片段,还获得了大量的未能整合到染色体上的PCR片段。通过对以上片段的测序分析,我们发现重组质粒并不一定是在酶切位点断裂,重组质粒可以发生随机断裂,首尾相连等,外源基因整合如宿主染色体,可以同源重组的方式进行整合,也可以进行随机插入。同时,发现并分析了在转基因动物检测中可能存在的问题。通过对外源基因在转基因动物体内整合位点的分析,能够明确转基因动物的遗传背景,能够为转基因动物的生产提供帮助。     

动物基因转移研究的进展

<正> 自 Watson 和 Crick(1953)首次阐明了遗传物质 DNA 结构以来,分子遗传学已经取得了一系列的重要进展。其中基因转移就是被视为当前的一项重要的生物技术。基因转移就是将外源基因插入动物染色体,并使这种插入的基因能够正常的行使功能,根据孟德尔定律进行稳定的遗传。目前,基因转移技术在应用于生物学领域中,无论是对基础性研究与应用性研究方面,均已产生深     

利用特定的雄性DNA探针对奶牛胚胎进行性别鉴定

用特定的丫-染色体DNA探针对进入子宫的奶牛胚胎进行性别鉴定,冷冻已鉴定的胚胎,随后解冻并移植,移植后60天检查胎儿解剖性别比较鉴定结果。特定的雄性DNA探针由从公牛基因库中分离的三种不同雄性基因杂交得到。通过与过量的母牛基因组DNA预先杂交以有效地去掉常染色体和X染色体序列的DNA探针来识别这些基因克隆。选择这三种克隆是因为:(1)重复性高,     

体细胞核移植技术在转基因动物研究中的应用

利用基因工程技术将目的基因整合入动物体细胞染色体中，并将其作为供体核移植入受体－－去核卵母细胞构成重建胚，然后将其移植入假孕母体，待其妊娠、分娩，便可得到经定向遗传修饰的转基因克隆动物。本文就这一领域的发展历史、研究现状、应用前景及存在的问题等方面作一概述。     

转基因动物研究新进展

近年来，一些研究者在原有的转基因动物制作方法基础上作了改进，获得了一些新的方法，如逆转录病毒注射MII期的卵母细胞，体细胞核移植技术法，精子与外源基因合并注射卵母细胞作为核体法以及基因打靶法等。此外转基因动物鉴定和应用也取得了突破性进展。     

基因转移将成为育种家的“强大工具”

传统的育种方法是通过对种内的遗传变异进行选择来改良畜禽。然而,重组DNA和基因转移技术使育种家能够将理想基因直接转移并整合到受体动物的遗传物质中并传递给后代。这种转移过程比当前的选择过程效率高,改良的机会更多。基因转移有若干优点:     

科技动态

德科学家发现基因可能通过食物链转移　　德国多家科研机构进行的一项研究发现，基因可能通过食物链在不同物种之间转移。德国耶拿大学、慕尼黑技术大学、不伦瑞克大学和联邦肉类研究所共同参与了“通过食物链的基因转移”研究。研究人员用转基因玉米制成颗粒饲料喂养实验动物后，发现这些动物的肌肉和器官里都存在玉米的遗传物质DNA片断。　　耶拿大学近日发表的公报称，科学家目前还没有在实验动物体内发现具有完整功能的转基因玉米的DNA序列，也无法确定食物链能否造成基因变异。但参与该研究的耶拿大学科学家格哈德·雅莱斯认为，类…     

转基因小鼠的制备

近二十年来,分子生物学研究获得了长足的发展,而其核心部分基因工程技术的发展尤为突出,特别是转基因动物技术的出现,它不仅为人们研究外源基因在整体动物中的表达调控规律提供了最为有效的手段,而且还可通过改变动物的基因型,使其表现型更符合人类的需要,以培育优良品种及生产人类所需的有生物活性的蛋白质.因此,动物的基因转移这一生物技术已经广泛地应用于生命科学研究的众多领域.所谓转基因动物是指用实验手段将特定外源基因导入动物早期胚胎细胞,由此整合到染色体上,并通过生殖细胞系传递给后代的一类新动物.常见的转基因方法有DNA显微注射法、胚胎干细胞介导法、逆转录病毒转染法、精子载体法、电转移法等,其中以DNA显微注射法最为成熟,使用最广泛、最可靠,该法常用的哺乳动物是实验小鼠.本文所要介绍的就是显微注射法制备转基因鼠所涉及的关键技术和原理(一般程序如图1所示).     

通过家蚕卵巢移植研究环境因素对家蚕卵大小决定基因Esd的影响

四倍体雌蚕与带有伴性隐性基因的二倍体雄蚕交配。产生ZZW、ZWW两种性染色体构型的三倍体雌蚕。通过幼虫特征,这两种三倍体雌蚕可被区分开来。ZWW三倍体雌蚕产下的卵和四倍体雌蚕产下的卵一样大,ZZW三倍体雌蚕产下的正常卵中混有许多不规则卵,这一现象可以解释为:ZWW蚕有两个W染色体,而W染色体上存在决定蚕卵大小的数量性状基因-Esd。如果Esd基因表达受环境因素如激素,类脂化合物,蛋白质等的影响,那么被移植到ZZW三倍体雌蚕体腔内的ZWW卵巢移植体所产生的卵将变小而和宿主卵一样。本研究在ZZW三倍体和ZWW三倍体雌蚕之间以及带与不带大卵基因Ge的两种二倍体雌蚕之间进行了卵巢移植,以分析环境因素对卵的发生的作用。结果表明:宿主卵巢、移植体卵巢都产生由原基因支配的蚕卵,而环境因素对卵大小不发生作用。     

非编码RNA在胚胎发育过程中的作用

胚胎发育是一个复杂的过程,其发生受到了很多转录调控因子的调控。随着高通量深度测序技术的发展,研究发现非编码RNA(ncRNA)对动物胚胎发育、X染色体失活、性别调控、脑部发育都具有十分重要的调控作用。其中,miRNA主要通过与其靶向mRNA的3′UTR结合参与调控胚胎发育的相关基因;lncRNA通过转录干扰或是修饰染色质来调控相关基因从而介导哺乳动物X染色体失活和昆虫W染色体的剂量补偿;piRNA通过沉默转座子来维持生殖细胞DNA完整性,并参与生殖细胞形成及家蚕性别调控;circRNA可以作为miRNA的海绵调控动物脑部的发育。本文拟从miRNA、lncRNA、piRNA、circRNA等ncRNA角度阐述其在胚胎发育过程中的研究进展,为进一步研究ncRNA参与调控动物胚胎发育过程的作用机制提供参考。     

马属动物的细胞遗传学特性

马属动物染色体的核型模式图及染色体带、亚带研究不仅有助于精确找出马属动物各种间的染色体同源区段,准确进行基因的定位,同时能够检测出染色体存在的一些缺陷。文中概述了马属动物各种群染色体的核型及它们之间的核型关系,染色体带型研究,FISH和ZOO-FISH技术在马属动物上的应用,并阐述了马属动物的种间杂种及一些遗传特例。     

家蚕转基因方法及研究进展

转基因动物是指以实验方法导入的外源基因在动物基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 1 980年Ｇｏｒｄｏｎ等将胸腺激酶 (ＴＫ)基因和ＳＶ40病毒基因片段的融合基因通过微注射技术导入到小鼠的受精卵中 ,发现ＴＫ基因整合到了小鼠的染色体中 ;随后相继的类似研究发现整合到小鼠染色体中的外源基因能够遗传给后代。 1 982年Ｐａｌｍｉｔｅｒ等采用转基因技术培育出了携带有人生长激素 (ｈＧＨ)的转基因小鼠 ,由于小鼠具有很快的生长速度 ,个体较正常小鼠大二倍以上 ,成了当时轰动一时的“巨型小鼠”。超级小鼠的成功 ,标志着转基因动…     

牛胚胎移植与疫病控制

近二十年来,胚胎移植技术飞速发展包括人及许多种动物(特别是牛)胚胎移植已经达到相当高的技术水平。分子生物学技术,如核酸移植已经培育出了相同的克隆羊和克隆牛胚胎;胚胎显微注射技术已产生了基因转移的新动物种。国际间动物的进出口,已经由过去花费昂贵的运输费用直接进出口动物变为进出口动物胚胎。胚胎的冷冻技术     

转基因动物研究概况

转基因动物是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物.自从本世纪七十年代初期重组DNA技术问世以来,经过二十多年的探索,基因工程无论在理论研究上,还是在生产的实际应用方面都取得了惊人的成绩.随着重组DNA技术的不断发展,许多具有重要价值的蛋白基因及有关调控序列得以克隆,并通过体外培养细胞实现了表达.但是,体外培养细胞虽然可以无限繁殖,却不能反映出基因在正     

人黑色素瘤定向移植小鼠模型已建立

由上海市医学科技发展基金资助,上海市肿瘤研究所的实验病理室承担的“人黑色素瘤皮下移植定向转移小鼠模型的筛选和建立课题已通过了上海市卫生局组织的成果鉴定。 建立人体肿瘤动物转移模型,已成为研究肿瘤转移机理和转移治疗的重要工具。至今为止报道的人体肿瘤动物皮下