果树果实总RNA提取方法的改良研究

植物总RNA的提取尽管已成为一种常规的技术,但由于果树果实材料的特殊性,其RNA的提取至今没有一种比较理想的技术和方法。本研究在以往CTAB方法的基础上,对其进行改良以探讨一种适于果实总RNA提取的通用方法,从而为果实分子生物学研究奠定基础。研究结果表明,在提取缓冲液中加入PVP和β-巯基乙醇,使其终浓度分别为16%和3%,在匀浆上清液中加入1/3体积5 mol/L KAC(pH4.8),可有效地提高RNA提取的质量。利用改良后的CTAB法成功地从苹果、桃、草莓和葡萄果实中提取出总RNA。经过紫外、电泳、反转录分析结果表明,该改良的CTAB法是一种适合果实总RNA提取的首选方法。     

改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA

为了从成熟的肥城桃果实中提取纯净完整的RNA,本试验在原CTAB法的基础上进行了改进,并对RNA的完整性、产率和纯度等方面进行评价。结果表明,采用改良CTAB法所得RNA完整性好,条带清晰,无明显降解,28S和18S rRNA的亮度比约为2：1,A260／A280达1．89,且产率较高,为356．21ug/g,经RT—PCR后得到一特异条带,表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

番茄果实总RNA提取方法的定量比较分析

番茄果实富含多糖和酚类等次级代谢物质， RNA提取难度较大。为了获取高质量的RNA进行分子生物学研究，分别采用改进CTAB法和4种植物RNA抽提试剂盒提取总RNA进行比较分析。结果表明，柱式试剂盒提取的RNA质量和产量较高，且操作简便，但需进一步纯化。利用RT PCR技术，采用试验提取的RNA，成功克隆出 NAC15基因片段并进行定量分析，进一步表明RNA品质可以满足定性定量分子生物学研究。     

橄榄果实总RNA提取方法的比较

针对橄榄果实富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物的特点,采用百泰克总RNA抽提试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取橄榄果实总RNA,用紫外分光光度计测定其纯度,并用琼脂糖凝胶电泳检验其完整性。结果表明,CTAB法提取的RNA纯度高,完整性较好,受多糖多酚影响较少,且无DNA和蛋白质污染,适宜用于后续研究。     

罗汉果果实总RNA提取方法的比较研究

针对罗汉果果实富含多糖和多酚类物质的特点,以广西罗汉果代表种质青皮果种的果实为材料,比较了改良Trizol法、改良异硫氰酸胍法、改良CTAB法和常规Trizol法4种不同的总RNA提取方法的提取效果。结果表明,改良Trizol法所提取的RNA呈现28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3条清晰的谱带,且28S条带宽度接近18S的2倍,纯度高（D260/D280=201;D260/D230=202）,完整性好（RIN=950）,得率为（26000±1947） μg·g-1。RT\|PCR结果进一步表明,改良Trizol法提取的RNA完全能够用于后续的分子生物学研究。     

山葡萄总RNA提取方法的比较

以山葡萄成熟果皮及叶片为材料,对改良CTAB法,SDS法和Trizol法3种不同的总RNA提取方法进行了比较。结果表明,SDS法和Trizol法提取的总RNA均有拖带现象,有部分降解,Trizol法提取的总RNA中有DNA的污染;改良CTAB法提取山葡萄叶片和果皮的总RNA带形完整,28SrRNA和18SrRNA的荧光亮度接近2：1,A260／280值为1．8～2．0,该方法提取的总RNA纯度和提取量最高,提取出的总RNA可用于进行RT-PCR、构建cDNA文库等分子生物学的研究。     

菠萝果实不同部位总RNA提取方法比较

以不同发育时期和不同部位的菠萝果实为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA差异明显,其中改良SDS法的效果最佳,其提取的RNA质量较好,无DNA污染,OD260/OD280和OD260/OD230接近2.0,产量达到464.3μg/g.FW以上,该方法提取的RNA能满足RT-PCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究的需要。     

葡萄花序总RNA提取方法研究

[目的]为筛选出提取葡萄花序总RNA的最佳方法。[方法]以藤稔葡萄花序为试材,针对葡萄花序中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了CTAB法、SDS／酚法以及经改良的CTAB法对藤稔葡萄花序总RNA的提取效果。[结果]3种方法均能从葡萄花序中提取到总RNA。其中,经改良的CTAB法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,获得纯度高、完整性好的总RNA。其28srRNA亮度约为18SrRNA的2倍,RT—PCR分析表明：该方法提取的总RNA适合于下一步的研究。[结论]经过改良的CTAB法提取葡萄花序总RNA的效果最佳。     

顽拗植物龙眼果皮中总RNA的提取方法研究

【研究目的】为建立适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA提取的方法;【方法】采用TRIzoL法、Tris-硼酸法和改良CTAB法提取龙眼果皮的总RNA。并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质;【结果】改良CTAB法、Tris-硼酸法所提取的RNA经电泳检测。28SrRNA和18SrRNA条带清晰。RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致。说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRJZOL法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带;【结论】改良CTAB法和Tris-硼酸法适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA的提取。     

龙眼组织总RNA提取与纯化方法的研究

针对龙眼组织富含多糖、单宁、色素及酚类物质的特点,采用改良的SDS法和CTAB法进行龙眼顶芽、叶片和茎皮3种组织总RNA的提取与纯化研究。结果表明。两种方法提取的总RNA均具有28、18、5S3条清晰、完整的条带,且无降解现象;A260／A280均介于1．8-2．0之间。A260／A230均大于2．0。说明改良的SDS法和CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度。可以满足后续分子生物学研究的要求。     

红肉桃果实总RNA提取方法的研究

以红肉桃果实为材料,采用Unizol总RNA提取试剂盒、CTAB法、冷酚法和改良SDS法4种方法分别提取果皮和果肉中总RNA,以期获得提取红肉桃果肉中总RNA的最适方法。比较,发现改良后的SDS法更适合于红肉桃果实总RNA的提取。此方法所得RNA完整性好,纯度和浓度均较高,可用于RT-PCR分析研究及后续实验。     

蟠桃果实发育成熟过程中果肉细胞超微结构的变化

[目的]研究两种不同熟期蟠桃果实发育成熟过程中细胞超微结构的变化.[方法]以早露蟠桃和英格尔蟠桃为材料,采取盛花后不同发育时期的果实确定单果重变化趋势,并据此对相应发育时期果实果肉组织进行固定切片、透射电镜观察.[结果]早露蟠桃在果实发育初期及果重迅速增大期超微结构差异不大,细胞壁结构完整;果实发育后期细胞壁中胶层开始溶解,至盛花后70 d时细胞壁明暗分区结构已丧失;英格尔蟠桃在果实发育后期可观察到结构完整的线粒体等细胞器,至盛花后110 d仍可观察到细胞壁的明暗分区结构.[结论]细胞超微结构分析认为英格尔蟠桃耐贮性优于早露蟠桃;英格尔蟠桃果实的适宜采收期可根据采后用途的不同来确定.     

新疆巴旦木花药总RNA的提取

[目的]建立一种有效的巴旦木花药总RNA提取方法,为巴旦木花粉SFB基因克隆和自交不亲和机制研究奠定基础.[方法]利用改良的CTAB法从巴旦木(Amygdalus communis L.)花药中提取高质量的总RNA.[结果]该方法获得的巴旦木花药总RNA完整性好、无多糖和蛋白质的污染,产量较高(鲜花药为283.44 μg/g),OD260/OD280在1.89～1.99,OD260/OD230>2.0.提取的巴旦木花药总RNA反转录成cDNA,以SFB(S-haplotype-specific F-box gene)基因简并引物PCR扩增,获得了目的片段.[结论]改良的CTAB法是一种简单、快速有效的巴旦木花药总RNA提取方法,提取的花药总RNA能够满足巴旦木进一步的分子生物学研究.     

新疆早露蟠桃果实的生长发育特性

以蟠桃(Prunus persica L. Batsch)品种早露为试材,研究了果实发育过程中纵横径、单果鲜重、可溶性固形物、可滴定酸、总糖、还原糖及抗坏血酸含量的变化.结果表明:新疆早露蟠桃果实发育期为盛花后60～70 d;果实发育过程中纵横径的变化与单果鲜重变化趋势一致,呈正相关;可溶性固形物含量与总糖含量变化趋势一致,即前期逐渐升高,至60 d后下降;此外,还原糖及抗坏血酸含量也表现出先升后降的变化趋势,而可滴定酸含量则在整个发育期呈逐渐下降趋势;由此认为,早露蟠桃在新疆乌鲁木齐地区能较好地保持品种特性,果实适宜的采收时期为盛花后60 d左右,口感风味较佳.     

新疆蟠桃采后主要致腐病原真菌的分离与鉴定

通过对新疆蟠桃采后贮藏中发病的果实进行病原真菌的分离,鉴定后确定新疆蟠桃采后主要致腐病原真菌为:根霉属(Rhizopus)、镰孢属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus).     

山药叶片总RNA提取方法的比较

[目的]提取高质量的山药叶片总RNA。[方法]以山药叶片为材料,采用异硫氰酸胍法、改良CTAB法提取山药叶片总RNA并进行比较分析,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度。[结果]改良CTAB法提取的总RNA的28S、18SrRNA条带清晰、整齐,测得A260/A280为1.72.0。[结论]改良的CTAB法适合山药叶片总RNA提取。     

改良CTAB法提取高质量香蕉叶片总RNA

以巴西香蕉叶片为试验材料,采用改良CTAB法提纯香蕉叶片总RNA.结果表明,改良CTAB法提取的香蕉叶片总RNA的28S、18SrDNA条带清晰、整齐,A260/A280值大于2.0,无需任何纯化处理即可用作香蕉MuACTIN基因的扩增模板,经RT-PCR扩增获得了带型清晰的目的条带,说明利用此法分离的RNA纯度和浓度符合RT-PCR的要求;而CTAB法提取的总RNA产量较低,且纯度不高.说明改良CTAB法能有效从富含多酚和多糖的香蕉叶片中提取高质量的总RNA.