断奶前后仔猪小肠Proglucagon mRNA的时空特异性表达

摘要：目的：胰高血糖素样肽-2（GLP-2）与小肠上皮生长关系密切。研究断奶前后仔猪十二指肠、空肠和回肠GLP-2 mRNA 表达丰度的变化规律，探讨断奶前后仔猪小肠上皮更新缓慢，是否与编码GLP-2的基因 — 胰高血糖素原（Proglucagon）的时空特异性表达有关。方法：本实验随机选取新生仔猪9窝，于35日龄（d）断奶。分别于断奶前1周（28d）、断奶当天（35d）、断奶后72h（38d）、断奶后1周（42d）、断奶后10天（45d）随机选取仔猪6头，屠宰，迅速采取十二指肠、空肠（后段）和回肠粘膜，用RT-PCR检测样品中胰高血糖素原 mRNA表达量。结果：胰高血糖素原基因在小肠中的表达呈现明显的空间（肠段）特异性，空肠和回肠表达丰度较高，而在十二指肠表达很少。胰高血糖素原 mRNA在仔猪空肠和回肠的表达显示截然不同的时间（日龄）特异性模式：空肠胰高血糖素原 mRNA表达在42日龄之前保持较高水平，而在断奶后1周和断奶后10天显著下降；而回肠中胰高血糖素原 mRNA表达水平在本实验观察期内保持稳定，未检测到日龄相关的变化。结论：断奶仔猪小肠GLP-2 mRNA表达呈现时空特异性规律。     

日粮添加木聚糖酶对肉鸡小肠葡萄糖吸收及其转运载体基因表达影响

156羽1日龄AA肉雏鸡随机分为对照组和试验组，对照组饲以小麦基础日粮，试验组在基础日粮中添加1000mg/kg木聚糖酶，试验期为30d。与对照组相比，试验组4周内平均日增重提高4.81％（P〈0．01），料重比下降5．00％（P〈0．05）；肠系膜静脉血清中葡萄糖的含量提高5．56％（P〈0．05）。采用半定量RT-PCR方法测定十二指肠和空肠黏膜SGLT1 （sodium／glucose cotransporter 1）和GLUT2（glucose transporter 2）mRNA的表达，发现木聚糖酶显著增加十二指肠SGLT1 mRNA的表达，增幅为33．30％（P〈0．05），试验组空肠SGLT1 mRNA的表达量比对照组增加8．21％，但差异不显著（P〉0．05）。木聚糖酶对十二指肠和空肠GLUT2 mRNA表达均无显著影响。提示木聚糖酶主要作用在小肠上段，通过上调SGLT1的表达而影响肉鸡小肠葡萄糖吸收。     

猪肠道寡肽转运载体1(PepT1)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化

研究旨在探讨猪肠道寡肽转运载体（PepT1）mRNA表达的肠段特异性和发育模式,为寡肽营养在养猪生产中的应用提供理论依据。实验分别选取遗传背景相同的1、7、26、30、60、90和150 d蓝塘和长白公猪各5头,测体重后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品;以18S rRNA为内标基因,用实时荧光定量PCR法（SYBR Green Ⅰ试剂盒）检测PepT1 mRNA在60 d长白猪表达的肠段特异性及其在蓝塘和长白猪肠道的发育模式。结果显示：长白猪肠道PepT1 mRNA的表达丰度十二指肠显著高于空肠和回肠（P <0.05）,结肠无PepT1 mRNA的表达;PepT1 mRNA的表达丰度在十二指肠为蓝塘猪7、90 d和长白猪60 d,而在空肠和回肠为蓝塘猪60 d和长白猪90 d时达最高水平（P <0.05）;蓝塘和长白猪肠道PepT1 mRNA的表达在断奶前（28 d断奶）具有不同的发育模式,而在断奶后则具有相似的发育性变化;同一猪种不同肠段PepT1 mRNA的表达模式不同,但空肠和回肠在断奶后具有相似的发育性变化;不同猪种同一肠段PepT1 mRNA的表达蓝塘猪十二指肠在7和90 d、空肠在7和60 d及回肠在30 d时分别显著高于长白猪（P <0.05）。结果说明猪肠道PepT1 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的调控。     

不同基因型肉鸡十二指肠SGLT1和GLUT2 mRNA表达的发育性变化

选用遗传背景相同的1 d父母代雄性Arbor Acre (AA)和岭南黄肉雏鸡各120羽，饲养58 d，统计其生产性能并在不同时间采集十二指肠样品，采用相对定量RT-PCR方法研究不同基因型肉鸡在不同时期十二指肠钠葡萄糖共转运载体1(sodium/glucose cotransporter1, SGLT1) 和葡萄糖转运载体2(glucose transporter2, GLUT2) mRNA的表达丰度。结果显示： ①AA鸡每周平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)均显著高于黄羽肉鸡(P＜0.05)。②AA鸡和黄羽肉鸡SGLT1 mRNA表达，从2～30 d不断升高，44 d下降，55 d回升；不同基因型之间SGLT1 mRNA丰度比较，AA鸡均高于黄羽肉鸡，且在16和30 d差异显著(P＜0.05)。③AA鸡和黄羽肉鸡GLUT2 mRNA的表达在2～30 d呈现升高的趋势，且16和30 d均显著高于2 d(P＜0.05)；AA鸡44和58 d GLUT2 mRNA的表达显著低于16和30 d(P＜0.05), 而黄羽肉鸡GLUT2 mRNA的表达，58 d显著高于2、16和30 d(P＜0.05)；不同基因型之间GLUT2 mRNA丰度比较，16和30 d AA鸡显著高于黄羽肉鸡(P＜0.05)，58 d时黄羽肉鸡GLUT2 mRNA的表达显著高于AA鸡(P＜0.05)。以上结果说明，AA鸡生产性能显著高于黄羽肉鸡，营养水平的改变对动物生产性能有较大影响，AA鸡的反应比黄羽肉鸡更敏感; 不同基因型肉鸡十二指肠SGLT1 mRNA的表达具有相同的发育模式，且与生产性能的表现相一致；更换饲料下调SGLT1 mRNA的表达，提示调控SGLT1的表达，可以改善生产性能; 生长发育后期黄羽肉鸡GLUT2 mRNA的表达模式，是其有别于AA肉鸡的重要特征。     

鸡胃肠道生长抑素(SS)mRNA表达的组织特异性

以30dArborAcre(AA)肉鸡为模型,采集胃肠道样品,采用相对定量RT-PCR方法研究了生长抑素(SS)mRNA在鸡胃肠道分布的组织特异性。结果表明,腺胃SSmRNA的表达量高于所有肠段,差异极显著(P<0.01);十二指肠和空肠SSmRNA的表达丰度相似,二者均显著高于回肠(P<0.05)。定性研究显示,肌胃和结直肠均有SSmRNA表达,但其表达量显著低于腺胃、十二指肠、空肠和回肠。SSmRNA在主要的消化(腺胃)、吸收(十二指肠和空肠前段)器官的高丰度表达,提示SS对营养物质的消化吸收具有重要的调控作用。异性     

in Gastrointestinal Tracts of Chicken

以30 d Arbor Acre (AA)肉鸡为模型，采集胃肠道样品，采用相对定量RT-PCR方法研究了生长抑素(SS ) mRNA在鸡胃肠道分布的组织特异性。结果表明，腺胃SS mRNA的表达量高于所有肠段，差异极显著 (P＜0.01)；十二指肠和空肠SS mRNA的表达丰度相似，二者均显著高于回肠(P＜0.05)。定性研究显示，肌胃和结直肠均有SS mRNA表达，但其表达量显著低于腺胃、十二指肠、空肠和回肠。SS mRNA在主要的消化(腺胃)、吸收(十二指肠和空肠前段)器官的高丰度表达，提示SS对营养物质的消化吸收具有重要的调控作用。     

中药复方对早期断奶仔猪血清游离氨基酸含量的影响

选用21日龄断奶的杜×长×大仔猪60头,随机分为基础日粮组、添加0.2%中药复方日粮组和添加0.02%粘杆菌素日粮组,试验期为28 d,分别于试验开始后第7、14和28天每组随机取5头试猪,前腔静脉采血,分离血清,测定游离氨基酸含量。结果表明,中药复方日粮组的血清总氨基酸含量在第14天和第28天显著高于基础日粮组(P<0.05),必需氨基酸和非必需氨基酸值在第14天和第28天显著高于基础日粮组和粘杆菌素日粮组(P<0.05),赖氨酸、苏氨酸和蛋氨酸含量在第14天和第28天显著高于基础日粮组(P<0.05)。提示在日粮中添加0.2%中药复方能显著提高早期断奶仔猪血清游离氨基酸(尤其是必需氨基酸)的含量,有利于机体蛋白质的快速沉积及生长性能的提高。     

益生菌制剂对早期断奶仔猪生长性能和免疫指标的影响

分析益生菌制剂对早期断奶仔猪生长性能和免疫指标的影响,选择仔猪40头,将仔猪随机分为两组,基础饲料选择标准玉米-豆粕型,对照组饲喂基础饲料,观察组在基础饲料基础上添加益生菌饲料,仔猪断奶第0 d、第7 d、第14 d、第21 d采集新鲜粪样、前腔静脉血、回肠和空肠,测定仔猪生长性能以及血清、粪便、肠黏膜抗体含量。结果表明,在仔猪生长性能方面,观察组仔猪在最后重量、平均日增重量、腹泻率方面均明显高于对照组(P0.05);在仔猪血清、粪便、肠黏膜抗体含量方面,断奶后21 d观察组仔猪血清Ig G含量增加量明显更多(P0.05),粪便中Ig G含量两组对比差异不显著(P0.05),观察组回肠黏膜以及空肠黏膜SIg A含量明显更高(P0.05)。在早期断奶仔猪饲料中添加益生菌制剂,能够显著增强仔猪生长性能,提高仔猪血清Ig G、回肠黏膜以及空肠黏膜SIg A水平,增强仔猪机体免疫力。     

断奶及日龄对仔猪骨髓组织抗菌肽PR-39 基因表达的影响

分别于出生当天、3、14、23、28 日龄随机屠宰杜长大公猪4头，采集骨股骨髓组织。用RT-PCR方法，以18S rRNA作内标，定量分析不同日龄仔猪骨髓组织抗菌肽PR-39 mRNA表达的差异及断奶对其表达的影响。结果表明：不同日龄仔猪骨髓组织PR-39 mRNA 相对丰度有明显的差异(P < 0.05)。出生时较低，吮吸初乳2天后显著增加(P < 0.05)，14日龄时较3日龄显著下降(P < 0.05)，随后随日龄的增加，其表达量呈上升趋势；断奶导致其显著下降(P < 0.05)。     

仔猪水通道蛋白基因的克隆及断奶应激对其在胃肠道组织mRNA表达的影响

水通道蛋白(AQP)作为一种膜转运蛋白,对于调控肠道组织的水分子转运具有重要作用。本实验利用同源序列克隆法设计引物,从仔猪(Susscrofa)的消化道组织中克隆AQPs家族基因(AQP2~AQP11)(GenBank登录号分别为EU636238、EU161094、EU165525、EU192130、EU620575、EU024116、EU220426、EU220427、EU582021和EU220425),并对其进行生物信息学分析。采用荧光定量PCR研究断奶应激对于仔猪胃肠道组织中AQP1、AQP3、AQP8和AQP11的mRNA表达影响。生物信息学分析发现,猪AQPs家族基因含有高度保守的天冬酰氨-脯氨酸-丙氨酸(NPA)结构序列,基因表达分析发现,断奶组仔猪的AQP1基因在十二指肠、回肠和结肠组织的mRNA表达量与对照组相比显著上调(P<0.05);AQP3基因在胃和小肠组织的mRNA表达有显著上调(P<0.05);AQP8基因在胃和回肠组织中mRNA表达有显著上调(P<0.01),在其他组织中没有显著差异;AQP11基因在空肠组织的mRNA表达量显著上调了1.7倍(P<0.05)。这些研究结果表明,AQP基因可能在断奶应激引起的仔猪肠道腹泻中发挥重要作用。     

应用地高辛标记探针原位杂交方法检测仔猪小肠FcRn的表达

摘 要：【研究目的】旨在建立检测仔猪小肠FcRn表达的地高辛标记探针原位杂交的方法,研究FcRn在仔猪小肠各段的表达分布。【方法】根据GenBank公布的猪FcRn 重链（α链）mRNA基因保守序列设计并合成带地高辛标记的原位杂交试验用cDNA探针。经仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度选择,以及H2O2溶液祛除小肠组织中内源性辣根过氧化物酶作用对杂交结果的影响,选择合适的固定剂、细胞膜蛋白消化剂、杂交液和确定杂交反应的温度、时间以及杂交后处理等一系列试验条件优化,建立了检测仔猪小肠FcRn mRNA的原位杂交方法。【结果】①仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度为14 μm;②仔猪小肠内存在内源性辣根过氧化物酶,3％的H2O2溶液祛除该酶的效果良好,但在本研究中内源性辣根过氧化物酶的存在试验结果并无明显影响,无需祛除;③在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织的小肠腺和粘膜下层等部位存在棕黄色阳性颗粒,均检测到清晰的杂交信号。【结论】应用地高辛标记探针进行仔猪小肠FcRn mRNA的原位杂交方法检测效果良好;FcRn mRNA在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织等营养物质吸收部位均有表达,提示FcRn在这些部位的存在与肠道IgG转运的相关性。     

半定量RT-PCR法评定鸡小肠肽转运载体PepT1基因的表达

摘要：根据鸡肽转运载体cPepT1 mRNA和看家基因β-actin mRNA序列，分别设计cPepT1和β-actin 引物各1对，并通过Mg2+浓度、循环数等PCR条件的优化，建立了包括RNA提取、反转录、PCR的鸡小肠cPepT1基因表达检测方法。采用该方法研究了肉仔鸡cPepT1基因在小肠各段的表达差异。结果显示，肉仔鸡小肠cPepT1表达水平表现为随小肠近端到远端显著降低的趋势，回肠表达水平显著低于十二指肠和空肠，十二指肠和空肠差异不显著。     

日粮淀粉来源对断奶仔猪内脏器官蛋白质合成率的影响

应用稳定同位素L2-H5苯丙氨酸一次性大剂量(1.5mmol/kg)腹腔注射法,研究了日粮淀粉来源对断奶仔猪内脏器官蛋白质合成率的影响。结果表明,玉米淀粉促进了仔猪内脏器官蛋白质的合成,其蛋白质合成率高于糙米淀粉(P>0.05)和糯米淀粉(P<0.05)。其中十二指肠、空肠、回肠、结肠、胰脏和肝脏的蛋白质合成率分别比糯米的高85.87%、47.47%、37.29%、56.29%、43.55%和17.63%。     

Effects of dietary supplementation with cysteamine on growth hormone receptor and insulin-like growth factor system in finishing pigs

The present study was conducted to test the hypothesis that chronic cysteamine (CS) supplementation may affect serum insulin-like growth factor (IGF)-I concentrations and growth hormone (GH) receptor (GHR), IGF-I, IGF-I receptor (IGF-IR), IGF binding protein (IGFBP)-3, and insulin receptor (IR) mRNA levels in different tissues of finishing pigs. A total of 24 finishing pigs (60.05 +/- 1.24 kg; 12 gilts and 12 barrows) were assigned randomly to one of the three dietary groups, with four pens/group (per pen: one gilt, one barrow). The pigs were fed a basal diet containing 0 (control), 70, or 140 mg/kg cysteamine feed additive (containing 28% cysteamine hydrochloride) for 47 days. The results indicated that CS supplementation (70 mg/kg) increased the average daily gain (ADG) and serum IGF-I level, upregulated mRNA levels of GHR and IGF-I (liver, stomach, muscle), IGF-IR (stomach, duodenum, muscle), and IGFBP-3 (liver) but downregulated IGFBP-3 (stomach, duodenum, muscle). CS supplementation (70 mg/kg) did not affect mRNA levels of GHR and IGF-I (duodenum), IGF-IR (liver), and IR (liver, stomach, duodenum, muscle). CS supplementation (140 mg/kg) downregulated GHR (duodenum), IGF-I, and IGF-IR mRNA (liver, stomach, duodenum, muscle) but upregulated IGFBP-3 and IR mRNA (liver, stomach, duodenum, muscle) and did not affect ADG and serum IGF-I concentration. Collectively, the results suggest that dietary CS supplementation modulates the growth rate, serum IGF-I concentrations, and the gene expression of GHR, IGF-I, IGF-IR, IGFBP-3, and IR in a dose-dependent manner. CS supplementation has tissue-specific regulation of GHR, IGF-I, IGF-IR, and IGFBP-3 mRNA levels. Moreover, the results also imply the possible physiologic role of the GH-IGF axis in mediating the dietary CS supplementation-supported growth of finishing pigs.     

仔猪多胺代谢相关基因的克隆及断奶对其mRNA表达的影响

多胺是一类广泛分布于组织细胞内的天然低分子多价生物活性物质,在动物的消化、营养代谢以及正常生长中发挥重要作用。本实验克隆了猪(Susscrofa)的7个与多胺代谢相关的基因,分别是精氨酸脱羧酶(ADC)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鸟氨酸转氨酶(OAT)、鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白1~3(OAZ1、OAZ2、OAZ3)及多按调控因子-1(PMF1),基因片段长度分别是1602(GenBank No.EU545649)、1422(GenBank No.EU534186)、1465(GenBank No.EU404089)、874(GenBank No.EU545195)、678(GenBank No.EU545196)、667(GenBank No.EU545197)及703bp(GenBankNo.EU534185),开放阅读框的长度分别是1380、1383、1313、681、568、559和615bp,编码的氨基酸数目分别是460、461、439、227、189、186和205。经过比对分析,猪ADC基因编码的氨基酸序列与人、小鼠的同源性分别为89.7%和87%;猪ODC与人(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)和大鼠(Rattus norvegicus)的同源性分别为93.1%、89.8%和90.5%;猪OAT与人、小鼠的同源性分别为91.8%、90.5%和89.8%;猪OAZ1与人、大鼠及小鼠的同源性分别为93.4%、82.5%和83.8%;猪OAZ2与人、大鼠及小鼠的同源性分别为99.5%、98.9%和98.9%;猪OAZ3与人、小鼠和大鼠的同源性分别为90.4%、87.5%和84.2%;猪PMF1基因编码的氨基酸序列与人和小鼠的同源性为84%和70.9%。半定量RT-PCR分析表明,断乳后ADCmRNA的表达量在盲肠和直肠有所增加,其他各组织均有所降低;ODCmRNA的表达量在直肠和盲肠有较大增加,结肠、回肠和空肠的表达量均呈小幅降低;OATmRNA在肾的表达量有明显增加,十二指肠、空肠和回肠都有降低;除了胃,OAZ1mRNA在其他组织表达水平均有所增加;OAZ2mRNA的表达量在所有组织均有不同程度增加,盲肠居首;OAZ3mRNA在肠道组织的表达量均有不同程度增加;PMF1mRNA的表达量在结肠、空肠和回肠与抗酶家族相似,但断乳后有小幅降低。研究结果提示,多胺对仔猪的生长、发育、成熟、适应性和损伤后的恢复具有重要的生物学作用。