5种植物提取物抑制苹果树3种病原菌活性的研究北大核心

以苹果树腐烂病病菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)、苹果轮纹病病菌(Botryospuaeria berengeriana)、苹果斑点落叶病病菌(Alternaria alternata)为研究对象,采用生长速率法对侧柏、五倍子、藿香、百部和旋覆花5种植物提取物的抑菌活性进行了测定,并测定了5种植物提取物对3种病原菌中3种细胞壁降解酶活力的影响。结果表明,5种植物提取物对3种病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中侧柏对3种病原菌的抑制活性最高,抑菌率分别为74.34%、62.13%、65.36%,其次为五倍子和藿香;5种植物提取物对3种病原菌纤维素酶(Cx)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)都有一定的抑制作用。结合5种植物提取物对3种病原菌菌丝生长及病原菌细胞壁降解酶的抑制作用,侧柏可作为防治这3种病害进一步开发的植物源药剂。     

47种植物提取物对3种柑桔常见贮藏病害病原菌活性抑制作用研究

采用菌丝生长速率法测定了白附子等47种植物提取物对柑桔青霉菌Penicillium italicum、柑桔绿霉菌P.digitatum和柑桔酸腐病菌Oospora citri-aurantii等3种柑桔常见贮藏期病原真菌的离体抑菌活性。结果表明,以10mg/mL处理3天时,对柑桔青霉菌抑制作用较强的是川芎(又名川芎藁木)Ligusticumchuanxiong、侧柏Platycladus orientalis、苍耳Xanthium sibiricum和五加皮(又名五加)Acanthopanax gracilistylus的提取物,抑菌率均在97%以上;对柑桔绿霉菌抑制作用较强的是五加皮和侧柏的提取物,抑菌率分别为99.66%和98.33%;对柑桔酸腐病菌抑制作用较强的是独活(又名毛当归)Angelica pubescens、羌活Notopterygiumincisum和川芎的提取物,抑菌率分别为95.24%、94.38%和77.41%。其中,独活、川芎和五加皮的提取物对柑桔青霉病菌、柑桔绿霉病菌和柑桔酸腐病菌的抑菌活性显著高于其他植物的提取物,作用明显,且提取物气味芬芳。植物提取物抑菌活性的发现为植物源保鲜剂的研发奠定了基础。     

植物提取物对瓜类枯萎病菌的抑菌活性

以黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌和甜瓜枯萎病菌为供试病原菌，对27种植物的乙醇提取物进行了离体抑菌活性筛选，并采用盆栽活体试验测定了狼毒大戟、藿香、肉桂、黄檗等提取物对黄瓜枯萎病菌的生物活性。离体抑菌活性测定结果表明：27种供试植物提取物对3种病原菌的菌丝生长均具有一定的抑制作用，其中狼毒大戟、白屈菜、藿香、肉桂、黄檗、龙葵等提取物对3种病原菌的抑制率均可达70%以上。盆栽活体试验结果表明：狼毒大戟提取物对黄瓜幼苗抗枯萎病菌的预防效果和治疗效果均较好，分别达70.54%和57.89%|肉桂提取物对黄瓜幼苗抗枯萎病菌的预防效果、诱导抗病效果、治疗效果均可达50%以上|藿香提取物的诱导抗病效果最高达75.60%，而预防效果和治疗效果不明显|黄檗提取物的预防效果可高达83.33%，诱导抗病效果亦达55.55%，但治疗效果不明显。     

贝莱斯芽孢杆菌Mr12预防苹果轮纹病等病害的潜力及其全基因组分析

【目的】探究新疆野苹果内生贝莱斯芽孢杆菌Mr12对多种植物病害的生防潜力,明确其抑菌活性物质稳定性、抑菌作用表现和抑菌物质遗传基础,为生防制剂开发利用提供依据。【方法】采用平板对峙法测定菌株Mr12对6种供试植物病原菌的抑制作用。以苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)为供试病原菌,测定Mr12无菌滤液抑菌稳定性及无菌滤液对苹果轮纹病菌孢子萌发和菌丝生长的影响;利用3代测序平台Nanopore测定Mr12的全基因序列,通过BLASTX比对注释所含基因,预测分析菌株Mr12抑菌作用的遗传基础。【结果】菌株Mr12对6种供试植物病原菌均具有抑制作用,抑制率在55%～91%。该菌株无菌滤液在pH 4～10范围内抑菌活性稳定,对酸碱的耐受范围广;对紫外线照射和蛋白酶K不敏感,80℃以内具有较强的热稳定性。Mr12无菌滤液可使苹果轮纹病菌菌丝膨大畸形,抑制菌丝生长和孢子萌发。通过全基因序列信息分析,发现Mr12含有合成difficidin、fengycin、bacillibactin、surfactin等多种肽聚糖和聚酮糖类抗性化合物的基因簇,以及能够降解病原菌细胞壁的β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶相关的基因。【结论】菌株Mr12对多种植物病原物具有广谱拮抗作用,抑菌物质稳定性高,具有产生多种肽聚糖和聚酮糖类抗性化合物和细胞壁水解酶的能力。     

细辛精油对六种苹果病害的离体抑菌活性

细辛是一种重要的中草药,活性物质主要是挥发油.研究采用生长速率法和孢子萌发法测定了细辛精油对引起苹果病害的6种病原菌(灰斑病菌、褐斑病菌、斑点落叶病病菌、炭疽病菌、苹果轮纹病菌和干腐病菌)的菌丝生长和4种病原菌(灰斑病菌、褐斑病菌、斑点落叶病病菌、炭疽病菌)的孢子萌发的影响.结果表明,细辛精油对两者均有一定的抑制作用:对褐斑病菌菌丝生长的抑制效果最好,EC90仅为397.37mg/L;对炭疽病菌孢子萌发的抑制效果最好,EC90仅为276.77mg/L.对于同一种病原菌来说,细辛精油对其孢子萌发的抑制效果好于对其菌丝生长的抑制效果.     

枣黑斑病菌细胞壁降解酶活性测定及致病性分析

【目的】以枣黑斑病菌产生的细胞壁降解酶为研究对象,明确其产生细胞壁降解酶种类和活性,探讨细胞壁降解酶在病菌致病中的作用,为细胞壁降解酶参与病原菌侵染机理的研究提供理论依据。【方法】利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法和考马斯亮蓝(Bradford)法,通过紫外-可见分光光度计测定反应混合物吸光度,根据酶反应所释放的还原糖计算细胞壁降解酶活性。【结果】枣黑斑病菌在寄主体外不同碳源诱导下均能产生多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase, PG)、羧甲基纤维素酶(Carboxymethyl cellulase, Cx)、β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase)、木聚糖酶(Xylanase)、聚甲基半乳糖醛酸酶(Polymethylgalacturonase, PMG)和果胶甲基反式消除酶(Pectin methyltranseliminase, PMTE)等6种细胞壁降解酶(Cell wall degrading enzyme,CWDE),但细胞壁降解酶活性存在一定差异,以骏枣果肉为外源诱导物,枣黑斑病菌产生β-葡萄糖苷酶活性明显高于其他5种酶,说明β-葡萄糖苷酶在枣黑斑病菌致病过程中有着重要的作用,而以滤纸为诱导物产生的β-葡萄糖苷酶活性高于其他诱导物,其活性高达10.104 U·mg~(-1)。枣黑斑病菌侵染枣果后产生的细胞壁降解酶种类及活性与体外不同碳源诱导的结果一致,可产生6种细胞壁降解酶,其中β-葡萄糖苷酶活性高于其他5种酶,且病健交界处β-葡萄糖苷酶的活性明显高于受侵染后的发病部位和未被侵染的部位。【结论】枣黑斑病菌在致病过程中起关键作用的细胞壁降解酶为β-葡萄糖苷酶,且在侵染过程中病健交界处的活性最高,而在寄主体外诱导β-葡萄糖苷酶最佳碳源为滤纸诱导物。     

苹果轮纹病菌侵染机制的研究(英文)

苹果轮纹病菌(Botryosphaeriaberengrianaf.sppiricola)能在培养基及活体内产生一系列果胶酶:多聚半乳糖醛酸酶(PG)、聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)和果胶甲基反式消除酶(PMTE)。其中PG和PMG是降解果实胞壁的主要酶类,在整个致病过程中起重要作用。从结果可看出PG活性随着侵染的进展而升高,PMG的作用在侵染前期更大一些,2种果胶酶可能是引起被接种苹果果皮上还原糖变化的重要因素。接种与未接种果实果皮的pH值差异随侵染进程而降低,接种40d后,接种处pH值开始低于健康组织的pH值,这一变化可能造成细胞壁软化而有利于PG和PMG活动。接种后10～20d,PG活性及组织中还原糖的增长速度比其他阶段要快。对侵染点的病原组织学研究进一步表明,病菌产生的各种果胶酶不论是在侵染初期还是后期都是重要的致病物质。     

5种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内毒力测定

采用菌丝生长速率法在室内测定了5种杀菌剂对苹果轮纹病病原菌的毒力。结果表明,5种杀菌剂对苹果轮纹病病原菌菌丝生长均有较好的抑制作用,其中10%苯醚甲环唑微乳剂对苹果轮纹病病原菌的抑菌效果最佳,EC50(抑制中浓度)为0.0971mg/kg,其次为43%戊唑醇悬浮剂,EC50为0.2567mg/kg。     

嗜线虫致病杆菌HB310对五种苹果病原菌抑菌活性的影响

以苹果轮纹病菌、苹果腐烂病菌、苹果黑斑病菌、苹果斑点落叶病菌和苹果灰霉病菌为供试菌种,采用生长速率法和孢子萌发法测定嗜线虫致病杆菌HB310的发酵液和上清液对病原菌菌丝生长发育的抑制作用及对孢子萌发的影响。结果表明:嗜线虫致病杆菌HB310发酵液和上清液对苹果轮纹菌菌丝生长的抑制效果最好,抑制率分别为76.90%和80.79%。嗜线虫致病杆菌HB310发酵液致使苹果腐烂病原菌菌丝形态异常;浓度为50和25mL/L的嗜线虫致病杆菌HB310对供试苹果病原真菌的孢子萌发均有很好的抑制作用,抑制率均在98%以上。嗜线虫致病杆菌HB310对苹果病原真菌的菌丝和孢子均具有较好的抑制作用。     

杧果细菌性角斑病菌细胞壁降解酶的致病作用

【目的】从细胞壁降解酶的角度开展其致病机制的研究,探讨杧果细菌性角斑病在发病过程中产生细胞壁降解酶的种类及其在致病过程中的作用,以期为对该病害的有效监测和研发防控新技术提供理论依据。【方法】采用活体外诱导培养和病原菌接种处理,利用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)和紫外分光光度计法检测病原菌侵染过程中细胞壁降解酶活性变化,DDS-ⅡA型电导率仪测定叶片组织浸出液的电导率,并观测细胞壁降解酶对杧果叶片的致病作用。【结果】病原菌在改良的Marcus培养液和罹病组织中均能产生6种主要细胞壁降解酶,其中羧甲基纤维素酶(Cx)活性较高,多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)和β-葡萄糖苷酶次之,果胶甲基反式消除酶(PMTE)和多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)较低。病原菌接种杧果叶片后,6种酶活性显著升高,在病菌侵染前期(0~4 d),PMG接种后2 d达到最大活性高峰,酶活值为8.470 U?mg-1,以未含致病菌株的培养基接种杧果叶片作为对照,此时接种处理酶活值是对照的3.805倍;β-葡萄糖苷酶接种后4 d酶活性值最大,为15.190 U?mg-1,是对照的4.388倍。在病菌侵染后期(4~14 d),Cx、PG、PMTE和PGTE均在接种后的10 d达到最高峰,酶活性值分别为25.941、14.605、0.009、0.014 U?mg-1,是对照的2.672、14.634、12.571和4.121倍,在整个测定过程中,对照始终处于较低水平。此外,细胞壁降解酶对杧果叶片具有浸解作用,且浸解损伤程度与酶浓度成正比。【结论】细胞壁降解酶在病原菌的入侵和致病过程中起重要作用。果胶酶在病原菌侵染初期最早分泌并起作用,纤维素酶主要降解次生壁,致病作用发生在后期,并且果胶酶比纤维素酶对杧果叶片的致病作用明显。     

黄瓜棒孢叶斑病（褐斑病）病菌细胞壁降解酶产生条件及活性分析

通过对活体外细胞壁降解酶产生条件、活体接种黄瓜棒孢叶斑病菌后细胞壁降解酶活性变化及活体内外产生的细胞壁降解酶活性比较的研究,结果表明：多聚半乳糖醛酸酶（PG）、果胶甲基半乳糖醛酸酶（PMG）、多聚半乳糖醛酸反式消除酶（PGTE）、果胶甲基反式消除酶（PMTE）、羧甲基纤维素酶（Cx）和β-葡萄糖苷酶6种酶均有特定的最适培养条件,持续振荡培养利于各种细胞壁降解酶的产生;Cx和β-葡萄糖苷酶在培养9 d时活性达到高峰,PG和PMG在培养12 d时活性达到高峰,PGTE、PMTE在培养15 d时活性最高;PG和PMG产生的最适温度为25 ℃,PGTE、PMTE、Cx、β-葡萄糖苷酶产生的最适温度为28 ℃;PG、PMG、Cx和β-葡萄糖苷酶的活性在pH为6时最高,PGTE和PMTE的活性在pH为8时达到最高峰。4种果胶酶的活性在接种后第3天活性最高;而两种纤维素酶在接种后第5天活性最高。病菌在活体内和活体外产生的细胞壁降解酶的活性明显不同。     

多锰锌对苹果主要病害的防治效果

50 %多锰锌 (新·灵 )可湿性粉剂 5 0 0、 60 0、 70 0倍液室内对苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌菌丝生长及孢子萌发的抑制效果均为 10 0 % ,对苹果斑点落叶病菌菌丝生长及孢子萌发的抑制效果在 70 .2 1%以上 ,优于单剂代森锰锌、多菌灵 ;对上述 3种病菌的抑制中量 (EC50 )小于单剂 ,共毒系数均大于 2 0 0 ,增效显著。田间对果实生长期苹果轮纹病、炭疽病的防治效果分别为 97%～ 99.2 %、70 .9%～ 87.6% ;对苹果斑点落叶病和苹果褐斑病的防效在 81.12 %以上 ,显著优于单剂。对果实贮藏期苹果轮纹病和炭疽病的防治效果分别为 87.1%～ 95 .3%、 5 0 .5 %～ 86.2 % ,防效优于单剂代森锰锌 ,优于或相当于多菌灵。     

细胞壁降解酶在辣椒尾孢霉致病过程中的作用

以辣椒尾孢霉(Cercospora capsici Heald. et Wolf.)为供试菌,采用分光光度计测定辣椒尾孢霉产生的细胞壁降解酶种类;通过电导率测定及透射电镜观察以探索细胞壁降解酶的致病作用。结果表明,辣椒尾孢霉在活体内外均可产生多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)、果胶甲基反式消除酶(PMTE)和羧甲基纤维素酶(Cx)等细胞壁降解酶,而β-葡萄糖苷酶只在活体外产生,且该菌在活体内和活体外产生的细胞壁降解酶活性差异较大。透射电镜观察结果表明,细胞壁降解酶对叶片的超微结构有破坏作用,病菌细胞壁降解酶在致病过程中能够损伤寄主的细胞膜,从而影响其透性;就细胞膜损伤率而言,混合酶的作用显著高于单一酶,果胶酶对细胞膜的损伤明显强于纤维素酶。     

四季秋海棠炭疽病菌生物学特性及生防因子的筛选

以四季秋海棠炭疽病菌(Colletotrichum truncatum)为试验材料,采用菌落生长法和孢子萌发法,研究了不同培养条件对四季秋海棠炭疽病菌菌落生长和孢子萌发的影响;采用生长速率法研究了14种植物提取物对四季秋海棠炭疽病菌的抑制作用,以期明确该病原菌生物学特性,筛选对其具有抑菌活性的植物提取物,为该病害的防治提供参考依据.结果 表明:最适宜该病原菌菌丝生长的温度为25～30℃,pH 7,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为硝酸钠和甘氨酸.分生孢子萌发的最适温度是30～35℃,pH 6～7.丁香、石菖蒲、蛇床子提取物在2.0 mg·mL-1浓度下对菌丝生长具有较好的抑制作用,菌丝生长抑制率分别为100％、92％和90％,其它植物提取物抑制率在20％～85％.     

藁本提取物对2种柑桔贮藏病害病原菌的抑制作用研究

采用菌丝生长速率法,测定了藁本提取物对柑桔炭疽菌和柑桔绿霉菌的离体抑菌活性。结果表明,在藁本初提物浓度为3.500 mg/mL时,对绿霉病原菌抑制率为93.8%(培养3天)和85.4%(培养5天),对炭疽病菌抑制率为98.2%(培养3天)和91.71%(培养5天)。藁本提取物对炭疽菌的有效中浓度(EC50)分别为0.146 mg/mL(培养3天)和0.2109 mg/mL(培养5天);对柑桔绿霉菌的EC50为0.1544 mg/mL(培养3天)和0.3222 mg/mL(培养5天)。显微观察发现,藁本提取物处理后,2种病原菌菌丝出现扭曲、膨大、液泡增多、间隔改变及分枝增加等情况。藁本提取物抑菌活性的发现为进一步研究开发新型植物源农药提供了重要信息。     

苹果抗轮纹病机制研究进展

在中国引起苹果轮纹病的病原菌为葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea），其主要通过自然孔口直接侵染苹果，并分泌细胞降解酶等使苹果组织降解以促进病菌的进一步侵染，而苹果可通过增强细胞壁的木质化、释放抗菌化合物以及产生免疫蛋白等抑制病菌。通过对苹果轮纹病的危害及病原菌种类、病菌侵染机制、苹果的抗性机制等方面的详细综述，为有效防治苹果轮纹病提供理论依据。     

5种杀菌剂对苹果轮纹病病菌的室内毒力测定及田间药效试验

采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了10%苯醚甲环唑水分散粒剂、80%戊唑醇可湿性粉剂、80%异菌脲可湿性粉剂、80%代森锰锌可湿性粉剂和45%代森铵水剂对苹果轮纹病病菌的毒力,并测定了5种药剂对苹果枝干轮纹病的田间防效。毒力测定结果表明,5种杀菌剂对苹果轮纹病病菌菌丝生长均有较好的抑制作用,其中10%苯醚甲环唑水分散粒剂和80%戊唑醇可湿性粉剂抑制效果最佳,EC50分别为0.009 2、0.588 0 mg/L;80%代森锰锌可湿性粉剂、45%代森铵水剂和80%异菌脲可湿性粉剂对苹果轮纹病病菌的孢子萌发均有较好的抑制作用,EC50分别为0.357 2、0.364 9、0.432 7mg/L。田间药效试验表明,45%代森铵水剂100倍液对苹果枝干轮纹病的保护效果最好(防效为53.2%),80%戊唑醇可湿性粉剂6 000倍液的治疗效果最佳(防效为50.2%)。根据试验结果和药剂的特性,建议在夏季降雨之前使用代森铵等保护性药剂预防苹果轮纹病;而一旦降雨过后病原菌已经侵入枝干或果实,则要尽快使用内吸性杀菌剂如戊唑醇和苯醚甲环唑等进行治疗。     

中草药提取物对果蔬病原真菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法测定了19种中草药乙醇提取物对5种果蔬病原真菌的抑制活性.结果表明:在提取物浓度为0.1 mg/mL时,豨莶草对草莓软腐病菌、葛根和鸦胆子对苹果褐腐病菌有抑制作用,抑制率均在20%左右.射干对苹果轮纹病菌和苹果褐腐病菌的抑制率分别为21.47%和21.9%,EC50(有效中浓度)值分别为0.7928、0.9107 mg/mL.马兜铃对番茄灰霉病菌和苹果褐腐病菌的抑制率分别为28.39%和49.64%,EC50值仅为0.3732和0.1256 mg/mL.综合分析认为,马兜铃值得进一步研究开发.     

地衣芽孢杆菌对苹果轮纹病菌和炭疽病菌的抑制及其对贮藏期苹果轮纹病的防治作用

为了明确地衣芽孢杆菌W10及其抗菌蛋白对苹果贮藏期重要病害的防治作用,进行了对苹果轮纹病菌、炭疽病菌的抑制以及对轮纹病的防治试验。结果表明,W10菌液、培养滤液、抗菌蛋白对2种病菌的形态、菌丝生长、产孢和分生孢子萌发都有明显的破坏或抑制作用,其中抗菌蛋白的作用最强,5倍稀释液可以完全抑制病菌菌丝生长,20倍液对病菌产孢或分生孢子萌发的抑制率均达100%。菌液、培养滤液与抗菌蛋白对病菌菌丝形态的破坏作用相似,都可以使菌丝细胞原生质收缩、肿大呈泡囊状、细胞壁破损导致原生质外泄,甚至菌丝断裂。W10细菌液或抗菌蛋白能够明显抑制果实病斑的扩展,用其浸果后接种病菌,贮藏90 d时,抗菌蛋白对轮纹病的防效仍达到50.0%,与多菌灵效果相当。     

补骨脂种子提取物对苹果腐烂病菌的抑菌活性研究

旨在探究补骨脂种子提取物对苹果腐烂病菌的杀菌活性及田间防效。采用菌丝生长和孢子萌发抑制率法对补骨脂种子提取物的抑菌活性进行测定,得到的EC_(50)值分别为6.766、0.172 mg/L,说明补骨脂种子提取物对苹果腐烂病菌菌丝生长和孢子萌发均具有明显的抑制作用。田间试验表明,补骨脂种子提取物微乳剂稀释200～600倍液后,对苹果腐烂病菌引起的病斑进行刮疤涂抹处理,防治效果可达71%～81%。经田间系统观察,供试药剂在试验剂量范围内对苹果树生长发育无不良影响,使用安全。