一个辣椒轻斑驳病毒中国分离物的基因组测序及分析

利用CTAB法分离辣椒叶片总RNA,利用RT-PCR技术扩增出了辣椒轻斑驳病毒中国分离物Hrb基因组不同区域片段。并经克隆、测序,证明其为辣椒轻斑驳病毒特异序列。经序列拼接,获得了6 290 nt的辣椒轻斑驳病毒中国分离物Hrb基因组全序列;该序列与GenBank中已报道的其他辣椒轻斑驳病毒基因组的序列同源性为94.0%～99.6%。系统进化分析显示辣椒轻斑驳病毒中国分离物Hrb与日本分离物(PMMoV-J、C-1421、Pa18、TPO-2-19)亲缘关系较近,与西班牙分离物Ia亲缘关系较远。     

间接原位RT-PCR法检测辣椒叶组织中辣椒轻斑驳病毒的分布

为了了解辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMoV）在辣椒组织中的分布特点,探索利用间接原位RT-PCR技术对病毒在辣椒组织中进行定位。利用改进的CTAB法从辣椒叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出PMMoV的特异片段,并经克隆测序,证明其为PMMoV的特异片段。利用PCR技术,制备出了地高辛标记的特异cDNA探针。对原位RT-PCR反应体系进行优化,经过切片制备（切片厚度7 μm、应用Superfrost plus正电荷防脱载玻片）、预处理（1 mg ? L-1蛋白酶K消化5 min）、RT-PCR（37 ℃反转录2.5 h、PCR退火温度为58 ℃）、杂交检测,建立了应用间接原位RT-PCR技术检测PMMoV在辣椒组织中分布的方法。原位RT-PCR结果显示,叶片组织中PMMoV阳性信号主要分布于栅栏组织,其次是海绵组织,表皮组织中也有少量阳性信号。此外,叶柄中可见少量阳性信号,主要位于表皮组织。     

分子标记辅助选育聚合烟草花叶病毒属病毒抗性基因(L4)及马铃薯Y病毒抗性基因(Pvr4)的甜椒自交系

烟草花叶病毒属(Tobamovirus)病毒是危害我国辣椒生产最重要的病毒之一,其中辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)近些年来危害日趋严重.L系列等位基因(L1、L2、L3、L4)是抗烟草花叶病毒属的主要抗性基因.为了提高辣椒品种烟草花叶病毒属病毒和马铃薯Y病毒(PVY)抗性,本试验分别以CM334(抗PVY,含Pvr4基因...     

甘肃省辣椒斑萎病毒的检测

在甘肃省兰州、白银、庆阳采集发病症状表现为植株矮化、叶片黄化、生长点坏死的辣椒病样，采用RT-PCR法和简易试纸条进行病毒检测。结果表明：通过RT-PCR法共检测出了6种病毒：辣椒环斑病毒（ChiRSV）、辣椒轻斑驳病毒（PMMoV）、辣椒斑驳病毒（PepMoV）、辣椒叶脉黄化病毒（PeVYV）、烟草轻绿花叶病毒（TMGMV）、番茄斑萎病毒（TSWV）；且在同一个病样上，存在多种病毒复合侵染的状况。利用简易试纸条进行检测，只检测出了TSWV，但检出率较高。表明，甘肃地区辣椒生产上侵染的病毒种类多，TSWV的发生越来越普遍和严重。     

利用siRNA高通量测序和RT-PCR技术鉴定引起茄子斑驳紫花病的病毒种类

为了明确引起茄子斑驳紫花病的病毒种类,利用小干扰RNA(si RNA)高通量测序技术,结合生物信息学方法寻找茄子样本中的病毒序列,发现存在烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)和番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus,ToMMV)。为了验证该结果,对待测样品中TMGMV和ToMMV的外壳蛋白(coatprotein,CP)全长基因进行RT-PCR扩增和系统进化分析,分别得到500bp的TMGMV-CP和482bp的ToMMV-CP特异性条带,与GenBank中TMGMV和ToMMV序列相似性分别达到98%～100%和100%,说明待测样品中确实存在TMGMV和ToMMV。对采自山东、河南、辽宁、河北等地的23份疑似斑驳紫花病茄子样品,分别采用特异性引物524-F/R和ToMMV-F/R进行检测。结果显示,所有样品中均含有TMGMV,20份样品中含有ToMMV,复合侵染检出率为86.96%。对茄子、番茄和辣椒幼苗的致病性检测显示,接种后茄子花表现出与田间相同的症状,茄子、番茄和辣椒的叶片表现典型的病毒侵染症状,在接种发病组织中检测到病毒ToMMV和TMGMV。结果表明,茄子斑驳紫花病样中鉴定出TMGMV和ToMMV两种病毒。     

广西辣椒病毒的sRNA深度测序和RT-PCR鉴定

采用小RNA(sRNA)深度测序技术，结合RT-PCR技术对广西9个辣椒主产区具有典型病毒病症状的病样进行检测，共发现10种病毒，其中小米椒内源RNA病毒1(Capsicum frutescens endornavirus 1,CFEV 1)、辣椒潜隐病毒2(pepper cryptic virus 2,PCV 2)、烟草轻型绿花叶病毒（tobacco mild green mosaic virus,TMGMV）和辣椒黄脉病毒（pepper vein yellows virus,PeVYV）是在广西辣椒上首次发现，且CFEV 1在中国是首次发现。10种病毒在75份辣椒病样中的总检出率为8.00%～66.67%，前5位依次为辣椒脉斑驳病毒（chilli veinal mottle virus,ChiVMV,66.67%）、甜椒脉斑驳病毒（pepper veinal mottle virus,PVMV,62.67%）、黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV,41.33%）、CFEV 1(32.0%)以及PCV 2(26.67%)。ChiVMV、PVMV、CMV和C...     

辣椒病毒病的发生与防治

辣椒病毒病是辣椒的最主要病害之一，对辣椒的为害极大。前期引起植株矮化、花叶、叶片黑色坏死脱落；后期引起丛枝、蕨叶、花蕾和幼果枯萎，整株黄化落叶。发病严重时，减产明显甚至绝收。现将其发生规律及防治方法简介如下。 一．田间识别 辣椒病毒病的症状主要是植株矮化，叶片褪绿或呈斑驳花叶。植株顶部叶片有时变小、狭长。叶脉、茎秆枝条上有时有褐色坏死斑。严重时叶片脱落，小枝生长点落光成“秃桩”，腋芽抽生呈丛簇状。辣椒病毒病主要由烟草花叶病毒（ＴＭＶ）和黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）引起。不同病毒引起的症状略有差异。 黄瓜…     

广东辣椒上首次检测到西瓜银斑驳病毒

2014 年在广东辣椒产区发现疑似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒侵染引起的辣椒褪绿坏死环斑症状。Dot-ELISA 检测显示,该病毒分离物与番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）单克隆抗体不产生血清学反应,表明该病毒不属于TSWV。利用Tospovirus 属病毒通用引物gL3637/gL4435C进行RT-PCR 检测,可以从所有辣椒病样总RNA 中扩增出预期大小约800 bp 的目的片段。基因克隆与序列分析表明,该片段序列与西瓜银斑驳病毒（Watermelon silver mottle virus,WSMoV）中国广州分离物的同源性最高,为97.5%。系统进化分析也显示,该病毒分离物与WSMoV 各分离物亲缘关系最近,并聚类在一个分支。因此,侵染广东辣椒的病毒分离物为WSMoV。     

辣椒抗番茄环纹斑点病毒的种质资源筛选

番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)是严重危害辣椒、番茄和烟草等经济作物的番茄斑萎病毒科病毒,选育抗病品种是防治TZSV的重要途径之一。本试验采用室内摩擦接种、病情指数调查、间接酶联免疫吸附法(ID-ELISA)对40个辣椒栽培品种进行TZSV抗性评价。结果表明,丰达108、海南黄灯笼椒对TZSV表现为抗病(R);大果灯笼椒表现为感病(S);其余37个品种表现为高感(HS)。     

辣椒胞质雄性不育系与保持系蕾期基因表达差异分析

 利用cDNA-AFLP差显技术比较分析了辣椒细胞质雄性不育系及其保持系蕾期基因的表达差异, 获得了19条阳性差异转录片段, 其中在不育系花蕾中特异表达的有4条, 在保持系花蕾中特异表达的有15条。通过对19条差异片段进行序列同源性分析与功能分类, 结果表明: 在不育系花蕾中特异表达的其中3条与番茄和烟草线粒体、核糖体代谢相关基因有很高的相似性; 在保持系花蕾中特异表达的12条能找到与其相似性较高的序列, 这些差异片段代表的基因涉及转录调控、防卫和胁迫反应、电子传递和能量途径、DNA或RNA代谢、蛋白质代谢、转运通道、未知或假定蛋白等。推测辣椒细胞质雄性不育的发生可能受到多种代谢途径的共同调控。