苏云金杆菌以色列变种在不同培养基上的产毒能力

苏云金杆菌以色列变种Bacillus thuringiensis Var. israelensis(下称B.t.i.)是近年来发现的一株对蚊幼虫有高度毒效的微生物杀虫剂,也是苏云金杆菌类群中唯一对杀灭蚊虫具有实用意义的菌株。B.t.i对蚊幼虫的杀虫活性,主要在于蛋白质晶体,而营养条件对晶体的合成有着重要的影响。苏云金杆菌(下称B.t)不同血清型对培养基     

连续使用苏云金杆菌时蚊虫的敏感性测定

苏云金杆菌以色列变种(血清型H—14)(以下称苏云金杆菌H—14)对蚊幼虫有高度毒效,国内外已做了很多不同规模的现场试验,国外已有几种剂型的商品,具有较好的应用前景。由于苏云金杆菌H—14的毒性机制主要是蚊幼虫吞食本菌的伴孢晶体,这与感染性因子有所不同,而有些类似于化学杀虫剂。为了预测在连续使用的情况下,     

一株对金龟子类幼虫具有杀虫活性的苏云金杆菌新分离株

从河北省土壤中分离获得一株苏云金杆菌新分离株ＨＢＦ－１,对其基本生物学特性和知性进行了研究。结果表明,该菌株对黄褐丽金龟幼虫具有特异高杀虫活性,对铜绿丽金电幼虫也表现出较高的杀虫活性。但对棉铃虫和玉米螟等鳞翅目幼虫,以及鞘翅目叶甲科的柳叶甲无杀虫活性。该菌株不产生β－外毒素。其生长对氨基酸需求的测定结果表明,异亮氨酸可抑制缬氨酸和亮氨酸的生物合成代谢,在异亮氨酸的存在下,该菌株对缬氨酸和亮氨酸具有     

一种从土壤中分离苏云金杆菌的新方法

本文报道一种从土壤中分离苏云金杆菌的新方法。采用４％ＮａＣｌ培养液振荡培养４小时，抑制了大部分芽孢杆菌的发芽，从而大大提高了Ｂｔ菌株的分离率。     

苏芸金杆菌血清型14灭蚊幼虫研究(简报)

消灭蚊虫具有重大的意义。长期以来,使用化学药物灭蚊,取得了一定成绩,但由于蚊虫产生了抗药性,导致药效降低,而且污染环境,贻害人畜。近年来,国内外都在寻找灭蚊的新方法、新途径。美国Goldberg(1977)从以色列Negev蚊虫孳生地的池塘或河岸干土与湿土中分离出一种产生晶体的芽孢杆菌,对蚊幼虫毒性很高,后经法国de Barjac(1978)鉴定为苏芸金杆菌以色列变种,血清型14(Bacillus thuringiensis var. israelensis,H—14)。由于本变种具有毒杀各种蚊幼虫的高度毒力,近年来,法国、美国、苏联和我国已先后研制出工业生产的菌粉制剂。我们于1979年开始从武汉     

苏云金芽胞杆菌JQ23的表型鉴定及对韭菜迟眼蕈蚊的防治效果

韭菜迟眼蕈蚊是韭菜生产上的重要害虫,实验室从河南省采集的土样中分离获得1株对韭菜迟眼蕈蚊幼虫高毒力的Bt新菌株JQ23。经BiologGENⅢ细菌鉴定系统分析菌株JQ23为苏云金芽胞杆菌,相似率为0.596;通过室内生物活性测定,明确菌株JQ23对韭菜迟眼蕈蚊2龄幼虫72h的LC₅₀值为8.38×10⁶芽胞/mL;经室内盆栽防治试验结果表明,菌株JQ23在1×10⁷芽胞/mL浓度下,采用滴灌法连续用药3次,间隔7d,对韭菜迟眼蕈蚊的防治效果达到86.28%;经春季田间小区试验,再次验证菌株JQ23在1×10⁸芽胞/mL浓度下,采用滴灌法连续用药3次,间隔7~10d,对韭菜迟眼蕈蚊的防治效果达到66.75%。由此可见,菌株JQ23能够有效地控制韭菜迟眼蕈蚊的虫口数量,减少作物的受害率,达到较好的防治效果。     

苏云金杆菌芽孢与晶体不同配比对亚洲玉米螟的毒效

苏云金杆菌3个变种的芽孢与晶体按重量百分比混合,以亚洲玉米螟1龄和2龄幼虫测定毒力。对1龄幼虫主要致病因素是晶体。对2龄幼虫,“HD—1”以晶体为主;SB—14菌株当芽孢与晶体1:1时,杀虫效果最好;E743—4菌株以芽孢为主。     

芽孢杆菌剂与苏脲1号对家蝇幼虫的协同作用和持效

实验室研究结果表明,苏云金杆菌CT—43和YBT—127菌株的孢晶素粉对家蝇幼虫的效果分别为65％和40％,明显高于森田芽孢杆菌的效果(5％),在多种混合应用的组合中,只有CT—43菌株的孢晶粉与苏脲Ⅰ号混合应用有明显的协同作用。苏云金素混入家蝇饲料中在培养室保存15天,对蝇幼虫的毒力没有下降,其他菌剂和苏脲Ⅰ号的毒效均明显下降。改进苏云金杆菌的孢晶素制剂,用于防治家蛹幼虫是有效可行的。     

苏云金杆菌Bt-59菌株Cry/Cyt毒素蛋白鉴定及杀虫活性

苏云金杆菌以色列亚种（Bacillus thuringiensis subsp.israelensis，Bti）是防治蚊幼虫的重要病原细菌，不同菌株间毒素蛋白种类和分布不尽相同。本研究利用苏云金杆菌以色列亚种Bt-59菌株的全基因组数据，对潜在的毒素基因种类、分布及菌株杀虫活性进行了分析。结果表明，Bt-59菌株除了含有Bti标准菌株主要毒素基因外，还含有Cry4-like基因，且Cry10Aa和Cyt1Ca基因在质粒4上发生了易位。质粒5上的Cry60Aa和Cry60Ba基因编码的毒素蛋白含有ETX_MTX2结构域，并与苏云金杆菌jegathesan亚种的同源蛋白一致性为100%。Cyt1Ca蛋白除了含有Bac_thur_toxin结构域外，还含有2个串联的RicinB_lectin_2结构域。菌株Bt-59对蚊幼虫具有较高的杀虫活性，对白纹伊蚊Aedes albopictus和淡色库蚊Culex pipiens pallens的LC₅₀分别为1.239 μL/L和0.341 μL/L。研究结果明确了菌株Bt-59毒素蛋白的种类和特征，为菌株遗传改良提供理论基础。     

一种有希望的微生物灭蚊剂(简报)

目前世界各国正在研究应用病原微生物防治蚊虫的可能性。1977年Goldberg从以色列蚊虫孳生的水塘泥土中分离出对蚊幼虫毒性高的杆状细菌。经对按蚊、伊蚊和库蚊等儿种蚊幼虫的毒力试验,其毒力比效果较好的球状杆菌(Bacillus sphaericus)大30～100倍。后经de Barjac(1978)鉴定为苏云金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis     

苏云金芽胞杆菌一新菌株的鉴定及其杀虫活性

为分离并鉴定对亚洲玉米螟具有高毒力的苏云金芽胞杆菌菌种,通过棋盘式采集法从吉林省农业科学院试验田土壤中分离获得野生菌株,进行了形态、生化特性、伴孢晶体观察及基因型鉴定,并测定了其对3种鳞翅目害虫的室内生物活性。结果显示:该菌株在LB培养基上为圆形、暗白色菌落,边缘不整齐,革兰氏染色阳性,产生的伴孢晶体形状多为不规则形。16S r DNA序列与苏云金芽胞杆菌属的NBRC 13865同源性达99%;该菌株为cry2+cry9复合基因型,编码氨基酸序列与Cry2Ab和Cry9Ea蛋白同源性分别为94%和99%,鉴定为苏云金芽胞杆菌,命名为JN001。该菌株对亚洲玉米螟具有较高毒性,以1.0×109个/m L菌体浓度接种3龄幼虫72 h后,其校正死亡率为95.06%,致死中浓度(LC50)为4.12×103个/m L菌体,而对斜纹夜蛾和粘虫毒性较弱,接种72 h后校正死亡率分别为12.88%和7.34%。表明该菌株是1株对亚洲玉米螟具有较强毒力的苏云金芽胞杆菌新菌株,具有较好的开发利用潜力。     

苏云金杆菌Tm13—14菌株的生物学和对昆虫的毒性

本文报道从黄粉虫死亡幼虫体中分离到一株苏云金杆菌Tm13-14菌株。经鉴定为BtH_1血清型,晶体型为含有thu(H_1)、K-1(H_3ab)和tol(H_9)晶体抗原的复合型。该菌制剂的毒力测定表明,对鳞翅目、双翅目和鞘翅目的某些昆虫具有毒性。     

生物农药防治双孢蘑菇菇蚊菇蝇效果初探——以苏云金杆菌以色列亚种为例

为指导双孢蘑菇菇蚊菇蝇的科学防治,保障农产品质量安全,采用室内培养与田间试验的方法,对生物农药苏云金杆菌以色列亚种开展室内生测试验与田间药效试验。室内生测试验表明,1 000ITU/mg苏云金杆菌(以色列亚种)对菌蛆(短脉异蚤蝇)的致死中浓度LC_(50)为7.314 8ITU/mg,田间药效试验结果表明,在菇蚊菇蝇发生严重的情况下,800ITU/mg苏云金杆菌(以色列亚种)悬浮剂500~1 000倍对菇蚊菇蝇的防效在59.4%~76.8%之间。从持效期和农药使用准则考虑,在生产中可选用800ITU/mg苏云金杆菌(以色列亚种)悬浮剂稀释500~1000倍液,在菇蚊菇蝇低龄幼虫盛发期喷雾使用。     

两株球形芽孢杆菌的生物学和对致乏库蚊的毒力

我们证明了球形芽孢杆菌Bacillus sphaericus Neide(简称B·s)1593和MR—4菌株的生化特性和酯酶型相同,但其血清型分别属于球形芽孢杆菌血清型H5a5b和H25。这两个菌株在(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)种培养基中的生长曲线。用致乏库蚊Culex fatigans 2龄幼虫进行生物测定,结果1593和MR-4菌株对致乏库蚊幼虫的毒杀作用强于苏芸金杆菌以色列变种1897;于Ⅲ号培养基上的细菌制剂毒力高于其它培养基上的制剂,我们还证明这两个制剂能持续二天以上的杀蚊效果。本文还讨论了幼虫虫龄、喂食和冻融作用对B·s.毒力的影响。蚊类是疟疾、丝虫病、病毒性脑炎、黄热病和登革热等病的媒介,给人类的健康造成了严重的威胁。为有效地消灭或控制蚊类,开展微生物防治是很重要的。蚊类的病原菌——球形芽孢杆菌B·s.分布于世界各地(士山彬,1980;Singer,1980;Davidson等1981)。目前有关它的形态和生物学特性、对各种蚊幼虫的毒力及引起蚊幼虫的病理变化均有研究。有的学者根据DNA同源现象将B.s.分为遗传学上的5个群。按噬菌体分型,有病原性的B.s.可分为4群。de Barjac证实鞭毛抗原分型与噬菌体分型有平行关系(Singer,1980;Davidson等,1981)。十余年来对B.s.1593菌株研究较多,但对B.s.MR—4菌株仅有零星报道,且所涉及的蚊种也很有限。我国蚊类为害严重,而对蚊类这一病原几乎未作系统的研究。作者对B.s.1593和MR—4菌株的生物学特性、两菌在三种培养基中的发酵性能及其对致乏库蚊幼虫的毒力进行了对比,还观察了不同虫龄的敏感性和生物测定中添加饵料与否对其药效的影响。在我国蚊类的微生物防治中,对高毒力菌株及获得高毒效制剂的培养基的选择,对野外试验中某些应用技术的确立有所裨益。     

对小地老虎具有杀虫毒力的苏云金芽孢杆菌菌株的分离及鉴定

从我国3种典型植被覆盖的6个地区的土壤样品分离得到了348株苏云金芽孢杆菌菌株,采用杀虫活性测定方法从中获得了32株对小地老虎具有高毒力的菌株。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这32株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白基因类型和晶体蛋白表达情况,对小菜蛾、二化螟、棉铃虫的杀虫活性测定也证明了苏云金芽孢杆菌cry基因类型、表达蛋白及杀虫活性间的相关性。     

苏云金杆菌新菌株对金龟子幼虫的毒力比较

金龟子类幼虫是一类重要的地下害虫,可危害农、林、果、菜、草等多种植物。由于这类害虫危害植物地下部分或地面附近根茎部分,具有一定的隐蔽性,而且分布广,也是难以防治的世界性害虫。随着人们对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,以下简称Bt)资源调查与研究的深入,新的具有特异杀虫谱的Bt菌株陆续被发现。1992年,Ohba等在世界上首次从土壤中分离筛选出对金龟子幼虫具有特异杀虫活性的Bt新菌株BuiBui。笔者于     

苏云金芽胞杆菌GS8菌株的生物学特性及其cry基因型鉴定

采用桑叶浸渍法和饲料表面覆盖法测定发现,从土壤中分离的一株苏云金芽胞杆菌菌株GS8对家蚕Bombyx mori、甜菜夜蛾Spodoptera exigua和棉铃虫Helicoverpa armigera初孵幼虫均表现出较高的杀虫活性,经形态学和生理生化反应鉴定该菌株为东北亚种(Bacillus thuringiensis subsp.tohokuensis)。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,GS8菌株的杀虫蛋白晶体主要由分子质量为130、81和60 kDa的蛋白组成。聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴定结果显示,GS8菌株含有 cry1Aa、cry1Ab、cry1Ib、cry2Ab和cry9Ba 等基因。     

B.t.杀虫剂的发展、问题及对策

一.B.t.杀虫剂的发展历史1901年日本细菌学家 S.Ishiwata 从患病的家蚕幼虫分离得到了一种芽孢杆菌,并在1905年发表的另一报告中称之为“猝倒芽孢杆菌”。但直到1911年 Berliner 从德国苏云金地区谷仓中的患病地中海粉螟幼虫上分离得到了另一株类似的细菌之后,1915才正式将此昆虫病原细菌命名为“苏云金杆菌”(Bacillus thuringiensis)。简称 B.t.。     

球形芽孢杆菌杀蚊毒素的作用方式和蚊虫的抗性特征

球形芽孢杆菌（Bacillussphaericus）是一种对蚊幼虫有毒杀作用的好气芽孢杆菌。高毒力菌株在芽孢形成过程中能产生有51．4和41．9kDa蛋白组成的伴孢晶体。蚊幼虫取食芽孢／晶体混合物后,晶体蛋白被降解形成活性蛋白而结合到中肠上皮细胞的特异性结合位点上,最后导致蚊幼虫死亡;低毒力菌株和部分高毒力菌株在其营养体生长阶段可产生可溶性的100、30．5和38．5kDa的Mix毒素（Mtx1、Mtx2和Mix3）。该毒素同晶体毒素和其它杀虫毒素无同源性,其杀蚊作用机理不详。在实验室和野外长期高选择性压力下,蚊幼虫会通过中肠上皮细胞二元毒素特异性结合位点的改变而对球形芽孢杆菌产生不同水平的抗性,其抗性特性是由位于染色体上的单一隐性基因决定的。本文简述了球形芽孢杆菌的杀蚊毒素的作用方式及抗性蚊虫的抗性特性。     

夜蛾科昆虫高毒力苏云金杆菌菌株的分离和筛选

从山东省采集的750份土样中分离出苏云金芽孢杆菌菌株57株,这些菌株的晶体形态主要有菱形、圆形等。以夜蛾科害虫粘虫和甜菜夜蛾初孵幼虫为试虫,通过生测筛选出一株高毒力菌株QCL-1。菌株QCL-1对甜菜夜蛾的毒力显著高于标准菌株HD-1,对粘虫的毒力与HD-1相当。